不同吸附劑對血甲基對硫磷灌流清除率的實驗研究*

陳雁君 高知義 李 寧 程曉平 張建萍 郭建麗

(1濟寧醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)院，山東 濟寧 272067;2上海徐匯區(qū)疾病預(yù)防控制中心，上海 200237)

甲基對硫磷(methyl parathion)屬高毒性農(nóng)藥，大鼠急性經(jīng)口半數(shù)致死量(median lethal dose，LD50)為14～8mg/kg，急性經(jīng)皮LD50為67mg/kg[1]，對棉、麻、果蔬害蟲殺滅作用強，中毒情況較常見。對于急性重度患者，只用洗胃、輸液和解毒劑等常規(guī)治療效果不佳，目前常采用血液灌流的方法進行治療，能提高搶救成功率，減少并發(fā)癥的發(fā)生，成為目前救治各種急性重度毒物、藥物中毒的較理想的方法之一[2-5]。

血液灌流(hemoperfusion)是血液借助體外循環(huán)，使血液反復(fù)流經(jīng)裝有固體吸附劑的容器中，以清除血中毒物的方法。本文選取HA230樹脂、包膜活性炭、三菱化學(xué)SP825吸附樹脂和AmberliteXAD16樹脂做灌流吸附材料，對血中甲基對硫磷進行灌流吸附，比較其對不同濃度有機磷農(nóng)藥的定量清除率，以期為臨床血液灌流的治療及改進提供有價值的參考數(shù)據(jù)。

1 實驗部分1.1 儀器與試劑

GC-14BPTF氣相色譜儀；火焰光度檢測器；CLASS-GC10色譜工作站(日本島津)。

甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%)；包膜活性炭(廊坊愛爾血液凈化器材廠)；HA230吸附樹脂(珠海麗珠醫(yī)用生物材料有限公司)；三菱化學(xué)SP825樹脂和AmberliteXAD16樹脂(北京慧德易科技有限公司)。

1.2 實驗步驟

1.2.1甲基對硫磷中毒血樣的制備 抽取健康人全血，加少量肝素抗凝，各取1.0ml置于各試管中，然后分別加入甲基對硫磷10、20、30、40、60、80、100μg，混勻器震蕩1min，充分混勻。

1.2.2吸附柱的制備和中毒血樣的灌流清除 準(zhǔn)確稱取HA230樹脂、包膜活性炭、三菱化學(xué)SP825和AmberliteXAD16樹脂吸附劑各100mg，裝入小型玻璃層析柱中，使其填充的均勻、緊密，然后用生理鹽水潤濕。將制備好的中毒血樣以0.5ml/min的流速反復(fù)流經(jīng)上述吸附柱1.5h[6]。

1.2.3血樣灌流后清除率的測定 用具塞刻度試管接受用上述4種吸附柱灌流吸附凈化后的血樣，加入3.0ml乙酸乙酯，于振蕩器上振蕩萃取2min，然后，以2000r/min離心10min，取上清液。重復(fù)操作3次，合并萃取液，緩緩吹氮揮發(fā)溶劑，定容1.0ml，進行氣相色譜分析,計算甲基對硫磷的清除率。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取甲基對硫磷儲備液配成2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/ml標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，分別進樣1.0μl，進行氣相色譜分析，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1，保留時間為(7.30±0.1)min。工作曲線的回歸方程為Y =-4987.7 + 8315X，r= 0.9987，式中X為進樣量(ng)，Y為峰面積的響應(yīng)值(μv.s)。

圖1 甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.2 加標(biāo)回收率與精密度

按照實驗方法在線性范圍內(nèi)做加標(biāo)回收實驗,血樣中按表1加入甲基對硫磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液，制備低、中、高3種濃度的中毒血樣，然后按實驗方法萃取、測定甲基對硫磷含量，計算加標(biāo)回收率，平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足衛(wèi)生分析的要求[7]。

2.3 甲基對硫磷中毒血樣的灌流清除

2.3.14種吸附劑對不同濃度中毒血樣的灌流清除率 按照實驗方法，將以上制備的7種不同濃度的甲基對硫磷中毒血樣反復(fù)通過HA230樹脂、包膜活性炭、三菱化學(xué)SP825樹脂和AmberliteXAD16樹脂吸附劑制備的灌流柱1.5h，萃取凈化后測定血中殘留的甲基對硫磷含量，計算甲基對硫磷的清除率，結(jié)果見圖2。

圖2 4種吸附劑對血中甲基對硫磷的清除率曲線

圖2顯示，4種吸附劑對血中甲基對硫磷的清除率均隨加標(biāo)量的增加而呈下降趨勢，其中AmberliteXAD16下降最為顯著，三菱SP825樹脂下降幅度最小。三菱SP825樹脂和HA230樹脂清除率較好，在每毫升血加標(biāo)量≤30μg時，清除率曲線呈現(xiàn)平臺，且對甲基對硫磷清除率均在98%以上，此后三菱樹脂清除率緩慢下降，HA230樹脂下降較迅速，至加標(biāo)量40μg時，清除率分別為82.8%、75.1%。包膜活性炭最大清除率較低92.8%，加標(biāo)量30μg前下降較緩，此后則呈穩(wěn)步快速降低趨勢，而AmberliteXAD16樹脂清除率曲線前段降幅較小，加標(biāo)量40μg以后，下降迅速，最大加標(biāo)量時僅為24.9%。綜上可知，吸附劑用量相等時，對血甲基對硫磷的清除效果以三菱SP825樹脂最佳，HA230樹脂次之，包膜活性炭和AmberliteXAD16樹脂稍差。

2.3.2吸附劑用量對灌流清除率的影響 分別取HA230樹脂、包膜活性炭、三菱化學(xué)SP825樹脂和AmberliteXAD16樹脂吸附劑10、30、50、80、120、150mg制備灌流吸附柱，各吸附柱均加入中毒血樣(加標(biāo)量30μg)1.0ml，灌流1.5h，然后按實驗方法操作，計算各灌流柱的甲基對硫磷清除率結(jié)果見圖3。

圖3 4種吸附劑對血中甲基對硫磷的清除率 (n=3)

圖3表明：每毫升血甲基對硫磷加標(biāo)量為30μg，吸附劑用量為30mg時，以三菱SP825樹脂清除效果最佳，清除率為92.6%；HA230樹脂和AmberliteXAD16樹脂次之，清除率分別為87.4%、86.7%，而此時活性炭較差為52.8%。吸附劑用量為80mg時，三菱SP825樹脂、HA230樹脂和AmberliteXAD16樹脂清除率接近，分別為98.6%、97.0%和98.2%，且呈現(xiàn)平臺趨勢，此時活性炭清除率為提高到79.7%，仍然稍差。繼續(xù)增加吸附劑的使用劑量，活性炭清除率繼續(xù)增加，至120mg用量時可達(dá)96.0%，而其它3種吸附劑清除率曲線變化不大，說明血中甲基對硫磷的清除已近完全，增加吸附劑用量亦不能再提高清除率。繼續(xù)增加包膜活性炭用量，其曲線上升趨勢變緩，至150mg用量時，清除率達(dá)96.7%，并趨于平臺化，說明此時活性炭對血中甲基對硫磷的清除率已接近最大。因此，三菱SP825樹脂、HA230樹脂和AmberliteXAD16樹脂吸附劑用量約為80mg時，即可清除掉濃度為30μg/ml甲基對硫磷中毒血樣中絕大部分毒物，而活性炭的需用量則需增加到120mg時，清除率方能達(dá)到96.0%以上。

綜上所述，血液灌流對血液中有機磷農(nóng)藥甲基對硫磷具有較好的吸附清除效果，而灌流中使用吸附劑的是影響灌流效果的最關(guān)鍵因素。由于血液灌流使血液反復(fù)流經(jīng)固體吸附劑來清除血中的毒物，灌流過程中吸附劑與血液直接接觸，吸附劑作為異物可能會對血液成分產(chǎn)生影響，導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生。因而，吸附劑的血液相容性是導(dǎo)致灌流副作用的主要原因。目前，HA230SP825樹脂、包膜活性炭已被廣泛用于臨床疾病的治療，療效好，副作用較小，除了對血小板及血鉀離子的影響有統(tǒng)計學(xué)意義外，對其它成分影響均較小，只要灌流前選擇好適應(yīng)癥和禁忌癥，治療過程中注意對血液相關(guān)指標(biāo)進行監(jiān)測，不會導(dǎo)致嚴(yán)重后果的發(fā)生。另外，三菱化學(xué)SP825樹脂和AmberliteXAD16樹脂能否用于臨床有機磷農(nóng)藥中毒的灌流治療，良好的血液相容性是關(guān)鍵，因而需對其血液相容性進行考察或選用合適的包膜材料改善對血液成分的影響。

[1] 萬有葵，文保元. 農(nóng)毒性博覽[M].濟南：山東科學(xué)出版社，1986：13.

[2] 于笑霞，王立新，田俊閣.血液灌流對有機磷農(nóng)藥清除的作用[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2005，14(4): 282-285.

[3] 胡春，周令芳，陳佩華. 血液灌流搶救嚴(yán)重有機磷農(nóng)藥中毒的探討[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2002，18(12): 1057-1058.

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[5] 陳雁君，金永久，李寧，等.血液灌流治療有機磷中毒對硫線磷及硫酸阿托品吸附作用的實驗研究[J].濟寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，32(4)：272-275.

[6] 李士雨，王紹亭. 血液灌流時間的理論分析[J].中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報,1996,15(6):154-158.

[7] 陳雁君，高知義. HA230 樹脂和包膜活性炭灌流吸附劑清除甲基對硫磷比較[J].濟寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報2007,30(1)：17-19.