胃癌患者血清脂肪酸合酶表達(dá)水平的診斷意義

林 潔，戴海峰

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化醫(yī)學(xué)中心，江蘇南京 210011;2.江蘇省腫瘤醫(yī)院鎮(zhèn)痛科，江蘇南京 210009)

胃癌患者血清脂肪酸合酶表達(dá)水平的診斷意義

林 潔1，戴海峰2

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化醫(yī)學(xué)中心，江蘇南京 210011;2.江蘇省腫瘤醫(yī)院鎮(zhèn)痛科，江蘇南京 210009)

目的 探討胃癌患者血清脂肪酸合酶(FAS)表達(dá)水平的診斷意義。方法 收集2012年1月—2013年12月在南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院首次診斷為原發(fā)性胃癌的患者53例，其中Ⅰ和Ⅱ期患者24例，Ⅲ和Ⅳ期患者29例，并以51例來自健康體檢的漢族人群與52例慢性淺表性胃炎的患者為對(duì)照，通過ELISA方法對(duì)研究對(duì)象的血清FAS表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測。結(jié)果 胃癌患者血清FAS的表達(dá)水平(5.25±0.48)ng/mL，明顯高于健康對(duì)照組(2.82±0.28)ng/mL 與慢性淺表性胃炎組(3.24 ±0.37)ng/mL，P＜0.05。通過 ROC 曲線分析，確定診斷胃癌的血清FAS最佳臨界值為3.78 ng/mL。相較于Ⅰ和Ⅱ期患者FAS:(4.04±0.35)ng/mL，Ⅲ和Ⅳ期患者血清FAS(5.83±1.37)ng/mL表達(dá)水平更高(P＜0.05)。10例患者在手術(shù)前血清FAS水平＞3.78 ng/mL，其中有7例術(shù)后下降至＜3.78 ng/mL(P＜0.05)。結(jié)論 血清FAS表達(dá)水平的升高與胃癌的發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)，對(duì)血清FAS含量的檢測有助于胃癌的診斷與隨訪。

胃癌;血清脂肪酸合酶;分子標(biāo)志物

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，居癌癥死因的第2位［1］。在中國，每年約有20多萬新發(fā)胃癌，甘肅、河西走廊、膠東半島、江浙沿海一帶均為高發(fā)區(qū)。由于胃癌在短時(shí)間內(nèi)容易復(fù)發(fā)且復(fù)發(fā)后生存時(shí)間較短，因此對(duì)胃癌及胃癌復(fù)發(fā)進(jìn)行早期診斷極為必要。其中，對(duì)有效生物標(biāo)記物的篩選與監(jiān)測是簡單易行便于臨床應(yīng)用的方法。

脂肪酸合酶(FAS)是脂質(zhì)合成最后一步的限速酶，被公認(rèn)為脂質(zhì)合成過程中的關(guān)鍵酶，是聯(lián)系脂質(zhì)代謝與腫瘤發(fā)生的重要紐帶。增生的腫瘤細(xì)胞利用長鏈脂肪酸進(jìn)行細(xì)胞膜的組裝、各種蛋白的脂質(zhì)修飾或者作為能量的一種有效來源，而以上各種行為均是維持腫瘤生長與生存所必須［2］。因此，F(xiàn)AS被認(rèn)為是“代謝性致癌基因”［3］。

已有研究發(fā)現(xiàn)血清FAS在乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌與胰腺癌患者體內(nèi)的表達(dá)高于健康人群［4-7］。但是，到目前為止，人們對(duì)于胃癌患者血清FAS的表達(dá)情況仍知之甚少。為此，本研究將對(duì)胃癌患者與健康人群血清中的FAS表達(dá)差異進(jìn)行探討，評(píng)價(jià)血清FAS的表達(dá)作為胃癌潛在生物標(biāo)記物的可行性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2012年1月—2013年12月在南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院首次診斷為原發(fā)性胃癌的患者53例，所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)確診。其中男38例，女15例，年齡35～92歲，平均63歲;Ⅰ和Ⅱ期患者24例，Ⅲ和Ⅳ期患者29例;11例患者經(jīng)手術(shù)治療。對(duì)照組來自51例健康體檢的漢族人群與52例慢性胃炎患者，對(duì)照組與病例組的年齡、性別匹配。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并且所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行靜脈采血5 mL(其中11例初發(fā)胃癌患者于手術(shù)前后分別采取了靜脈血)。未經(jīng)抗凝的全血標(biāo)本于室溫放置2 h后1 000×g離心20 min分離血清。根據(jù)說明書利用 FAS的ELISA試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司，貨號(hào)E-EL-H0375)進(jìn)行檢測。

簡要步驟如下:96孔板的各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100 μL，37 ℃孵育90 min后加入100 μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60 min，洗滌3次，加入100 μL酶結(jié)合物工作液，37℃孵育30 min，洗滌5次，加入90 μL底物溶液，37℃孵育15 min，加入50 μL終止液，立即在酶標(biāo)儀(Bio-Rad伯樂iMark酶標(biāo)儀)的450 nm波長處測量OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以上數(shù)據(jù)均使用Graph Pad Prism 5.0(Graph-Pad Software，San Diego，CA，USA)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)比較用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)(Mann-Whitney檢驗(yàn))，P＜0.05視為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。受試者操作特征性曲線(ROC曲線)用來判斷敏感性與特異性值。

2 結(jié)果

2.1 胃癌患者血清FAS表達(dá)水平

胃癌患者血清FAS的表達(dá)水平(5.25±0.48)ng/mL明顯高于健康對(duì)照組(2.82±0.28)ng/mL與慢性淺表性胃炎組(3.24 ±0.37)ng/mL，P ＜0.05。通過ROC曲線分析，使診斷敏感性與特異性最大化的最佳截?cái)嘀禐?.78 ng/mL，即以3.78 ng/mL作為最佳截?cái)嘀禃r(shí)，診斷敏感性(64%)與特異性(90.2%)最高，ROC 曲線下面積為 0.783(P ＜0.001)，如圖 1。

對(duì)不同臨床分期胃癌患者的血清FAS表達(dá)水平進(jìn)行分析，顯示相較于Ⅰ和Ⅱ期患者，Ⅲ和Ⅳ期患者血清FAS表達(dá)水平更高，分別為(4.04±0.35)ng/mL 與(5.83 ±1.37)ng/mL，P ＜0.05。

2.2 胃癌患者手術(shù)前后血清FAS的表達(dá)變化

11例胃癌患者在手術(shù)前后進(jìn)行了血清FAS表達(dá)水平的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)手術(shù)前有10例患者血清FAS水平＞3.78 ng/mL，而此10例患者中有7例血清FAS水平在術(shù)后下降至 ＜3.78 ng/mL(P＜0.05)。

圖1 胃癌患者血清FAS表達(dá)水平的ROC曲線分析Fig 1 ROC curve analysis of serum FAS levels in gastric carcinoma patients and control group

3 討論

目前的研究發(fā)現(xiàn)，用免疫組化染色的方法可以在胃癌患者的腫瘤樣本中檢測到FAS的表達(dá)。陳鳳鳴等［8］報(bào)道了胃癌患者癌組織中FAS呈高表達(dá)，且腫瘤分化程度越高FAS表達(dá)量越高;同時(shí)體外研究的結(jié)果表明脂肪酸合成酶抑制劑Cerulenin能夠顯著地阻遏人胃癌細(xì)胞株的增生并誘導(dǎo)其凋亡［9］，提示FAS參與胃癌發(fā)生的早期階段，可能成為胃癌治療的新靶點(diǎn)。通過ELISA的方法可對(duì)腫瘤患者血清FAS的表達(dá)水平進(jìn)行定量。先前的研究報(bào)道了血清FAS在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等患者中均高表達(dá)［4-7］。但血清FAS水平與胃癌之間的關(guān)系仍不清楚。

Wang等［4，6］用 ELISA 法定量發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞可將具有免疫活性的FAS分泌至胞外間隙與血清中。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者血清FAS水平明顯高于健康對(duì)照組和慢性淺表性胃炎組，且臨床分期晚的患者比分期早的患者血清FAS表達(dá)水平高，提示升高的血清FAS可能來自胃癌細(xì)胞的分泌，且與胃癌的進(jìn)展有關(guān)。此外，本研究對(duì)胃癌患者手術(shù)前后的血清FAS水平進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)10例患者中有7例血清FAS水平在手術(shù)后出現(xiàn)降低，此研究結(jié)果與先前關(guān)于胰腺癌的報(bào)道相一致［7］，即手術(shù)切除腫瘤導(dǎo)致血清FAS表達(dá)水平下降，說明腫瘤也許是患者體內(nèi)循環(huán)的FAS的主要來源，隨著腫瘤負(fù)荷的減輕，血清FAS表達(dá)水平降低。

綜上所述，本研究將胃癌患者的血清FAS水平與健康人群以及慢性淺表性胃炎患者進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)血清FAS的含量升高可作為胃癌早期診斷的輔助指標(biāo)，也可作為胃癌的一種初篩指標(biāo)。如果能夠?qū)⒀錐AS與其他經(jīng)典的腫瘤生物標(biāo)記如癌胚抗原(CEA)、糖抗原19-9(CA199)和糖抗原72-4(CA724)等聯(lián)合檢測，將有益于胃癌的診斷與篩查。當(dāng)然，本次研究的樣本數(shù)仍較少，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入探討。

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［1］Kelley JR，Duggan JM.Gastric cancer epidemiology and risk factors［J］.J Clin Epidemiol，2003，56(1):1 -9.

［2］Mashima T，Seimiya H，Tsuruo T.De novo fatty-acid synthesis and related pathways as molecular targets for cancer therapy［J］.Br J Cancer，2009，100(9):1369 -1372.

［3］Nauta RJ，Tsimoyiannis E，Uribe M，et al.Oxygen - derived free radical in hepatic ischemia and reperfusion injury in the rat［J］.Surg Gynecol Obstet，1990，171(2):120 -125.

［4］Wang Y，Kuhajda FP，Li JN，et al.Fatty acid synthase(FAS)expression in human breast cancer cell culture supernatants and in breast cancer patients［J］.Cancer Lett，2001，167(1):99-104.

［5］Vazquez-Martin A，F(xiàn)ernandez-Real JM，Oliveras-Ferraros C，et al.Fatty acid synthase activity regulates HER2 extracellular domain shedding into the circulation of HER2-positive meta- static breast cancer patients［J］.Int J Oncol，2009，35(6):1369 -1376.

［6］Wang Y，Kuhajda FP，Sokoll LJ，et al.Two-site ELISA for the quantitative determination of fatty acid synthase［J］.Clin Chim Acta，2001，304(1-2):107-115.

［7］Walter K，Hong SM，Nyhan S，et al.Serum fatty acid synthase as a marker of pancreatic neoplasia［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2009，18(9):2380-2385.

［8］陳鳳鳴，易粹瓊，陳濤，等.脂肪酸合成酶FASE在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2005，14(2):172-174.

［9］陳鳳鳴，易粹瓊，陳濤，等.脂肪酸合成酶抑制劑抑制人胃癌細(xì)胞增生并誘導(dǎo)凋亡［J］.世界華人消化雜志，2004，12(9):2024-2027.

Diagnostic significance of levels of serum fatty acid synthase in patients with gastric carcinoma

LIN Jie1，DAI Hai-feng2
(1.Gastroenterology Center，the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing210011，China;2.Analgesic Branch，Jiangsu Cancer Hospital，Nanjing210009，China)

［Abstract］ObjectiveTo investigate the diagnostic significance of serum fatty acid synthase(FAS)level in patients with gastric carcinoma.MethodsClinical data of 51 healthy controls，52 chronic superficial gastritis patients and 53 gastric cancer patients，who were firstly diagnosed as gastric carcinoma in the 2nd affiliated hospital of Nanjing Medical University from January 2012 to December 2013，were retrospectively analyzed.Serum FAS level was measured by ELISA and compared across patient groups and healthy controls.ResultsSignificantly higher levels of serum FAS were found in the gastric cancer patients(5.25 ±0.48)ng/mL compared to the healthy controls(2.82 ±0.28)ng/mL，P＜0.05，and chronic superficial gastritis patients(3.24 ±0.37)ng/mL，P＜0.05.Based on ROC curve analysis，cut off value for gastric carcinoma in the current study was 3.78 ng/mL.Expression levels of serum FAS were higher in the patients with advanced clinical stage［Ⅲ andⅣ，(5.83±1.37)ng/mL］compared to those with early stage［Ⅰand Ⅱ，(4.04±0.35)ng/mLP＜0.05］.Ten patients had preoperative FAS levels ＞3.78 ng/mL.The postoperative serum FAS levels decreased to ＜3.78 ng/mL(P＜0.05)in 7 of them.ConclusionThese results indicate that serum FAS is a potential biomarker for the detection of gastric cancer.

［Key words］gastric carcinoma;serum fatty acid synthase;biomarker

R735.2

A

1671-7295(2014)05-0475-03

林潔，戴海峰.胃癌患者血清脂肪酸合酶表達(dá)水平的診斷意義［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36(5):475-477.

10.11724/jdmu.2014.05.16

林潔(1982-)，女，江蘇連云港人，主治醫(yī)師。

戴海峰，主治醫(yī)師。E-mail:daihaifeng69@aliyun.com

2014-06-09;

2014-09-16)