晚期非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用順鉑化療后MRP和LRP基因的表達(dá)

溫志軍

（山東東營勝利油田中心醫(yī)院 胸外科，山東 東營 257034）

晚期非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用順鉑化療后MRP和LRP基因的表達(dá)

溫志軍

（山東東營勝利油田中心醫(yī)院 胸外科，山東 東營 257034）

目的探討多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP（multidrug resistance associated protein，MRP）和肺耐藥相關(guān)蛋白（lung resistance protein，LRP）在非小細(xì)胞肺癌中的基因表達(dá)及與順鉑耐藥的關(guān)系。方法搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者13例，應(yīng)用RT-PCR法檢測化療前后MRP和LRP基因表達(dá)，Logistic回歸分析法分析2種蛋白基因表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP基因和LRP基因表達(dá)均顯著增高（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。結(jié)論應(yīng)用順鉑化療后MRP和LRP基因表達(dá)增高，且2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性。

非小細(xì)胞肺癌；順鉑；多藥耐藥相關(guān)蛋白；肺耐藥相關(guān)蛋白

作為惡性腫瘤之一的非小細(xì)胞肺癌目前在世界上的發(fā)病率和死亡率居高不下[1]，由于疾病初期的隱匿性，發(fā)現(xiàn)時(shí)常已為晚期，手術(shù)切除率低，以順鉑為主的標(biāo)準(zhǔn)化療方案成為治療的重要手段[2-3]。但是，鉑類藥物容易引起耐藥，導(dǎo)致化療失敗，成為臨床應(yīng)用的重要障礙。造成鉑類藥物耐藥的原因很多，目前認(rèn)為同多藥耐藥機(jī)制有關(guān)[4-5]。本實(shí)驗(yàn)主要回顧了13例晚期非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本MRP和LRP基因表達(dá)以及以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案的療效，并用Logistic回歸分析法分析了2種蛋白基因表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集胸外科2013年1月～2014年1月收治的非小細(xì)胞肺癌患者13例，其中男性8例，女性5例，平均年齡（59±4.63）歲，患者經(jīng)均經(jīng)支氣管鏡下活檢確診，接受2周期以上常規(guī)化療方案。本研究通過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 TrizolTM試劑盒購于北京鼎國生物技術(shù)有限公司，熒光定量PCR儀（ABI公司，型號(hào)：9700），微量分析儀（Quwell公司，型號(hào)：Q-5000）。

1.3 RT-PCR法檢測MRP和LRP基因表達(dá) 搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本，按照試劑盒說明書采用Trizol一步法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物序列見表1：25 μL反應(yīng)體系，預(yù)變性 94℃ 1 min，退火 60℃ 1 min，延伸72℃2 min，循環(huán)35次。余按試劑盒說明進(jìn)行操作，用反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度與內(nèi)參的比值表示該基因表達(dá)強(qiáng)度。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 RT-PCR primer sequences

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，正態(tài)計(jì)量資料用“±s”表示，組間比較采用單因素方差分析。計(jì)算藥物泵MRP和LRP相關(guān)系數(shù)r，進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RT-PCR法檢測MRP和LRP基因表達(dá) 與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP表達(dá)顯著增高（P＜0.05），與化療前相比化療后患者LRP表達(dá)比增高（P＜0.05，見圖1）。

圖1 化療前后MRP和LRP基因表達(dá)變化*P＜0.05，與化療前相比Fig.1 The expression of MRP and LRP mRNA*P＜0.05，compared with the prior to chemotherapy

2.2 MRP與LRP基因表達(dá)相關(guān)性的研究 Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。

3 結(jié)論

目前對腫瘤多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)的研究中[6-7]，最為廣泛的是一類耐藥相關(guān)蛋白，這些蛋白的過度表達(dá)可降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，導(dǎo)致應(yīng)用鉑類藥物化療失敗。MRP與LRP屬于新型耐藥相關(guān)基因[8-10]，在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外改變藥物濃度分布比例介導(dǎo)耐藥。MRP最早于1992年由科學(xué)家Cole發(fā)現(xiàn)[11]，此后該蛋白同肺癌耐藥的相關(guān)性成為熱點(diǎn)研究對象。有國外文獻(xiàn)報(bào)道，該蛋白表達(dá)情況同肺癌預(yù)后情況關(guān)系密切，與生物學(xué)惡性表型有關(guān)，可以作為預(yù)后指標(biāo)。LRP缺乏MRP特有的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的ATP結(jié)合位點(diǎn)[12]，引起耐藥機(jī)制沒有統(tǒng)一結(jié)論，其中一種假說是LRP具有調(diào)節(jié)核質(zhì)同囊泡的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)功能[13-14]，大量藥物存儲(chǔ)于囊泡中，藥物核/質(zhì)比值減少引起耐藥。本文主要搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者13例應(yīng)用RT-PCR法檢測化療前后MRP和LRP基因表達(dá)，并用

Logistic回歸分析法分析2種蛋白基因表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果顯示：與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP表達(dá)比增高（P＜0.05），與順鉑化療前相比化療后患者LRP表達(dá)比增高（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。雖然應(yīng)用順鉑化療后，MRP和LRP基因表達(dá)增高，但是2種蛋白的基因表達(dá)卻不具有相關(guān)性，說明作為原發(fā)耐藥的指標(biāo)，有可能作為靶點(diǎn)優(yōu)化臨床化療方案，改善療效。雖然有報(bào)道稱MRP與LRP具相關(guān)性，與二者同位于16號(hào)染色體短臂有關(guān)[15]，本文結(jié)論與之不同，可能同樣本數(shù)較少有關(guān)，MRP和LRP基因表達(dá)同順鉑耐藥關(guān)系的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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Clinical study of MRP and LRP mRNA expression in peple with human non-small cell lung cancer after cisplatin chemotherapy

WEN Zhi-jun
（Department of Cardiothoracic Surgery, Shengli Oilfield Central Hospital, Dongying 257034, China）

ObjectiveTo investigate the mRNA expression of the multidrug resistance associated protein and lung resistance protein in human non-small cell lung cancer tissues and their relationship with cis-platinum.Methods13 samples were collected from patients with non small cell lung cancer before and after chemotherapy, the mRNA expression of MRP and LRP were detected using RT-PCR method, correlation between two genes were studied by Logistic regression analysis.ResultsCompared with before cisplatin chemotherapy, MRP and LRP expression of patients were increased after chemotherapy(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that there is no correlation between the two genes(r=0.036，P＜0.05).ConclusionCisplatin chemotherapy can increase the mRNA expression of MRP and LRP, and there is no correlation between the two genes.

non small-cell lung cancer;cis-platinum complexes;multidrug resistance associated protein;lung resistance protein

R 734.2

A

1005-1678(2014)02-0118-02

山東省高?？萍加?jì)劃（J 11 LF 75）

溫志軍，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：胸外科腫瘤，E-mail：3262407372@163.com。