氣相色譜法測(cè)定奧美拉唑中三乙胺殘留

姜小林 傅志慧 應(yīng)志洪 吳寧蘋(píng)

（浙江省金華康恩貝生物制藥有限公司，浙江 金華 321016）

三乙胺（triethylamine）是一種毒性較大的有機(jī)溶劑。美國(guó)藥典和中國(guó)藥典并沒(méi)有將其列入毒性有機(jī)溶劑控制范圍，但歐洲藥品質(zhì)量委員會(huì)（EDQM）特別規(guī)定了三乙胺的限度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.32×10-3），要求生產(chǎn)企業(yè)在藥品質(zhì)量中進(jìn)行嚴(yán)格控制。奧美拉唑的生產(chǎn)工藝中使用三乙胺調(diào)整pH，因此三乙胺將列入有機(jī)殘留檢測(cè)。

目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中均沒(méi)有關(guān)于奧美拉唑及結(jié)構(gòu)相似的其他藥物中三乙胺的檢測(cè)報(bào)道。常規(guī)的頂空進(jìn)樣法可以快速地檢測(cè)三乙胺[1]。但硅鋼類(lèi)金屬轉(zhuǎn)移管路對(duì)三乙胺有吸附作用，安捷倫等公司的絕大多數(shù)氣相色譜儀不適用于三乙胺的頂空方法檢測(cè)。因此應(yīng)研究一種可靠適應(yīng)的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

Agilent 7890氣相色譜儀（FID檢測(cè)器）；三乙胺、正庚烷和甲苯，均為色譜純；氫氧化鈉為分析純；奧美拉唑原料由浙江金華某公司生產(chǎn)。

1.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

色譜柱：Agilent HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm×φ1.0 μm，聚乙二醇 20000）；程序升溫（初始溫度為40℃，保持10 min，再以30℃/min的速率升至200℃，保持3 min）；載氣為氮?dú)?（恒流），體積流量4.0 mL/min；分流體積比20:1；進(jìn)樣口溫度200℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度250℃，進(jìn)樣量1 μL。注入對(duì)照液，三乙胺峰與正庚烷峰之間的分離度不大于2.0，柱效不得低于5 000；拖尾因子不得大于1.5；重復(fù)進(jìn)樣5次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于5.0%。

1.3 測(cè)定方法

內(nèi)標(biāo)溶液的配制：精密移取正庚烷0.5 mL，用甲苯稀釋至100 mL；精密移取1.0 mL加甲苯稀釋至100 mL。

三乙胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制：精密稱(chēng)取三乙胺對(duì)照品約0.1 g，用水稀釋至100 mL。精密量取1 mL該液，用水稀釋至10 mL。

對(duì)照溶液的配制：精密移取三乙胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，加入2 mL濃度0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液，加入2 mL內(nèi)標(biāo)溶液，振搖2 min后，取上清液。

樣品溶液的配制：精密稱(chēng)取奧美拉唑約0.3 g置10 mL具塞試管中，加入2 mL濃度0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液超聲溶解，加入1 mL水，加入2 mL內(nèi)標(biāo)溶液，振搖2 min后，取上清液。

空白溶液：取1 mL水置10 mL具塞試管中，按對(duì)照溶液同法操作。

三乙胺測(cè)定：精密吸取按上述方法配制的對(duì)照溶液和樣品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算奧美拉唑原料中的三乙胺含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性考察

取1.3節(jié)中配制的空白溶液和對(duì)照溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性色譜Fig 1 GC chromatograms for system suitability test

圖1結(jié)果表明，空白溶劑不干擾三乙胺的測(cè)定。三乙胺峰的理論板數(shù)為6179，拖尾因子為1.4，與正庚烷的分離度為5.34，符合系統(tǒng)適用性要求。

2.2 線性關(guān)系

分別移取三乙胺對(duì)照品適量，加水逐步稀釋成不同質(zhì)量濃度的三乙胺標(biāo)準(zhǔn)液（4.8～143.6 μg/mL），移取1 mL上述各溶液，按1.3節(jié)中方法配制成不同含量的對(duì)照液。分取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度對(duì)三乙胺與正庚烷峰面積之比作線性回歸，得回歸方程為（R=0.998 9）：

A/mm2=[0.010 7ρ/(μg·mL-1)]-0.017 6。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，三乙胺在質(zhì)量濃度4.8～143.6 μg/mL內(nèi)與峰面積比呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度

精密稱(chēng)取奧美拉唑原料6份，按1.3節(jié)中方法操作，以不同人員在不同時(shí)間用不同儀器分別測(cè)定，結(jié)果實(shí)驗(yàn)者1測(cè)得奧美拉唑中三乙胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40×10-6（RSD為4.6%），實(shí)驗(yàn)者2測(cè)得奧美拉唑中三乙胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)為39×10-6（RSD為3.7%）。12份檢測(cè)結(jié)果的RSD為4.3%。

2.4 回收率

精密稱(chēng)取9份奧美拉唑原料置10 mL具塞試管中，每份約 0.3 g（其中三乙胺為 12.0 μg），加入 2 mL濃度0.5 mol/L氫氧化鈉溶液超聲溶解。分別加入1 mL的50%、100%、150%三乙胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按1.3節(jié)中樣品溶液配制。量取上述溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，根據(jù)色譜檢測(cè)結(jié)果計(jì)算三乙胺的回收量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果Tab 1 Recovery rate test results

由表1可知，平均回收率為99.5%、平均RSD為2.2%，表明該法有良好的回收率。

2.5 檢測(cè)限與定量限

精密稱(chēng)取三乙胺對(duì)照品約0.1 g，加水逐步稀釋成2.1 μg.mL-1的溶液，按1.3節(jié)中對(duì)照溶液配制。取1 μL 注入氣相色譜儀，測(cè)得信噪比（S/N）為 3，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限為 7×10-6。

精密稱(chēng)取三乙胺對(duì)照品約0.1 g，加水逐步稀釋成6.3 μg/mL的溶液，按1.3節(jié)中對(duì)照溶液配制。取1 μL注入氣相色譜儀，測(cè)得信噪比（S/N）為 10，對(duì)應(yīng)的定量限為 21×10-6。

2.6 討論

1)色譜柱的選擇。三乙胺極性較大，色譜峰容易拖尾，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。經(jīng)安捷倫公司的HP-5、DB 624、HP-INNOWAX 等毛細(xì)管色譜柱實(shí)驗(yàn)，三乙胺在HP-INNOWAX色譜柱中洗脫時(shí)間短，峰形尖銳，柱效和靈敏度比其他兩款色譜柱高，實(shí)際選擇HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱，典型色譜圖見(jiàn)圖1(b)。

2)萃取劑的確定。奧美拉唑在稀氫氧化鈉溶液中易溶解，不溶于甲苯；三乙胺微溶于氫氧化鈉溶液，易溶于甲苯，因此選用甲苯作為三乙胺的萃取劑。

3)內(nèi)標(biāo)物的確定。三乙胺的沸點(diǎn)為89.5℃，選用極性相似、沸點(diǎn)較近的正己烷（沸點(diǎn)為68.7℃）和正庚烷（沸點(diǎn)為98.5℃）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，在HPINNOWAX色譜柱中，三乙胺與正己烷峰不易分離，而與正庚烷能完全分離，分離度大于5，因此選擇正庚烷為內(nèi)標(biāo)物。

3 結(jié)論

本研究建立的內(nèi)標(biāo)法靈敏度高，避免了三乙胺在硅鋼類(lèi)金屬頂空管路中的吸附問(wèn)題，檢測(cè)結(jié)果更精密可靠，可用于奧美拉唑中三乙胺的殘留檢測(cè)。

[1]鄧菲，黨岳，高崢，等.兩性霉素B中三乙胺殘留溶劑測(cè)定方法驗(yàn)證[J].河北化工，2009,32（10）:60.