112例慢性腹瀉飛行員腸道菌群中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌的檢測與分析

張海譜，李仕英，王縛鯤，季 雯，朱慶堯

超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶(extended spectrum β-lactamase，ESBLs)主要由大腸埃希菌和克雷伯菌屬等腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生，由質(zhì)粒介導(dǎo)，易于在不同菌株間傳播，是臨床多重耐藥的重要機制之一［1-4］。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，ESBLs由醫(yī)院向社區(qū)廣泛傳播，ESBLs陽性菌株在正常人群的定植率逐漸增高［5］。國內(nèi)調(diào)查的有關(guān)正常人群腸道產(chǎn)ESBLs菌攜帶率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國外，可高于30%［6］。飛行員是一種特殊職業(yè)，受飲食結(jié)構(gòu)、心理狀態(tài)、高空環(huán)境下脹氣等諸多因素影響，慢性腹瀉率發(fā)病較高［7］，平時應(yīng)用抗菌藥物較多。了解慢性腹瀉飛行員腸道ESBLs細(xì)菌定植狀態(tài)，對于指導(dǎo)飛行員選擇性地應(yīng)用抗菌藥物、控制ESBLs傳播有重要意義。本研究對慢性腹瀉飛行員腸道中產(chǎn)ESBLs細(xì)菌進(jìn)行檢測并分析耐藥性，為維護(hù)飛行員的健康及保證其合理用藥提供參考依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2010年12月—2013年10月某飛行學(xué)院慢性腹瀉飛行員112例為研究對象。均為男性;年齡22～41歲，平均32.3歲。診斷標(biāo)準(zhǔn):所有患者慢性腹瀉病史﹥3個月，慢性腹瀉發(fā)作次數(shù)﹥3次，每次病程﹥3 d。腹瀉的表現(xiàn)為排便次數(shù)增加，≥3次/d，并伴糊狀便、稀便等糞便性狀改變。所有受檢者腹瀉期留取糞標(biāo)本，向受檢者發(fā)放調(diào)查表調(diào)查采樣前6個月內(nèi)抗菌藥物應(yīng)用情況，包括用藥種類和用藥時間。

1.2 儀器與試劑 陽光生物SS-100.000B型細(xì)菌測定/藥敏分析儀及配套檢測板為惠州市陽光生物科技公司產(chǎn)品，抗菌藥敏紙片、麥康凱培養(yǎng)基、M-H培養(yǎng)基為英國Oxoid公司產(chǎn)品，細(xì)菌微量生化反應(yīng)管為杭州天和微生物制品公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗:糞標(biāo)本常規(guī)接種麥康凱培養(yǎng)基、含1 μg/ml頭孢他啶的麥康凱培養(yǎng)基和含1 μg/ml頭孢噻肟的麥康凱培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)，18～24 h挑取普通麥康凱培養(yǎng)基上疑似大腸埃希菌菌落鑒定并對確證為大腸埃希菌菌落進(jìn)行藥敏試驗。細(xì)菌鑒定采用微量生化管法。在含頭孢他啶或頭孢噻肟培養(yǎng)基上長出的菌落疑為產(chǎn)ESBLs菌，采用微量生化管法做進(jìn)一步鑒定和ESBLs確認(rèn)試驗。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603，購自中國工業(yè)微生物菌種保藏中心。

1.3.2 ESBLs確認(rèn)試驗:采用雙紙片法［8］。將待檢菌株配成0.5麥?zhǔn)蠁挝痪海坑贛H瓊脂上，然后在MH平板上貼上頭孢他啶(30 μg)、頭孢他啶/克拉維酸(30 μg/10 μg)、頭孢噻肟(30 μg)、頭孢噻肟/克拉維酸(30 μg/10 μg)，在頭孢他啶和頭孢噻肟兩種藥加克拉維酸后抑菌環(huán)直徑比不加克拉維酸大5 mm判定為ESBLs陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用WHONET 5.5軟件分別對慢性腹瀉飛行員腸道中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和非產(chǎn)大腸埃希菌藥敏試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，并比較兩者耐藥率的差異。統(tǒng)計分析應(yīng)用不同抗菌藥物慢性腹瀉飛行員產(chǎn)ESBLs菌定植率的差異，初步分析抗菌藥物應(yīng)用對產(chǎn) ESBLs菌定植的影響。應(yīng)用SPSS 13.0軟件對計數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗，α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)ESBLs菌的檢測結(jié)果 112例慢性腹瀉飛行員糞標(biāo)本共檢測出產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌38株，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌3株，其中2例同時檢出產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，產(chǎn)ESBLs菌定植率為34.82%(39/112)。

2.2 產(chǎn)ESBLs陽性和陰性大腸埃希菌耐藥性分析結(jié)果 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌(產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組)耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌(非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組)，除慶大霉素、阿米卡星、呋喃妥因、亞胺培南4種藥物外，其余藥物兩組耐藥率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌僅對阿米卡星和亞胺培南的敏感率＞80%，對其余抗菌藥物的敏感率均＜80%，而非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對某些頭孢菌素、妥布霉素、呋喃妥因的敏感率＞80%，對阿米卡星和亞胺培南敏感率＞90%，見表1。

2.3 慢性腹瀉飛行員應(yīng)用不同種類抗菌藥物對ESBLs大腸埃希菌產(chǎn)生的影響 112例慢性腹瀉飛行員中92例(82.14%)曾在6個月內(nèi)應(yīng)用抗菌藥物，其中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組38例(100.00%)均應(yīng)用過抗菌藥物，非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組54例(72.97%)應(yīng)用過抗菌藥物;曾經(jīng)應(yīng)用兩種以上抗菌藥物者產(chǎn) ESBLs大腸埃希菌組32例(84.21%)，非產(chǎn) ESBLs大腸埃希菌組 29例(39.19%)。兩組對比分析表明，抗菌藥物應(yīng)用、頭孢菌素類或氟喹諾酮類藥物應(yīng)用、用藥種類多(≥2種)與ESBLs大腸埃希菌的產(chǎn)生有一定關(guān)系(P＜0.05，P ＜0.01)，見表 2。

3 討論

正常菌群中產(chǎn)ESBLs菌的大量存在是臨床控制和抗感染治療不能忽視的一個重要問題，而腸道是產(chǎn)ESBLs菌的主要寄居場所，臨床感染的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌大多來源于腸道［9-10］。產(chǎn)ESBLs細(xì)菌除引起攜帶者自身感染外，還可不斷由腸道排出，污染環(huán)境并在人群中傳播，人可能進(jìn)食被污染的食物而成為產(chǎn) ESBLs菌攜帶者乃至發(fā)生感染［11-12］。因此開展產(chǎn) ESBLs菌監(jiān)測及耐藥分析、調(diào)查產(chǎn)ESBLs菌在人群中的分布并采取一定措施有重要意義。對產(chǎn)ESBLs菌過高分布地區(qū)，適當(dāng)限制某類藥物的使用，使細(xì)菌脫離與之接觸的機會，細(xì)菌有可能恢復(fù)成敏感菌株［13］。歐美發(fā)達(dá)國家腸道產(chǎn)ESBLs菌在健康人中定植率一般＜10%［14-16］，而我國的調(diào)查這一數(shù)據(jù)高低不一，介于10%～40%［6，9-10］，而且有越來越高的趨勢，因此嚴(yán)格控制抗菌藥物應(yīng)用，減少抗菌藥物濫用勢在必行。

表1 腸道中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組和非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌組耐藥率比較(%)

表2 應(yīng)用不同種類抗菌藥物對ESBLs大腸埃希菌產(chǎn)生的影響(株)

飛行員作為一類特殊職業(yè)者，對身體健康要求很高，但是由于職業(yè)因素，慢性腹瀉在飛行員中較為普遍。由于缺少病因?qū)W診斷，慢性腹瀉飛行員應(yīng)用抗菌藥物較多，本研究中慢性腹瀉飛行員6個月內(nèi)應(yīng)用抗菌藥物者達(dá)82.14%，而且許多飛行員屬于應(yīng)用多種抗菌藥物，這些因素對于產(chǎn)ESBLs菌的產(chǎn)生有重要影響。本研究結(jié)果顯示，慢性腹瀉飛行員腸道產(chǎn)ESBLs菌的定植與應(yīng)用頭孢菌素類、氟喹諾酮類藥物有關(guān)，而應(yīng)用多種抗菌藥物也是慢性腹瀉飛行員腸道產(chǎn)ESBLs菌產(chǎn)生的影響因素。本研究中慢性腹瀉飛行員產(chǎn)ESBLs菌定植率為34.82%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國外相關(guān)數(shù)據(jù)，而且也高于國內(nèi)一些報道［6，9-10］，這對飛行員的健康有重要影響，是潛在的感染因素，在飛行員患病或受傷時影響其治療。因此采取積極措施，控制產(chǎn)ESBLs菌在飛行員群體中的定植率非常迫切，最重要的措施就是控制抗菌藥物的使用。慢性腹瀉飛行員腹瀉的主要原因是菌群失調(diào)，采用益生菌治療效果明顯［17］，抗菌藥物并無顯著作用，因此，明確病因、排除致病菌感染、減少抗菌藥物應(yīng)用對減少產(chǎn)ESBLs菌在飛行員群體中的定植有重要意義。此外，對飛行員中產(chǎn)ESBLs細(xì)菌攜帶者適當(dāng)采取隔離措施，避免相互傳播也是控制產(chǎn)ESBLs細(xì)菌定植的有效手段。

產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對各種抗菌藥物的耐藥率顯著高于普通大腸埃希菌，了解產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌在普通飛行員中的定植率不僅可以分析定植原因，以便采取相應(yīng)的控制措施，而且對于戰(zhàn)救藥材儲備也具有重要的參考意義。本研究僅對慢性腹瀉飛行員產(chǎn)ESBLs菌腸道定植情況進(jìn)行了分析，而對于普通飛行員以及其他職業(yè)人群的狀況有待進(jìn)一步調(diào)查分析。

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