流式細(xì)胞術(shù)分析尿脫落細(xì)胞DNA對(duì)膀胱腫瘤的診斷價(jià)值研究

胡 旭，劉紅霞

（河南省南陽市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 473001）

膀胱癌是一種容易復(fù)發(fā)的惡性腫瘤，流行病學(xué)資料顯示其復(fù)發(fā)率可以高達(dá)50%～70%，其中30%的患者復(fù)發(fā)后腫瘤的惡性度會(huì)顯著增加，可見膀胱癌的早期診斷以及治療后的嚴(yán)密隨訪是一項(xiàng)非常重要的工作［1－2］。膀胱鏡、尿脫落細(xì)胞涂片檢查以及病理活檢是膀胱癌診斷和隨訪的傳統(tǒng)檢查方法，但尿脫落細(xì)胞涂片檢查敏感性低，特別是對(duì)于一些低期級(jí)腫瘤，不到30%，膀胱鏡和病理活檢雖然是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但它們屬于有創(chuàng)檢查，對(duì)于一些檢查的盲區(qū)（例如膀胱頂部及膀胱前壁的腫瘤）不能觀察和取材［3］。流式細(xì)胞術(shù)是一項(xiàng)結(jié)合了多學(xué)科、多領(lǐng)域技術(shù)的檢測(cè)方法，已被廣泛的運(yùn)用于從基礎(chǔ)研究到臨床實(shí)踐的各個(gè)方面［4］。因此本研究使用流式細(xì)胞術(shù)分析尿脫落細(xì)胞DNA參數(shù)的改變，探討了其在膀胱腫瘤中的臨床使用意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年10月至2011年4月本院收治的膀胱癌病例68例，其中男44例，女24例，年齡45～74歲，平均（62.7±10.3）歲，所有病例均經(jīng)病理確診。68例患者按WHO三級(jí)法分為高分化26例、中分化22例、低分化20例。取同期本院需尿脫落細(xì)胞檢查的非膀胱癌患者30例作為對(duì)照，其中男20例，女10例，年齡44～76歲，平均（63.2±10.8）歲；慢性前列腺炎12例，尿路結(jié)石10例，腺性膀胱炎8例。兩組在性別、年齡等一般臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 單細(xì)胞懸液的制備 采取受試者清晨第2次新鮮中段尿50mL，3 000r／min離心15min棄上清液，取沉淀的細(xì)胞磷酸鹽緩沖液洗滌3次，用磷酸鹽緩沖液調(diào)整細(xì)胞濃度為106／L，置冰上待測(cè)。

1.3 尿脫落細(xì)胞的流式細(xì)胞儀檢測(cè) 尿脫落細(xì)胞使用DNAPrepKit試劑盒（聯(lián)科生物科技有限公司）染色，500μL細(xì)胞懸浮液中加入5μL碘化丙啶（PI），避光染色30min，健康人淋巴細(xì)胞作為對(duì)照經(jīng)相同的處理，前向和側(cè)向散色光設(shè)門去除細(xì)胞碎片，F(xiàn)L3通道檢測(cè)DNA分布直方圖。S期細(xì)胞峰百分比（SPF）＝S期峰道值／（G0／G1＋S＋G2／M）峰道值。膀胱癌的流式細(xì)胞術(shù)診斷標(biāo)準(zhǔn) （出現(xiàn)1個(gè)即可）：出現(xiàn)異倍體細(xì)胞峰；SPF＞15%，并伴有四倍體細(xì)胞峰；G0／G1期的變異率（CV）＞9%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率表示，使用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組陽性率比較 膀胱癌組和對(duì)照組流式細(xì)胞儀檢測(cè)的陽性率分別為73.5%和26.7%，膀胱癌組的陽性率顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。流式細(xì)胞儀診斷的敏感性73.5%，特異性86.2%。

2.2 兩組流式細(xì)胞儀DNA分布 膀胱癌組異倍體細(xì)胞、SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%檢出率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

2.3 膀胱癌患者不同分級(jí)中DNA分析結(jié)果比較 膀胱癌患者異倍體細(xì)胞檢出率在高、中、低分化組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1 兩組流式細(xì)胞儀DNA分布［n（%）］

表2 3組流式細(xì)胞儀DNA分析結(jié)果的比較［n（%）］

2.4 膀胱癌患者異倍體細(xì)胞檢出對(duì)患者復(fù)發(fā)的影響 根據(jù)異倍體細(xì)胞檢出情況將膀胱癌患者分為異倍體組（42例）和無異倍體組（26例），隨訪2年，統(tǒng)計(jì)其治療后的復(fù)發(fā)率，結(jié)果顯示異倍體組復(fù)發(fā)32例（76.2%），無異倍體組復(fù)發(fā)12例（46.2%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

膀胱癌是我國(guó)泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，膀胱癌的高復(fù)發(fā)率使得術(shù)后的隨訪成為膀胱癌治療的一個(gè)重要組成部分，膀胱鏡、病理活檢屬侵入性檢查，對(duì)患者會(huì)造成一定的痛苦和帶來恐懼感，而且容易導(dǎo)致醫(yī)源性尿路感染，故其臨床上的應(yīng)用受到一定的限制［5］。尋找非侵入性、高敏感性的膀胱腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法，是每一個(gè)泌尿外科醫(yī)生所關(guān)心的問題，流式細(xì)胞術(shù)可以通過細(xì)胞內(nèi)DNA的水平進(jìn)行細(xì)胞周期分析和發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞［6－7］，整個(gè)細(xì)胞周期分為 G0／G1、S、G2／M 期 3 個(gè)細(xì)胞峰，正常細(xì)胞DNA的水平在G0／G1和G2／M期成正態(tài)分布S期成一個(gè)加寬的正態(tài)分布，腫瘤細(xì)胞處于增殖失控狀態(tài)DNA合成顯著增加就可以在DNA直方圖上表現(xiàn)出來，已有研究顯示流式細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)原位癌的診斷可以高達(dá)90.0%，在膀胱癌中可以較膀胱鏡早3～12個(gè)月［8］。本研究顯示膀胱癌患者流式細(xì)胞儀陽性率顯著高于對(duì)照組，其檢出的敏感性為73.5%，特異性為86.2%，說明了尿脫落細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)DNA分析是一個(gè)無創(chuàng)、客觀、靈敏、有效的膀胱癌篩查方法。但是本研究的結(jié)果并未達(dá)到前人報(bào)道的90.0%的診斷準(zhǔn)確率，這可能與腫瘤的惡性程度有一定的關(guān)系，惡性程度高的腫瘤細(xì)胞容易脫落，就可以檢測(cè)出來［9］。

腫瘤細(xì)胞的增殖能力顯著超過正常細(xì)胞，SPF是反映細(xì)胞增殖能力最常用的一個(gè)指標(biāo)，因此SPF的升高就可以提示腫瘤的發(fā)生。本研究顯示腫瘤細(xì)胞的SPF＞15%檢出率大于對(duì)照組，且在不同腫瘤分級(jí)之間無顯著性差異，G0／G1期CV＞9%來判斷腫瘤存在一定的爭(zhēng)議，其受到的影響因素較多，例如尿路感染時(shí)CV也可以升高［10］，本研究表明腫瘤細(xì)胞G0／G1期CV＞9%的檢出率大于對(duì)照組，但在不同腫瘤分級(jí)之間無顯著性差異，說明SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%不能用于膀胱癌惡性程度的判斷。對(duì)照組中異倍體的檢出率為0，但SPF＞15%和G0／G1期CV＞9%兩個(gè)指標(biāo)都可以檢出，提示了流式細(xì)胞儀篩查膀胱癌時(shí)異倍體是一個(gè)特異性的指標(biāo)，另兩個(gè)指標(biāo)應(yīng)該謹(jǐn)慎，需要結(jié)合尿常規(guī)和其他檢查綜合判斷。本研究顯示膀胱癌患者異倍體細(xì)胞檢出對(duì)患者復(fù)發(fā)具有一定的預(yù)示作用，這可能是隨著膀胱癌的惡性度越高、腫瘤分級(jí)越低，腫瘤細(xì)胞就越容易脫落下來，這樣其檢出率也就會(huì)相應(yīng)的增加。

綜上所述，本研究顯示流式細(xì)胞術(shù)分析尿脫落細(xì)胞診斷膀胱惡性腫瘤具有較好的敏感性和特異性，但在臨床使用中需要結(jié)合尿常規(guī)、影像學(xué)和其他檢查綜合判斷。

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