二根龍蛭湯對腦缺血再灌注模型大鼠腦組織微循環(huán)的影響

頓寶生，范小璇，強(qiáng)選萍，逯 莉，馮文慧

(1.陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽 712046；2. 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712046)

缺血性腦血管病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病、多發(fā)病。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)，在急性腦血管病中，缺血性腦血管病占總數(shù)的50%～70%[1]，而缺血性中風(fēng)占全部急性腦血管疾病患者的86%[2]。因其具有高致殘率、高病死率的特點(diǎn)，給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。微循環(huán)障礙是缺血性腦血管病發(fā)生后主要的病理變化，因此，改善腦組織微循環(huán)是治療缺血性中風(fēng)的主要途徑。二根龍蛭湯是筆者通過長期臨床工作總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方，治療腦缺血性疾病效果良好，本實(shí)驗(yàn)旨在探討其作用機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1動物及分組 選用SD成年大鼠40只，體質(zhì)量(200±50)g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK 2012-003。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、對照組和治療組，每組10只。

1.2藥物 吡拉西坦片，宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；二根龍蛭湯，組方：葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎，水煎取汁，由陜西國際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3造模 參考文獻(xiàn)[3-4]制造缺血再灌注模型。所有動物購回后適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，術(shù)前12 h禁飲食，自由飲水。稱質(zhì)量后用10%水合氯醛(3.5 mL/kg) 腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后將大鼠固定在鼠板上，頸部剃毛，皮膚消毒后，取正中切口，仔細(xì)分離右側(cè)頸外動脈、頸內(nèi)動脈，用絲線結(jié)扎頸外動脈，頸內(nèi)動脈遠(yuǎn)端放置動脈夾；將頭皮針端口打磨光滑，把頭端涂油石蠟油的尼龍漁線從頸外動脈靠近分叉處導(dǎo)入血管內(nèi)，去掉動脈夾，在直視下緩慢推進(jìn)漁線入顱，遇到阻力后停止，入顱約1.8 cm；將頸內(nèi)動脈連同漁線一起結(jié)扎，缺血30 min，將造模成功(成功標(biāo)準(zhǔn)：蘇醒后出現(xiàn)左側(cè)前肢屈曲、內(nèi)收、左側(cè)轉(zhuǎn)圈、或向右側(cè)傾倒)大鼠放開頸外動脈結(jié)扎線，將留在外面的線拔除1 cm，使大腦中動脈再通。假手術(shù)組只切開頸部皮膚、暴露血管后縫合皮膚。

1.4治療方法 所有動物術(shù)后給予紅霉素軟膏涂抹傷口，假手術(shù)和模型組術(shù)后6 h開始給予進(jìn)食進(jìn)水。對照組術(shù)后6 h在進(jìn)食進(jìn)水的基礎(chǔ)上予吡拉西坦片，按人與實(shí)驗(yàn)用鼠比為1:10進(jìn)行換算后以3.6 g/(kg·d)量灌胃；治療組術(shù)后6 h進(jìn)食進(jìn)水，給予二根龍蛭湯，根據(jù)體質(zhì)量按人正常用量的10倍濃縮煎劑灌胃治療。

1.5Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 大鼠購回后第3 d開始進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，連續(xù)3 d；術(shù)后第4天再次進(jìn)行訓(xùn)練，3 d。術(shù)后第7天進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。放置一直徑1.3 m、深0.5 m的圓形水池，池壁為白色，標(biāo)明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4個象限，在任何一象限內(nèi)放置一個直徑10 cm、高25 cm的安全平臺，水面沒過平臺5 cm，水中注入適量奶粉，以目視看不見平臺為宜，水溫控制在25 ℃左右。記錄大鼠尋找到安全平臺時間，即逃避潛伏時間；再撤去平臺，選第Ⅱ象限入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄90 s內(nèi)大鼠跨越原平臺次數(shù)。

1.6指標(biāo)測定 模型動物經(jīng)治療7 d后將動物處死取腦。10%水合氯醛腹腔注射麻醉后經(jīng)左心室穿刺，生理鹽水沖洗，見肝臟顏色發(fā)白后在冰盤上迅速斷頭取腦，取右側(cè)大腦，去除小腦和延髓部分，距額極2.5 mm向后切去10 mm腦組織，稱質(zhì)量后移入玻璃勻漿管中，按1∶10(W/V)比例加入9倍體積的預(yù)冷生理鹽水，冰盤上勻漿，充分研碎，組織勻漿后4 000 r/min離心10 min后提取上清液待測。采用酶聯(lián)免疫法按VEGF試劑說明書配置洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物工作液等，加樣后采用全自動酶標(biāo)儀測定。

2 結(jié) 果

本研究死亡大鼠共4只，其中模型組2只，治療組和對照組各1只。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。治療后7 d，假手術(shù)組 VEGF含量(51.50± 5.17)ng/L，模型組(79.63± 8.42)ng/L，治療組(157.89± 10.49)ng/L，對照組(97.36± 41.14)ng/L。治療組大鼠腦組織VEGF含量較模型組明顯升高(t=3.84,P<0.05)，較對照組亦升高明顯(t=2.89,P<0.05)。

3 討 論

VEGF是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮生長因子,有促進(jìn)血管內(nèi)皮增生、增強(qiáng)血管通透性加速新血管形成的作用[5]。研究表明，在腦梗死發(fā)生后VEGF的表達(dá)會上調(diào)，促進(jìn)腦部缺血半暗帶區(qū)新血管形成，達(dá)到縮小梗死體積、減輕缺血損害的目的[6-7]。 VEGF參與了腦缺血后腦組織的病理修復(fù)過程[8]，在缺血性腦血管病中有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促新生血管形成保護(hù)神經(jīng)親神經(jīng)特性及增加腦血管通透性等生物學(xué)作用[9]。本項(xiàng)研究表明，二根龍蛭湯能改善腦缺血再灌注損傷后模型大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)中的學(xué)習(xí)記憶能力，提高大鼠腦組織中VEGF的含量，提示二根龍蛭湯改善腦缺血再灌注模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力可能與該方能提高腦組織中VEGF含量，改善腦組織微循環(huán)狀況有關(guān)。

表1 治療后7 d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05；③與對照組比較，P>0.05。

二根龍蛭湯是由葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎7味中藥組成。水蛭地龍共為君藥，水蛭咸、苦、平而歸肝經(jīng)，破血、逐瘀、通經(jīng)；地龍咸、寒歸肝、脾、膀胱經(jīng)，息風(fēng)通絡(luò)、利水。二藥共用使瘀血消散，閉阻之經(jīng)絡(luò)暢通。臣以丹參、紅花、川芎，丹參苦、寒，歸心、肝經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、涼血安神之功效；紅花辛溫，歸心、肝經(jīng)，具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛之功效。二者相須為用，功專于化瘀，再加活血行氣、祛風(fēng)止痛之川芎，能上行頭目，旁通絡(luò)脈，使瘀血去、經(jīng)脈通，頭痛止，意識清。佐以葛根，甘辛涼，解肌退熱，擴(kuò)管通脈。使藥白茅根甘、寒，涼血止血，清熱利水，使熱散而血止，濕滲則水利。全方共奏化瘀通絡(luò)利水之效。

研究發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯改善急性血瘀模型大鼠的血流變學(xué)作用，且高劑量組對全血黏度低切值的降低作用明顯強(qiáng)于低劑量組，并呈一定量效關(guān)系[10]。丹參素可以改善脂多糖引起的小鼠的腦微循環(huán)障礙, 該作用可能與其抑制粒細(xì)胞黏附分子CD11b和CD18、大腦皮質(zhì)血管內(nèi)皮黏附分子ICAM-1和E-selectin的表達(dá), 抑制血漿炎性因子TNF-A產(chǎn)生有關(guān)[11]。紅花黃色素能明顯提升缺血再灌注后局部腦血流量，降低腦組織的含水量，縮小腦梗死面積，減輕缺血所致的組織病理學(xué)變化，可通過抗氧化保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受大鼠腦缺血再灌注的損傷[12]。川芎具有抗凝抑制血小板聚集，增加纖溶活性，降低血黏度，抑制腦缺血時體內(nèi)血小板激活，解除血管平滑肌痙攣，擴(kuò)張血管改善微循環(huán)的作用；川芎提取物對鹽酸腎上腺素造成的小鼠耳郭微循環(huán)障礙具有明顯的改善作用，可明顯增加微循環(huán)障礙小鼠血流速度，擴(kuò)大微循環(huán)細(xì)小血管管徑，改善毛細(xì)血管開放數(shù)量[13]。

總之，二根龍蛭湯能改善腦缺血再灌注損傷模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，這一作用可能是通過提高腦組織內(nèi)VEGF含量，從而改善腦組織微循環(huán)來實(shí)現(xiàn)的。

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