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    不同加工形式茶葉茶多酚含量及抗氧化活性比較研究

    2014-09-19 09:28:22王萬方張懷令史彩艷
    大理大學(xué)學(xué)報(bào) 2014年10期
    關(guān)鍵詞:普洱茶多酚綠茶

    王萬方,張懷令,陳 麗 ,史彩艷,肖 懷*

    (1.大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000;2.云南西力生物技術(shù)有限公司,昆明 650204)

    茶(Camellia sinensis Kuntze)在我國(guó)有著悠久的飲用歷史,茶中含有大量的酚類物質(zhì)不僅能夠保護(hù)體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng),而且還可以促進(jìn)其活性,從而保護(hù)細(xì)胞膜中的脂質(zhì)過氧化〔1〕。目前研究證明茶葉提取物具有抗癌、抗衰老、抗輻射、清除人體自由基、降低血糖血脂等重要的藥理功能,其主要功能性成分是茶多酚(Tea-polyphenols,簡(jiǎn)稱TP),是茶葉主要抗氧化物質(zhì),約占茶葉干重的18%~36%〔2〕。由于產(chǎn)地、采摘季節(jié)及采摘要求,加工方式等的不同,茶葉的種類不下千種。從大類上可以分為白茶、綠茶、黃茶、紅茶、黑茶等。本文以普洱綠茶、普洱黃茶、普洱蒸酶茶、普洱黑茶、普洱紅茶、大栗樹碧螺春、大栗樹磨鍋茶等不同品種及不同加工方式的茶葉為原料,對(duì)其中的茶多酚含量及抗氧化活性進(jìn)行比較研究。茶多酚含量采用福林酚比色法進(jìn)行測(cè)定,多酚類物質(zhì)可以被福林酚試劑中的鎢鉬酸定量氧化,鎢鉬酸自身被還原(使W6+變?yōu)閃5+),生成藍(lán)色化合物,顏色的深淺跟茶多酚含量呈正相關(guān)〔3〕。鐵還原力的測(cè)定通常用來評(píng)價(jià)天然抗氧化劑的供電子能力,提取物中的抗氧化成分將Fe3+還原成Fe2+,使溶液顏色發(fā)生變化。顏色變化的程度取決于溶液組分的還原力,吸光度值越大,表明還原能力越強(qiáng)〔4〕。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與儀器

    1.1.1 材料 7種不同品牌及加工形式的茶葉(普洱綠茶、普洱黃茶、普洱蒸酶茶、普洱黑茶、普洱紅茶、大栗樹碧螺春、大栗樹磨鍋茶)均購自大理泰興市場(chǎng)云南綠茶總經(jīng)銷店,均為普通散茶,商家未提供廠家及批號(hào)。

    原料于45.5℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重,粉碎,過50目篩,保存于干燥器中備用。

    1.1.2 試劑 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,No.20130812);95%乙醇;10%福林酚試劑;7.5%碳酸鈉溶液;磷酸緩沖液(0.2 mol/L pH 6.6);0.2 mol/L磷酸二氫鈉(≥99.0%);0.2 mol/L磷酸氫二鈉(≥98.0%);1%鐵氰化鉀;10%三氯乙酸(≥99.0%);0.1%三氯化鐵;鎢酸鈉(Na2WO2·2H2O);鉬酸鈉(≥99.0%);去離子水;85%的磷酸;濃鹽酸;硫酸鋰(Li2SO4)。除標(biāo)準(zhǔn)品外,其他試劑均為分析純。

    1.1.3 儀器 T6型紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海-恒科技有限公司);SSY型電熱恒溫水浴鍋(北京泰克儀器有限公司);FA2004N電子天平;SY3200-T型超聲波清洗器(上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司);SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);DX-208型低溫冷卻液循環(huán)泵(北京長(zhǎng)流科學(xué)儀器公司);R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法及方法考察

    1.2.1 樣品溶液的制備 精密稱取3份茶葉粉末1.0 g于100 mL圓底燒瓶中,加20 mL 95%的乙醇超聲提取30 min,過濾,濾渣繼續(xù)以95%乙醇提取2次,每次15 mL,合并提取液,用95%乙醇定容至50 mL得茶多酚總提取液,冷藏備用。精密量取總提取液1 mL于50 mL容量瓶中用超純水定容,搖勻,得樣品溶液。

    1.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取沒食子酸對(duì)照品50 mg于50 mL容量瓶中用超純水定容,搖勻,得濃度為1.0 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密移取儲(chǔ)備液 0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于50 mL容量瓶中,向各容量瓶中加入1 mL 95%乙醇,用超純水定容,搖勻,即得。

    1.2.3 吸光度測(cè)定 精密移取“1.2.1”或“1.2.2”項(xiàng)下配制的溶液1 mL于25 mL三角瓶中,分別加入10%的福林酚試劑5.0 mL,搖勻。反應(yīng)3~8 min,加入7.5%的碳酸鈉溶液4 mL,搖勻,室溫放置1 h。以“1.2.2”項(xiàng)中第一份溶液加入相應(yīng)顯色劑為空白對(duì)照,于765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A值〔5〕。

    1.2.4 顯色時(shí)間考察 樣品溶液按“1.2.3”項(xiàng)操作至加入全部顯色劑,搖勻。從10 min開始測(cè)定其吸光度,每10 min測(cè)定1次至120 min。結(jié)果顯示加入顯色劑后,樣品吸光度值在不斷增加,開始的30 min內(nèi)變化較大,30 min以后,每10 min的增加值較低,并基本為一恒定常數(shù),故顯色時(shí)間定為30 min。

    1.2.5 線性關(guān)系考察 精密量取“1.2.2”項(xiàng)下各溶液1 mL,按“1.2.3”處理,以沒食子酸的濃度(C)為橫坐標(biāo),吸光度為(A)縱坐標(biāo)作圖,得回歸方程A=0.1061C+0.0675(r=0.9998)。結(jié)果表明沒食子酸在1.110~11.10 μg/mL之間呈良好的線性關(guān)系。

    1.2.6 精密度試驗(yàn) 精密移取5份“1.2.2”項(xiàng)下濃度為0.0222 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL,按“1.2.3”項(xiàng)操作,測(cè)得吸光度分別為 0.2993、0.2983、0.3023、0.3063、0.3123,RSD為1.89%,結(jié)果表明儀器的精密度良好〔6〕。

    1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取6份普洱綠茶粉末1.0 g,按“1.2.1”、和“1.2.3”項(xiàng)操作,測(cè)得吸光度值并帶入回歸方程后的茶多酚含量分別為:182.46、181.35、185.15、176.53、179.34、181.53 mg/g,RSD為1.61%。

    1.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取普洱綠茶粉末1.0 g,按“1.2.1”項(xiàng)操作得樣品溶液,分別于1、2、4、8、12、24 h密移取1 mL樣品溶液,按“1.2.3”項(xiàng)操作,測(cè)得吸光度分別為 0.8300、0.8523、0.8593、0.8647、0.8717、0.8747,RSD為1.90%,表明提取物溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

    1.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取9份茶多酚含量為180.97 mg/g的普洱綠茶粉末0.5 g,分別準(zhǔn)確加入沒食子酸對(duì)照品 70、100、140 mg,按“1.2.1”、“1.2.3”項(xiàng)操作并帶入回歸方程計(jì)算。結(jié)果表明平均加樣回收率為101.1%,RSD為2.05%。見表1。

    表1 加樣回收率試驗(yàn)

    1.2.10 茶多酚含量測(cè)定 參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)〔5〕GB/T8313-2008中的方法,精密量取“1.2.1”項(xiàng)的溶液1 mL,按照“1.2.3”項(xiàng)操作,按下式計(jì)算茶多酚含量(單位mg/g)。

    式中:A為樣品測(cè)試液吸光度;b為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距:V為樣品提取液體積,50 mL;d為稀釋因子,500;K為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率;m為樣品質(zhì)量,單位為g。

    1.2.11 抗氧化活性測(cè)定 抗氧化活性以樣品還原Fe3+的能力進(jìn)行評(píng)價(jià),采用Oyaizu(1986)的方法進(jìn)行測(cè)定〔7〕。精密量取“1.2.1”項(xiàng)溶液及“1.2.2”項(xiàng)下第一份溶液1 mL于刻度試管中,加入0.2 mol/L(pH 6.6)的磷酸鹽緩沖溶液2.5 mL和1%的鐵氰化鉀溶液2.5 mL,混勻,在50℃保溫20 min后迅速冷卻,加入10%的三氯乙酸溶液1 mL,充分混合后加入U(xiǎn)P級(jí)超純水2.5 mL和0.1%的三氯化鐵溶液0.5 mL,以“1.2.2”項(xiàng)下第一份溶液為空白,在700 nm處測(cè)定吸光度。抗氧化活性以單位質(zhì)量樣品吸光度值表示,吸光度值越大,則樣品的抗氧化活性越強(qiáng)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同茶葉中茶多酚含量比較 精密稱取每種品種茶葉1.0 g,進(jìn)行茶多酚含量測(cè)定。見表2。從表2可以看出,不同加工形式的茶中茶多酚含量差異顯著,而在同類茶葉中含量差異較小。

    表2 不同茶葉中茶多酚含量 (±s,mg/g,n=3)

    表2 不同茶葉中茶多酚含量 (±s,mg/g,n=3)

    注:*量取“1.2.1”項(xiàng)的溶液體積為5 mL,定容至25 mL。

    茶葉品種普洱綠茶普洱黃茶普洱蒸酶茶大栗樹碧螺春大栗樹磨鍋茶*普洱黑茶*普洱紅茶■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■取樣量/g 1.01061.06881.02441.25211.20411.07881.16131.29181.02361.00371.10081.22051.19841.03591.14551.03851.12081.19601.23881.01891.1904吸光度A 0.84530.88100.85671.00930.99670.88030.92001.03370.87330.81200.81100.87570.80270.72300.80770.82370.99471.02831.06770.70870.7503茶多酚含量/(mg/g)180.74±1.21178.86±2.58178.23±6.49163.32±10.05148.64±3.8718.53±1.2215.79±2.88

    2.2 不同茶葉抗氧化活性比較 每種品種茶葉各提取3份測(cè)定其鐵還原能力。見表3。從表2和表3可知,發(fā)酵茶和未發(fā)酵茶提取物鐵還原能力差異顯著,并與其中茶多酚含量呈正相關(guān)。

    表3 不同加工形式茶葉的還原能力比較(xˉ± s,A/g,n=3)

    茶多酚的還原作用很強(qiáng),有很好的抗氧化功效,是茶葉中主要抗氧化成分。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,茶葉中茶多酚含量與自由基的清除能力呈現(xiàn)良好的量效關(guān)系,也證實(shí)了茶多酚類物質(zhì)為茶葉中的主要抗氧化活性物質(zhì)。

    3 討論

    茶葉的傳統(tǒng)加工主要有發(fā)酵及未發(fā)酵2種。試驗(yàn)中普洱黑茶和普洱紅茶為發(fā)酵茶,普洱黃茶為輕微發(fā)酵茶,其他幾種均為綠茶。發(fā)酵過程中、在茶葉自身氧化酶及微生物的作用下,茶葉中的多酚類經(jīng)羥基的氧化、偶聯(lián)作用,生成苯醌類如茶黃素(theaflavins)、茶紅素(thearubingins)等物質(zhì),茶多酚含量相應(yīng)降低〔8〕。試驗(yàn)結(jié)果表明未經(jīng)發(fā)酵及輕微發(fā)酵的綠茶和黃茶,茶多酚含量差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與文獻(xiàn)〔9〕報(bào)道的茶葉中茶多酚含量基本相當(dāng),而發(fā)酵后的紅茶和黑茶,茶多酚只保留了未經(jīng)發(fā)酵及輕微發(fā)酵的約10%。

    發(fā)酵可以增加或改變茶葉的醇香、口感甚至功效,但發(fā)酵過程也是使茶多酚類物質(zhì)大大降低、抗氧化活性顯著減小的過程。消費(fèi)者在選擇茶葉時(shí),除了依據(jù)個(gè)人的喜好,還應(yīng)根據(jù)自身身體狀況及需要,選取適合自己的茶葉品種,充分利用和發(fā)揮茶葉的各種功效。

    〔1〕徐春明,樂勝鋒,羅晶潔,等.不同種類綠茶提取物抗氧化活性研究〔J〕.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(16):68-71.

    〔2〕宛曉春.茶葉生物化學(xué)〔M〕.3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2008:9-10.

    〔3〕陳錦玉,嚴(yán)紅梅,邵金良,等.超聲波輔助提取Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定茶葉中茶多酚〔J〕.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,25(3):1069-1073.

    〔4〕李潤(rùn)豐,趙月卿.不同種類茶提取物抗氧化活性的研究〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(9):4134-4139.

    〔5〕GB/T8313-2008,茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法〔S〕.

    〔6〕燕雪花,劉宏炳,孫蕓,等.Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定新疆不同產(chǎn)地紫花苜蓿中總多酚含量〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(32):15724-15725.

    〔7〕QUE F,MAO L C,PAN X.Antioxidant activities of five Chinese ricewines and the involvement of phenolic compounds〔J〕.Food ResearchInternational,2006,39:581-587.

    〔8〕陳金娥,豐慧君,張海容.紅茶、綠茶、烏龍茶活性成分抗氧化性研究〔J〕.食品科學(xué),2009,30(3):62-66.

    〔9〕王霞,賴穗生.幾種茶葉中茶多酚含量的比較〔J〕.科技資訊,2009,24(8):212.

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