• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葛根素聯(lián)合丹皮酚對(duì)三種2型糖尿病動(dòng)物模型胰腺組織變化及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響

    2014-09-19 10:21:34蘇立平陳立薛明明蘇立軍祁朋何蕾侯石磊
    中國(guó)生化藥物雜志 2014年6期
    關(guān)鍵詞:丹皮葛根素動(dòng)物模型

    蘇立平,陳立,薛明明,蘇立軍,祁朋,何蕾,侯石磊

    (1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059;2.中國(guó)國(guó)際航空內(nèi)蒙古分公司 航醫(yī)室,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

    葛根素聯(lián)合丹皮酚對(duì)三種2型糖尿病動(dòng)物模型胰腺組織變化及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響

    蘇立平1,陳立2Δ,薛明明1,蘇立軍3,祁朋3,何蕾3,侯石磊3

    (1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059;2.中國(guó)國(guó)際航空內(nèi)蒙古分公司 航醫(yī)室,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

    目的 探討葛根素聯(lián)合丹皮酚對(duì)3種2型糖尿病動(dòng)物模型胰腺組織變化及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響。方法 分別采用特殊膳食誘導(dǎo)法、注射鏈脲菌素(STZ)、特殊膳食加注射STZ法構(gòu)建2型糖尿病動(dòng)物模型,取造模成功的3種Wistar大鼠,每種40只。將各模型隨機(jī)分為糖尿?。―M)組、單用葛根素(Pue)組、單用丹皮酚(Pae)組和葛根素聯(lián)合丹皮酚(Pue+Pae)組,每組10只。試驗(yàn)進(jìn)行8周后測(cè)定每種模型的4組大鼠的胰腺線粒體中的ROS、SOD及MDA;Western blot方法檢查處理后的腎周圍脂肪組織細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的含量。結(jié)果 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有動(dòng)物死亡,全部進(jìn)入結(jié)果分析。Pue組、Pae組及Pue+Pae組較DM組大鼠胰腺線粒體SOD活性有顯著升高(P<0.01),而MDA、ROS水平呈現(xiàn)不同程度降低(P<0.01或P<0.05),其中Pue+Pae組變化更加明顯(P<0.01);設(shè)定每種模型DM組的脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的吸光度為1,其它組數(shù)據(jù)與DM組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且Pue+Pae組是DM組的2~3倍(P<0.01)。結(jié)論 葛根素聯(lián)合丹皮酚組能降低3種2型糖尿病模型胰腺組織中的MDA、ROS水平、升高SOD水平;葛根素聯(lián)合丹皮酚治療組能提高葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4蛋白的含量。

    葛根素;丹皮酚;葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4

    糖尿病是由于胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足而引起的代謝紊 亂性疾?。?],主要表現(xiàn)為慢性高血糖,伴有糖尿,口渴多飲,多尿,多食的一種臨床綜合征[2]。2型糖尿?。?]是糖尿病的一種,也叫胰島素非依賴性糖尿病,是因胰島素分泌相對(duì)不足或靶細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性降低引起的糖尿病。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展,人民生活水平的不斷提高,人民的生活方式發(fā)生了很大改變,糖尿病的發(fā)病率不斷上升[4],其中2型糖尿病占絕大多數(shù),嚴(yán)重威脅患者的健康和生活質(zhì)量。

    葛根素(Puerarin)是葛根的主要活性成分之一,葛根素具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和腦血管;減慢心率,降低心肌耗氧量;抗脂質(zhì)過(guò)氧化和消除自由基,降血糖降血脂等藥理作用[5-7]。葛根素的藥理活性較強(qiáng),藥效明確,安全范圍廣,不良反應(yīng)少,且葛根資源豐富,價(jià)格低廉,臨床應(yīng)用廣泛。李娟娟等[8]發(fā)現(xiàn)葛根素對(duì)胰島素抵抗大鼠脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4有影響,張雷等[9]研究發(fā)現(xiàn)葛根素很有可能成為治療糖尿病的首選藥物。丹皮酚(Paeonol Pae)又稱牡丹分,是中藥牡丹皮的主要活性成分之一。丹皮酚[10]藥理活性廣泛,在心腦血管、腫瘤、炎癥等方面有重要應(yīng)用。本研究旨在探討葛根素聯(lián)合丹皮酚對(duì)3種2型糖尿病動(dòng)物模型胰腺組織變化及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響。

    1 材料和方法

    1.1 材料 健康雄性Wistar大鼠(SPF級(jí))120只,8周齡,體質(zhì)量200~250 g,購(gòu)自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所(合格證醫(yī)動(dòng)字第310201012);鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)購(gòu)自Sigma公司,活性氧(ROS)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)定量試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所,葛根素注射液購(gòu)自海南斯達(dá)制藥有限公司(批號(hào):200223186),丹皮酚購(gòu)自西安小草植物科技有限公司(批號(hào):7089003)。

    1.2 模型制備及分組 第一種2型糖尿病模型采用特殊膳食誘導(dǎo),具體做法:適應(yīng)性喂養(yǎng)1周之后,將40只大鼠用高糖高脂飼料喂養(yǎng),在基礎(chǔ)飼料中添加20%蔗糖、10%熟豬油、2.5%膽固醇、1%膽酸鹽混合即成。10周后空腹72 h測(cè)血糖濃度,2次均≥16.7mmol/L[9]為成功模型。

    第二種2型糖尿病模型采用注射鏈脲菌素(STZ),具體做法:將40只大鼠禁食16~20 h后,一次性尾部靜脈注射STZ(60.0 mg/kg),若血糖濃度大于20.0 mmol/L并伴有多尿等其他糖尿病癥狀定為由其誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠造模成功。

    第三種2型糖尿病模型采用特殊膳食加注射STZ法,具體做法:40只大鼠注射中劑量STZ(30 mg/kg)加以高糖高脂飲食(總熱能7 J/g,蛋白質(zhì)占24%,碳水化合物占54%,脂肪占4%)

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)均以“±s”表示,2組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 3組動(dòng)物模型胰腺線粒體中的MDA、ROS、SOD水平比較 與DM組比較,Pae組、Pue組及Pue+Pae組大鼠胰腺線粒體MDA和ROS水平均有不同程度的降低,而SOD活性均明顯升高,其中Pue+Pae組變化更加明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01,見(jiàn)表1)。喂養(yǎng)10周后空腹3 d測(cè)血糖,血糖濃度在11.1~33.3mmol/L之間為造模成功。

    將每種模型的40只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為糖尿病組(DM)、葛根素治療組(Pue)、丹皮酚治療組(Pae)、葛根素加丹皮酚治療組(Pue+Pae),每組10只大鼠,Pue組大鼠腹腔注射葛根素注射液165 mg/(kg·d),Pae組丹皮酚(1.25 mg/kg)灌胃,Pue+Pae組先給予大鼠腹腔注射與Pue組等濃度的葛根素注射液,然后用Pae組等濃度的丹皮酚灌胃,DM組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水溶液,共持續(xù)8周。

    飼養(yǎng)的環(huán)境:明暗各12 h,溫度保持在20~24℃,相對(duì)濕度保持在50%~70%范圍內(nèi)。本研究遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)條例》的相關(guān)規(guī)定。

    1.3 觀察指標(biāo) 胰腺組織處理之后觀察胰腺線粒體中的MDA、ROS、SOD水平;Western blot方法觀察各組大鼠脂肪細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4含量變化。

    1.4 胰腺組織處理和指標(biāo)測(cè)定 4組大鼠禁食12 h后每組取5只剖腹取出胰腺,沖洗,擦干,去除脂肪,稱其質(zhì)量,用冷卻過(guò)后的生理鹽水制成一定濃度的組織勻漿,然后離心,離速2000 r/min,時(shí)間10 min,取上清液,然后以1100 r/min的離速低溫離心20min,沉淀,然后用冰冷的生理鹽水制成線粒體的懸浮液,超聲細(xì)胞粉碎儀破碎線粒體,按照試劑盒的說(shuō)明測(cè) MDA、ROS、SOD水平。

    每組將剩余的5只大鼠麻醉后,立即取出大鼠腎周圍的脂肪組織,稱重,按照Western blot操作方法操作,最后用 Sigmagel軟件對(duì)X射線膠片上進(jìn)行陽(yáng)性信號(hào)處理。加樣量誤差由β-actin進(jìn)行矯正。

    表1 3組動(dòng)物模型胰腺組織線粒體MDA、ROS、SOD水平比較Tab.1 Comparison of animal pancreas tissuemitochondrial MDA,ROS,SOD levels in threemodels

    2.2 3組動(dòng)物模型大鼠脂肪細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4含量檢測(cè) 3組動(dòng)物模型大鼠脂肪細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4 Western blot檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。將每種模型DM組脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的吸光度設(shè)定為1,Pue治療組、Pae治療組、Pue+Pae治療組脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的吸光度見(jiàn)表2。Pue+Pae治療組為DM組的2~3倍。

    圖1 Western blot法檢測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4Fig.1 The expression of glucose transporter 4 detected by western blot in eachmodel

    表2 3組動(dòng)物模型葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4吸光度比較Tab.2 Comparison of the absorbance of glucose transporter 4 in threemodels

    3 討論

    特殊飲食誘導(dǎo)大鼠糖尿病的發(fā)病率較低[11],目前國(guó)內(nèi)主要以高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素為最常用的2型糖尿病大鼠造模方式。本研究表明,與DM組大鼠比較,Pue+Pae組大鼠胰腺組織中ROS、MDA水平明顯降低,SOD活性增強(qiáng),表明葛根素聯(lián)合丹皮酚可通過(guò)增強(qiáng)糖尿病大鼠胰島組織抗氧化酶的活性,加強(qiáng)對(duì)自由基的清除力度,減輕自由基對(duì)胰島β細(xì)胞的過(guò)氧化損傷,保護(hù)了胰島β細(xì)胞的功能。

    胰島素抵抗是糖尿病發(fā)病的機(jī)制之一[12],葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制障礙是胰島素抵抗的重要方面[13-14],葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4在胰島素的刺激下,通過(guò)異位作用轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜上[15],促進(jìn)葡萄糖在脂肪細(xì)胞儲(chǔ)存起來(lái),實(shí)驗(yàn)中3種模型的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4含量均增加,意在說(shuō)明葛根素、丹皮酚或2者聯(lián)合通過(guò)增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的含量降低血糖含量,從而起到預(yù)防或治療2型糖尿病的效果。2者配伍之后降低了胰腺組織細(xì)胞的MDA、ROS水平,提升了SOD水平,增加了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的含量,但是2者配伍后,葛根素和丹皮酚之間是如何發(fā)生相互作用及相關(guān)的作用機(jī)制尚不清楚,可以考慮從藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)或其他方面去研究。

    綜上,葛根素聯(lián)合丹皮酚可有效降低3種2型糖尿病動(dòng)物模型胰腺組織中MDA、ROS的水平,上調(diào)SOD的水平,并且增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的表達(dá)。

    [1] Newsholme P,Haber EP,Hirabara SM,et al.Diabetes associated cell stress and dysfunction:role of mitochondrial and non-mitochon-drial ROS production and activity[J].Physiol,2007,583(1):29-34.

    [2] Talib RA,Canguven O,Al Ansari A.Impact of sexual activity on glycated hemoglobin levels in patients with type 2 diabetes mellitus after penile prosthesis implantation[J].Urol J,2014, 11(4):1813-1818.

    [3] Gavi S,Hensley J.Diagnosis and management of type 2 diabetes in adults:a review of the ICSI guideline[J].Geriatrics,2009(64):12-29.

    [4] 付瑩坤.清潤(rùn)方對(duì)糖尿病的治療作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].北京:中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院,2012.

    [5] Zhao LX,Liu AC,Yu SW,et al.The permeability of puerarin loaded poly(butylcyanoacrylate)nanoparticles coated with polysorbate 80 on the blood-brain barrier and its protective effect against cerebral ischemia/reperfusion injury[J].Biol Pharm Bull,2013,36 (8):1263-1270.

    [6] Liu Y,Xue Q,Li X,et al.Amelioration of stroke-induced neurological deficiency by lyophilized powder of catapol and puerarin[J].Int JBiol Sci,2014,10(4):448-456.

    [7] Chen F, Zhang HQ, Zhu J, et al.Puerarin enhances superoxide dismutase activity and inhibits RAGE and VEGF expression in retinas of STZ-induced early diabetic rats[J].Asian Pac JTrop Med,2012,5(11):891-896.

    [8] 李娟娟,畢會(huì)民.葛根素對(duì)胰島素抵抗大鼠脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的影響[J].中國(guó)臨床學(xué)藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(8):885-887.

    [9] 張雷,陳立梅,倪紅霞,等.葛根素影響鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠脂肪細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的表達(dá)[J].中國(guó)臨床康復(fù),2006,10(39):135-138.

    [10] Hu J,Li YL,Li ZL,etal.Chronic supplementation of paeonol combined with danshensu for the improvement of vascular reactivity in the cerebral basilar artery of diabetic rats[ J].Int JMol Sci,2012,13(11):14565-14578.

    [11] 張松筠,楊長(zhǎng)春,郝詠梅,等.食源性肥胖大鼠2型糖尿病模型的建立[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2010,28:5212-5215.

    [12] 溫雨晴,譚迎春,呂墩濤,等.胃轉(zhuǎn)流術(shù)對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺胰島素抵抗的影響[J].世界華人消化雜志,2014,22(10):1431-1435.

    [13] 高磊,劉絳光.對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的討論[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè),1999,20(6):274-276.

    [14] 張?jiān)鰝?葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4在細(xì)胞中的生理作用研究進(jìn)展[J].實(shí)用診斷與治療雜志,2005(3):191-193.

    [15] Absalan A, Mohiti-Ardakani J, Hadinedoushan H, et al.Hydro-Alcoholic Cinnamon Extract,Enhances Glucose Transporter Isotype-4 Translocation from Intracellular Compartments into the Cytoplasmic Membrane of C2C12 Myotubes[J].Indian JClin Biochem,2012, 27(4):351-356.

    (編校:吳茜)

    Effect of puerarin combined w ith paeonol on pancreatic tissue and glucose transporter 4 in three ratmodels w ith type 2 diabetesmellitus

    SU Li-ping1,CHEN Li2,XUE Ming-ming1,SU Li-jun3,QIPeng3,HE Lei3,HOU Shi-lei3

    (1.Basicalmedical laboratory,Inner Mongolia Medical University,Hohhot010059,China;2.Aviation Medical room,Inner Mongolia Branch of Air China International Hohhot010070,China;3.The Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Hohhot010059,China)

    Objective To investigate the effectof puerarin combined with paeonol on pancreatic tissue and glucose transporter4 in threemodels of animalwith type 2 diabetes mellitus.Methods 120 Wistar rats modelled by special diet-induced method,injection of streptozotocin(STZ),special dietary plus STZ injection method respectively were randomly divided into 3 parts,40 rats in each part,each partwas used to study amodel,and each model was random ly divided into diabetic(DM)group,puerarin(Pue)group,paeonol(Pae)group and puerarin combined with paeonol(Pue+Pae)group.After 8-week treatment,ROS,SOD and MDA ofmitochondria weremeasured in 4 rats of each model in the pancreas.Western blotwas used to detect the expression of GLUT4 in adipocytes.Results No animal died during the experiment,allwere involved in the result analysis.The SOD activity of Pae group pue group and(Pue+Pae)group were all significantly increased(P<0.01),while MDA、ROS decreased(P<0.01,or P<0.05)this change in(pue+pae)group wasmore obvious(P<0.01);the absorbance of GLUT4 of the model group was represented by 1,the other group of data was compared with DM group,therewere significant differences(P<0.05)and the(Pue+Pae)group was2~3 times DM group(P<0.01).Conclusion MDA,ROS levelwere reduced and SOD level was improved;puerarin combined with paeonol treatment group can improve the glucose transporter 4 protein content.

    puerarin;paeonol;glucose transporter 4

    R285.5;R322.4+91;R335+.6

    A

    1005-1678(2014)06-0041-03

    內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(2013MS1143)

    蘇立平,男,碩士,實(shí)驗(yàn)師,研究方向:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn),E-mail:suliping1975@163.com;陳立 ,通信作者,女,主治醫(yī)師,研究方向:內(nèi)科學(xué)、航醫(yī)學(xué),E-mail:Blueice@qq.com。

    猜你喜歡
    丹皮葛根素動(dòng)物模型
    肥胖中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    胃癌前病變動(dòng)物模型復(fù)制實(shí)驗(yàn)進(jìn)展
    葛根素抑制小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的作用
    潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    葛根素對(duì)高糖誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
    鳳丹愈傷組織中丹皮酚含量的測(cè)定
    3種丹皮酚凝膠經(jīng)皮滲透性能的比較
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:51
    葛根素生物黏附微球的制備及評(píng)價(jià)
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    糖尿病性視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    纈沙坦聯(lián)合葛根素在早期2型糖尿病腎病治療中的作用
    午夜日韩欧美国产| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品三级大全| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲成av人片在线播放无| 永久网站在线| 亚洲,欧美精品.| 亚洲国产精品成人综合色| 国产亚洲欧美98| 国产精品野战在线观看| 不卡一级毛片| 日韩欧美三级三区| 日韩欧美精品免费久久 | .国产精品久久| 国产av麻豆久久久久久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲 国产 在线| 十八禁网站免费在线| 久久久久国内视频| 精品久久久久久久久久久久久| 色5月婷婷丁香| 波多野结衣高清无吗| 哪里可以看免费的av片| 老鸭窝网址在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲无线观看免费| 五月伊人婷婷丁香| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美另类亚洲清纯唯美| 婷婷精品国产亚洲av| 婷婷色综合大香蕉| 日韩av在线大香蕉| 日韩欧美在线二视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久精品国产自在天天线| 观看美女的网站| 欧美色欧美亚洲另类二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 99国产极品粉嫩在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 国产单亲对白刺激| 婷婷亚洲欧美| av欧美777| 久久6这里有精品| 国产单亲对白刺激| 一个人看的www免费观看视频| 精华霜和精华液先用哪个| av在线天堂中文字幕| bbb黄色大片| 欧美潮喷喷水| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品乱码久久久久久99久播| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品永久免费网站| 伦理电影大哥的女人| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美成人a在线观看| 亚洲avbb在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美午夜高清在线| 亚洲av免费高清在线观看| av在线老鸭窝| 悠悠久久av| 亚洲内射少妇av| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 丝袜美腿在线中文| 国产色爽女视频免费观看| 久久香蕉精品热| 91麻豆精品激情在线观看国产| 精品久久久久久久末码| 老女人水多毛片| 午夜两性在线视频| 亚洲内射少妇av| 国产成人av教育| 午夜日韩欧美国产| 欧美bdsm另类| 免费观看的影片在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 热99re8久久精品国产| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲七黄色美女视频| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产精品合色在线| 宅男免费午夜| 99热6这里只有精品| 免费av观看视频| av在线观看视频网站免费| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产成人啪精品午夜网站| 日本成人三级电影网站| 九色成人免费人妻av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 看片在线看免费视频| av天堂在线播放| 偷拍熟女少妇极品色| 极品教师在线视频| 午夜两性在线视频| 嫩草影院精品99| 亚洲一区高清亚洲精品| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品一及| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 91九色精品人成在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 欧美色视频一区免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 久久伊人香网站| 小说图片视频综合网站| 国产一区二区激情短视频| 很黄的视频免费| 一本综合久久免费| 日本 av在线| 最后的刺客免费高清国语| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产男靠女视频免费网站| 超碰av人人做人人爽久久| 99久国产av精品| 亚洲色图av天堂| 国产91精品成人一区二区三区| 男人和女人高潮做爰伦理| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产一区二区在线观看日韩| 真人一进一出gif抽搐免费| 看黄色毛片网站| 无遮挡黄片免费观看| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品永久免费网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 性插视频无遮挡在线免费观看| 老女人水多毛片| 国产精品综合久久久久久久免费| 嫩草影院新地址| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品一区二区三区视频在线观看免费| av在线天堂中文字幕| 亚洲男人的天堂狠狠| 一区二区三区激情视频| 黄色视频,在线免费观看| 91麻豆av在线| 免费在线观看影片大全网站| 精品免费久久久久久久清纯| 免费在线观看日本一区| eeuss影院久久| 日韩欧美精品免费久久 | 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲国产精品久久男人天堂| 嫩草影视91久久| 一夜夜www| 一本精品99久久精品77| 国产精品影院久久| 青草久久国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费高清视频大片| 婷婷丁香在线五月| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久久午夜电影| 精品久久久久久成人av| 1000部很黄的大片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲国产精品999在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产男靠女视频免费网站| 天天躁日日操中文字幕| 中文字幕高清在线视频| 一进一出好大好爽视频| 99热6这里只有精品| 伦理电影大哥的女人| 丰满的人妻完整版| 夜夜夜夜夜久久久久| 一个人看的www免费观看视频| АⅤ资源中文在线天堂| 中文字幕免费在线视频6| 成年女人看的毛片在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 午夜视频国产福利| 国产一区二区在线观看日韩| 99热6这里只有精品| 免费av观看视频| av中文乱码字幕在线| 国产av不卡久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲欧美激情综合另类| 国产大屁股一区二区在线视频| 日本熟妇午夜| 12—13女人毛片做爰片一| 国产成年人精品一区二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 五月玫瑰六月丁香| 欧美黑人巨大hd| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品不卡视频一区二区 | 男人和女人高潮做爰伦理| 国产色爽女视频免费观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 五月玫瑰六月丁香| 久久草成人影院| 人妻夜夜爽99麻豆av| 观看美女的网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 91字幕亚洲| 亚洲国产精品成人综合色| 99久久精品一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲熟妇熟女久久| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜福利在线在线| 麻豆国产av国片精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久人人爽人人爽人人片va | 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| a级一级毛片免费在线观看| 一a级毛片在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品在线美女| 日本 欧美在线| 亚洲午夜理论影院| 美女黄网站色视频| 最新在线观看一区二区三区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲av第一区精品v没综合| 日日夜夜操网爽| 一a级毛片在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美性猛交黑人性爽| 中文在线观看免费www的网站| 午夜影院日韩av| 久久久色成人| 国产老妇女一区| 国产精品爽爽va在线观看网站| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利欧美成人| 国产单亲对白刺激| 男人舔奶头视频| 天天躁日日操中文字幕| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 我要搜黄色片| 欧美高清成人免费视频www| 97超视频在线观看视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜免费成人在线视频| 国产真实乱freesex| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 18禁在线播放成人免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 香蕉av资源在线| 成年免费大片在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 最近在线观看免费完整版| 欧美精品啪啪一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 成人三级黄色视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲精华国产精华精| 国产精品亚洲美女久久久| 国产成年人精品一区二区| 亚洲美女搞黄在线观看 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 一区二区三区免费毛片| 一个人看的www免费观看视频| 深爱激情五月婷婷| 久久久久久久久中文| 天堂动漫精品| 亚洲人成网站高清观看| 日韩欧美三级三区| 国产av一区在线观看免费| 免费看a级黄色片| 1024手机看黄色片| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一个人观看的视频www高清免费观看| 色综合婷婷激情| 亚洲av美国av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产男靠女视频免费网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 免费在线观看影片大全网站| 欧美色视频一区免费| 日本成人三级电影网站| 一区二区三区免费毛片| 久久国产精品影院| 精品久久久久久久末码| 波野结衣二区三区在线| 丝袜美腿在线中文| 99久久九九国产精品国产免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 窝窝影院91人妻| 88av欧美| 国产色爽女视频免费观看| 日本 av在线| 99久国产av精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99热6这里只有精品| 一区二区三区高清视频在线| 简卡轻食公司| 日本黄大片高清| 亚洲精品久久国产高清桃花| 伦理电影大哥的女人| 一夜夜www| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| av黄色大香蕉| 在线观看一区二区三区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 九九热线精品视视频播放| 成人一区二区视频在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 久久国产精品人妻蜜桃| 99热只有精品国产| 天堂网av新在线| 亚洲,欧美精品.| av黄色大香蕉| 美女黄网站色视频| 成人美女网站在线观看视频| 久久人人爽人人爽人人片va | 婷婷六月久久综合丁香| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 一区福利在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久精品国产清高在天天线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲avbb在线观看| 黄色女人牲交| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 色吧在线观看| 亚洲在线自拍视频| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美国产日韩亚洲一区| 我的女老师完整版在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 天堂网av新在线| 亚洲18禁久久av| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品一及| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品色激情综合| 午夜久久久久精精品| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品久久电影中文字幕| eeuss影院久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲片人在线观看| 久久伊人香网站| 午夜a级毛片| 免费黄网站久久成人精品 | 成人美女网站在线观看视频| 变态另类丝袜制服| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 亚洲av成人av| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 色综合婷婷激情| 我要看日韩黄色一级片| 日韩国内少妇激情av| 69人妻影院| 757午夜福利合集在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲五月天丁香| 波野结衣二区三区在线| 久久性视频一级片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲国产色片| 神马国产精品三级电影在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 免费在线观看亚洲国产| 午夜福利18| 国产精品久久久久久久久免 | 成年免费大片在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲综合色惰| 高潮久久久久久久久久久不卡| 五月玫瑰六月丁香| 成人精品一区二区免费| 99国产综合亚洲精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 一级av片app| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 级片在线观看| 少妇的逼好多水| 午夜视频国产福利| 天美传媒精品一区二区| 波野结衣二区三区在线| 精品欧美国产一区二区三| 两个人的视频大全免费| x7x7x7水蜜桃| 欧美在线黄色| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成人av一区二区三区在线看| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产黄色小视频在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 十八禁人妻一区二区| 国产精品一区二区性色av| 国产真实乱freesex| 国产精品影院久久| 亚洲av不卡在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲精品粉嫩美女一区| 韩国av一区二区三区四区| 岛国在线免费视频观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日韩亚洲欧美综合| 最好的美女福利视频网| 国产久久久一区二区三区| 88av欧美| 在线播放无遮挡| 69人妻影院| 在线观看66精品国产| 在现免费观看毛片| 国产精品影院久久| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美精品啪啪一区二区三区| 桃红色精品国产亚洲av| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产欧美人成| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品一区二区三区四区久久| 在线播放无遮挡| 岛国在线免费视频观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 91av网一区二区| 日本在线视频免费播放| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 69av精品久久久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美色视频一区免费| av在线观看视频网站免费| 校园春色视频在线观看| 波多野结衣高清作品| 91在线观看av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 久久这里只有精品中国| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日韩国内少妇激情av| 午夜老司机福利剧场| 久久热精品热| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 97超视频在线观看视频| 韩国av一区二区三区四区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 夜夜夜夜夜久久久久| 婷婷六月久久综合丁香| 国产伦精品一区二区三区四那| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久久久久久成人| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产成人啪精品午夜网站| 免费高清视频大片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 我的老师免费观看完整版| 国产69精品久久久久777片| 午夜福利欧美成人| 看免费av毛片| 一夜夜www| 亚洲电影在线观看av| 99久久精品国产亚洲精品| 一a级毛片在线观看| 久久久精品大字幕| 亚洲最大成人av| 国产黄片美女视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜福利欧美成人| 99精品在免费线老司机午夜| av天堂在线播放| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产一区二区激情短视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久9热在线精品视频| 国产男靠女视频免费网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 99久久九九国产精品国产免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 观看免费一级毛片| 久久久精品欧美日韩精品| 久久国产精品影院| 久久久久性生活片| 我的女老师完整版在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久久亚洲av毛片大全| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成年版毛片免费区| 三级毛片av免费| 久久这里只有精品中国| 中文字幕av在线有码专区| 最近最新免费中文字幕在线| 此物有八面人人有两片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 天堂√8在线中文| 国内精品一区二区在线观看| 午夜精品在线福利| 亚洲欧美日韩无卡精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 极品教师在线免费播放| 亚洲电影在线观看av| 又爽又黄无遮挡网站| 精品午夜福利在线看| 天天一区二区日本电影三级| 国产淫片久久久久久久久 | 日本一二三区视频观看| 色在线成人网| 成人美女网站在线观看视频| 岛国在线免费视频观看| 久久热精品热| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产一区二区激情短视频| 国语自产精品视频在线第100页| 成人性生交大片免费视频hd| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产日本99.免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 99精品在免费线老司机午夜| 夜夜爽天天搞| 精品人妻1区二区| 十八禁国产超污无遮挡网站| 69人妻影院| 午夜福利高清视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲av电影在线进入| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久99热6这里只有精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 757午夜福利合集在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 黄色女人牲交| 国产精品亚洲美女久久久| 真人一进一出gif抽搐免费| 男女下面进入的视频免费午夜| 看黄色毛片网站| av在线老鸭窝| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产一区二区三区视频了| 午夜福利成人在线免费观看| 色哟哟·www| 女同久久另类99精品国产91| 国产成人欧美在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| av天堂中文字幕网| 欧美黄色淫秽网站| 国产黄a三级三级三级人| 婷婷精品国产亚洲av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 天堂√8在线中文| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费无遮挡裸体视频| 很黄的视频免费| 亚洲18禁久久av| 一个人看的www免费观看视频| 久久99热6这里只有精品| 国产成年人精品一区二区| 白带黄色成豆腐渣| 免费在线观看成人毛片| 88av欧美| 国语自产精品视频在线第100页| 成年免费大片在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产精品国产高清国产av| 欧美色欧美亚洲另类二区| АⅤ资源中文在线天堂| 日本成人三级电影网站| 极品教师在线视频| 亚洲无线在线观看| 亚洲精品在线美女| 亚洲久久久久久中文字幕| 深爱激情五月婷婷|