著色性干皮病基因D和X線交叉互補修復(fù)基因1的多態(tài)性與肺癌的相關(guān)性分析

都勇 揭志軍 何燕超 錢凌

(復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，上海 200240)

肺癌的發(fā)生發(fā)展是多基因變異和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果［1］。DNA修復(fù)基因的序列中因單個堿基突變而造成的單核苷酸多態(tài)性(single nueleotide polymorphism，SNP)，可導(dǎo)致編碼氨基酸的異常，影響蛋白的功能，最終影響個體DNA修復(fù)能力(DNA repair capacity，DRC)，使個體對腫瘤的易感性增加［2］。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)–限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技術(shù)檢測著色性干皮病基因D(Xeroderma pigmentosum gene D，XPD)和X線交叉互補修復(fù)基因1(X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1)在肺癌患者和健康志愿者中的SNP，探討其與肺癌的關(guān)系以及易感基因和吸煙的交互作用，旨在為肺癌的早期篩查及病因研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月—2013年9月在我院住院的肺癌患者150例，所有患者均經(jīng)支氣管鏡或肺穿刺活檢病理檢查診斷為肺癌，且均未接受化療及放療。150例肺癌患者中，小細(xì)胞肺癌30例，非小細(xì)胞肺癌120例;120例非小細(xì)胞肺癌患者中，鱗癌52例，腺癌48例，其他類型(如大細(xì)胞癌、肉瘤樣癌及類癌)20例。對照組選取我院同期健康體檢者150例(對照組)，胸部CT檢查及血清腫瘤標(biāo)志物檢測未見異常。兩組均無高血壓、糖尿病及冠心病等慢性疾病病史，無呼吸系統(tǒng)其他疾病史。所有研究對象入組前均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 清晨空腹抽取外周靜脈血2～4 mL，用EDTA抗凝劑抗凝，貯存于－20℃。采用DNA提取試劑盒提取基因組 DNA，貯存于－80℃。設(shè)計目的基因相關(guān)引物，引物序列及PCR擴增條件見表1，擴增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳觀察。購置目的基因相應(yīng)限制性核酸內(nèi)切酶，將限制性核酸內(nèi)切酶與PCR擴增產(chǎn)物加入相應(yīng)酶切體系，酶切反應(yīng)后將酶切產(chǎn)物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，觀察各電泳條帶，判斷各標(biāo)本的基因型，見表2。

表1 XPD-751、XRCC1-399基因PCR擴增體系

表2 XPD-751、XRCC1-399基因酶切體系

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，所有等位基因分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，交互作用分析采用Logistic回歸法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組研究對象的一般資料比較 2組研究對象的性別及年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);2組研究對象的吸煙史及吸煙指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。見表3。

表3 2組的一般資料比較

2.2 2組研究對象的XPD-751和XRCC1-399基因型頻率及等位基因頻率分布 2組研究對象XPD-751基因型頻率及突變等位基因頻率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明XPD-751多態(tài)性與肺癌發(fā)生相關(guān);2組研究對象的XRCC1-399基因型頻率及突變等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明XRCC1-399多態(tài)性與肺癌發(fā)生無相關(guān)。見表4～5。

2.3 非小細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌患者XPD-751等位基因頻率分布 XPD-751等位基因Gln的頻率在非小細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌患者中分別為31.33%、20.67%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.012)，說明 XPD-751多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)。見表6。

2.4 不同病理類型非小細(xì)胞肺癌的XPD-751等位基因頻率分布 XPD-751等位基因Gln的頻率在鱗癌、腺癌及其他類型非小細(xì)胞肺癌患者中分別為31.73%、15.62% 和 20.00%，3 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.023)，說明XPD-751多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌中的鱗癌密切相關(guān)。見表7。

表4 肺癌組與對照組XPD-751、XRCC1-399基因型頻率分析 (n，%)

表5 肺癌組與對照組XPD-751、XRCC1-399突變等位基因頻率分析 (n，%)

表6 非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌患者XPD-751突變等位基因頻率分析 (n，%)

表7 不同病理類型非小細(xì)胞肺癌患者XPD-751突變等位基因頻率分析 (n，%)

2.5 吸煙和XPD-751多態(tài)性對肺癌的交互作用分析 與對照組比較，以無吸煙及無XPD-751多態(tài)性時的相對危險度為1.000，吸煙及無XPD-751多態(tài)性時罹患肺癌的相對危險度為1.523，有XPD-751多態(tài)性及無吸煙時罹患肺癌的相對危險度為1.342，吸煙與XPD-751多態(tài)性共同存在時罹患肺癌的相對危險度為2.812(P=0.336)，說明吸煙與 XPD-751多態(tài)性兩種危險因素在肺癌的發(fā)生中并無交互作用。見表8。

表8 吸煙與XPD-751多態(tài)性對肺癌的交互作用分析

3 討 論

XPD定位于人類染色體19q13.2-13.3，由23個外顯子組成，是參與核苷酸修復(fù)的重要基因。XPD表達(dá)的蛋白產(chǎn)物具有解開DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的功能，并可移除或切除損傷DNA。目前研究［3］發(fā)現(xiàn)，XPD有7個單核苷酸多態(tài)位點，而對位于密碼子312、751處的基因變異最為常見。

本研究發(fā)現(xiàn)，XPD-751等位基因頻率在肺癌組和對照組之間以及在非小細(xì)胞肺癌患者和小細(xì)胞肺癌患者之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;在非小細(xì)胞肺癌中，XPD-751等位基因頻率在鱗癌患者中明顯高于腺癌及其他類型非小細(xì)胞肺癌患者，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義;說明XPD-751多態(tài)性與肺癌相關(guān)，尤其與非小細(xì)胞肺癌中的鱗癌密切相關(guān)。上述結(jié)果與邢德印等［4］的結(jié)論相符;Ouyang等［5］發(fā)現(xiàn) XPD-751 多態(tài)性與肺腺癌相關(guān);然而，López-Cima 等［6］在研究西班牙人群的肺癌易感基因時，發(fā)現(xiàn)XPD-751多態(tài)性與肺癌無明顯相關(guān)性。

XRCC1定位于人類染色體 19q13.2-19q13.3，包含17個外顯子。XRCC1的編碼產(chǎn)物為腳手架蛋白，可直接與DNA聚合酶β、DNA連接酶Ⅲ和多聚ADP核糖聚合酶形成復(fù)合物，在損傷引起的堿基切除修復(fù)和單鏈斷裂修復(fù)中起著重要的作用?，F(xiàn)已證實，XRCC1有多種 SNP，其中第 6外顯子Arg194Trp、第9外顯子 Arg280His和第10外顯子Arg399Gln 較為常見［7］。

本研究發(fā)現(xiàn)，肺癌組和對照組XRCC1-399等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明XRCC1-399多態(tài)性與肺癌無相關(guān)性，與 Wang 等［8］、Schneider等［9］的研究結(jié)果一致。但是，余紅平等［10］研究發(fā)現(xiàn)，攜帶XRCC1-Gln399Gln突變純合子基因型的個體發(fā)生肺癌的風(fēng)險明顯升高。

綜上所述，本研究表明，XPD-751基因多態(tài)性與肺癌(尤其是與鱗癌)的發(fā)生相關(guān)，但與吸煙之間無交互作用;XRCC1-399多態(tài)性與肺癌無相關(guān)性。對這些DNA修復(fù)基因的研究有助于肺癌的早期診斷與預(yù)防，并有助于進一步探索肺癌的發(fā)病機制。

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