巨噬細胞炎性蛋白-1α在病毒性心肌炎患者血清中的變化及其與心肌損害的關系

錢紅 劉理靜 鄒濤

臨床研究

巨噬細胞炎性蛋白-1α在病毒性心肌炎患者血清中的變化及其與心肌損害的關系

錢紅 劉理靜 鄒濤

作者單位：418000 湖南省懷化市，湖南醫(yī)藥學院臨床醫(yī)學系（錢紅、劉理靜）；南華大學附屬第一醫(yī)院心內科（鄒濤）

目的 探討巨噬細胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）在病毒性心肌炎（VMC）患者血清中的變化及其臨床意義。方法 收集26例急性期、20例恢復期VMC患者及25名健康人（對照組）血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定MIP-1α、心肌肌鈣蛋白I（cTnI）水平，通過日立7180型全自動生化分析儀檢測磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平。結果 VMC急性期組血清MIP-1α、cTnI、CK-MB水平顯著高于VMC恢復期組及對照組（P＜0.01）；但VMC恢復期組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。VMC急性期患者MIP-1α與cTnI、CK-MB呈正相關（r=0.78，0.75；P＜0.05）；而VMC恢復期MIP-1α與cTnI、CK-MB無相關性（r=0.32，0.39；P＞0.05）。結論 MIP-1α可能在VMC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，可作為評價VMC患者心肌損害的血清學指標。

病毒； 心肌炎； 巨噬細胞炎性蛋白-1α

病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是指嗜心肌病毒侵犯心臟引起的以心肌細胞壞死和間質細胞浸潤為重要病理特征的心肌疾病。近年來的研究證實，多種免疫細胞及其分泌的細胞因子參與了VMC的發(fā)生、發(fā)展與修復過程，其中趨化因子的作用越來越受到人們的關注。巨噬細胞炎性蛋白-1α（macrophage inammatory protein 1α，MIP-1α） 屬于趨化因子CC亞族的重要成員，與其受體結合后，可以發(fā)揮趨化、吞噬及促進炎癥介質合成和分泌的生物學功能，參與多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[1]。陳靜等[2]研究了MIP-1α在小鼠VMC病程中的表達，發(fā)現(xiàn)心肌MIP-1α表達水平在急性期最高，并且與心肌病理學評分呈正相關。然而，MIP-1α在VMC患者血清中的變化仍不清楚。心肌肌鈣蛋白 I（cardiac troponin I，cTnI）和磷酸肌酸激酶同工酶（creatine kinase isozyme，CK-MB）是反映心肌損傷的敏感指標。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測不同時期VMC患者和健康人血清MIP-1α水平，并分析MIP-1α與cTnI、CK-MB之間的關系，從而探討MIP-1α在VMC發(fā)病中的作用及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2014年4月湖南醫(yī)藥學院附屬第一醫(yī)院和南華大學附屬第一醫(yī)院心內科收治的46例VMC患者，均符合1999年全國研討會制定的成人急性VMC診斷參考標準[3]。急性期26例，男性14例，女性12例，年齡14～40（28.5±8.91）歲；其中 22 例柯薩奇病毒 B 組（coxsackievirus B，CVB）IgM 抗體陽性，4 例腺病毒（adenovirus,ADV）IgM抗體陽性。恢復期20例，男性 11例，女性 9 例，年齡 15～42（29.67±9.48）歲。排除既往有先心病、心肌病等其他心臟疾病的患者。對照組為同期進行健康體檢的25例健康人，且近2周內無感染、腹瀉病史，其中男性15例，女性10例，年齡 18～45（30.19±10.54）歲。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法 VMC患者入院當時，對照組于清晨空腹狀態(tài)下抽取3 ml肘靜脈血，將其置入普通生化管中，并立即送至檢驗科，24 h內將標本以3000 r/min離心10 min，提取上層血清。一部分新鮮血清進行CK-MB檢測，在日立7180型全自動生化分析儀上采用邁克公司試劑進行測定；其余血清貯藏于-20℃冰箱，以備統(tǒng)一檢測。通過雙抗體夾心ELISA檢測各組血清中MIP-1α、cTnI水平。試劑盒購于深圳晶美生物技術有限公司，嚴格按照試劑盒說明書由專人進行操作。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。實驗數(shù)據(jù)以±s表示，多組均數(shù)比較采用方差分析和兩兩之間比較的q檢驗，相關性采用直線相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清MIP-1α、cTnI、CK-MB水平比較 如表1所示，VMC急性期組患者血清MIP-1α、cTnI、CK-MB水平明顯高于VMC恢復期組和對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；但VMC恢復期組上述指標與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 VMC患者與對照組血清MIP-1α、cTnI、CK-MB 水平比較（±s）

表1 VMC患者與對照組血清MIP-1α、cTnI、CK-MB 水平比較（±s）

注：與VMC恢復期組和對照組比較，aP＜0.01

組別 例數(shù) MIP-1α（ng/L）CK-MB（U/L）VMC 急性期組 26 96.42±16.39a0.38±0.08a32.15±5.69aVMC 恢復期組 20 42.81±8.25 0.13±0.03 14.27±2.84對照組 25 38.39±7.64 0.11±0.02 12.39±2.17 F值 17.20 36.48 23.75 cTnI（μg/L）

2.2 VMC患者MIP-1α與cTnI、CK-MB相關性分析 直線相關分析顯示，VMC患者急性期血清MIP-1α 與 cTnI、CK-MB 均呈正相關 （r=0.78，0.75；P＜0.05）；但恢復期 MIP-1α 與 cTnI、CK-MB無相關性（r=0.32，0.39；P＞0.05）。

3 討論

VMC是臨床上常見的心血管疾病，以兒童及中青年患者居多，近年來發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯增高的趨勢，甚至50～60歲者也常有發(fā)病。此病病情差別甚大，輕者幾乎無癥狀，重者可出現(xiàn)急性心力衰竭或重度心律失常甚至猝死，預后不良，嚴重危害人類健康[4-6]。雖然VMC的發(fā)病機制迄今尚未完全闡明，但多數(shù)學者認為與病毒在心肌組織中的持續(xù)感染所造成的直接損傷作用，以及病毒感染后引起機體免疫系統(tǒng)紊亂尤其是T淋巴細胞功能異常有關，而病毒的直接損傷作用和（或）T淋巴細胞介導的免疫損傷，通過心肌組織的炎癥反應和心肌細胞凋亡兩種方式引起心肌細胞死亡，導致病情遷延不愈，形成慢性心肌炎，甚至擴張型心肌病[7-9]。此外，病毒類型、宿主遺傳背景和生理狀況及環(huán)境因素等均是決定VMC易感性和預后的重要因素。眾多的臨床及動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，許多炎性分子如黏附分子、趨化因子、細胞因子，以及與心肌細胞凋亡相關的基因異常表達在VMC的發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用[10-12]。

MIP-1α相對分子質量為8 KD，其基因定位于小鼠第11號染色體，在人類則位于第17號染色體。在不同部位、不同因素刺激下，MIP-1α可由單核/巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞、中性粒細胞、B淋巴細胞等多種細胞產(chǎn)生。MIP-1α與其他趨化因子相似，都是通過G蛋白耦聯(lián)的七次跨膜受體起作用，其受體主要包括CCR1、CCR4、CCR5和CCR9。MIP-1α的生物學活性非常復雜，且無種屬特異性，既可刺激巨噬細胞分泌白細胞介素（interleukin，IL）-1、IL-6 及腫瘤壞死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）等炎癥介質，又可特異性地趨化單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞向炎癥部位遷移，極大地促進炎癥反應[13-15]。

MIP-1α是一種重要的促炎介質，與心肌炎的發(fā)生發(fā)展密切相關。Toyozaki等[16]在實驗性自身免疫性心肌炎小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，心肌組織MIP-1α mRNA表達水平明顯上調，采用MIP-1α單克隆抗體阻斷其作用后，心肌炎癥顯著減輕，心臟功能恢復。另有研究表明，采用基因打靶技術去除小鼠MIP-1α基因后感染CVB3，發(fā)現(xiàn)基因敲除（MIP-1α-/-）小鼠心肌炎癥病變顯著減輕，而對照的野生型（MIP-1α+/+）小鼠則出現(xiàn)嚴重的心肌損害[17]。血清cTnI、CK-MB水平增高對心肌損害的早期診斷具有重要價值。本研究結果表明，VMC急性期組血清MIP-1α、cTnI及CK-MB水平明顯高于恢復期組和對照組（P＜0.01），但恢復期這些指標趨于正常，并且VMC患者在急性期MIP-1α與cTnI、CKMB呈正相關，恢復期無相關性，提示MIP-1α過表達可能參與VMC的發(fā)生發(fā)展過程，并且與心肌損害程度及病情進展密切相關，可作為一個較好的血清學指標。當MIP-1α表達升高時，一方面引起IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥介質分泌增加，另一方面募集單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞等炎癥細胞至心肌，最終形成瀑布式炎癥級聯(lián)反應，加重心肌損傷。因此，應用 MIP-1α單克隆抗體、特異性抑制劑或者受體拮抗劑等抑制MIP-1α過表達，可阻斷炎癥連鎖反應，減輕心肌損害，未來有望成為治療VMC的新靶點，值得深入研究。

綜上所述，血清MIP-1α水平在VMC患者急性期升高，在恢復期則降至正常，并且與心肌損害程度密切相關，測定MIP-1α血清水平可作為臨床判斷VMC患者病情、療效及預后的新指標。

［1］陳靜，范曉晨.巨噬細胞炎性蛋白-1α與病毒性心肌炎.廣東醫(yī)學，2013，34：970-972.

［2］陳靜，范曉晨.巨噬細胞炎性蛋白-1α在小鼠病毒性心肌炎中的表達.臨床兒科雜志，2013，31：964-967.

［3］中華心血管病編輯委員會心肌炎心肌病對策專題組.關于成人急性病毒性心肌炎診斷參考標準和采納世界衛(wèi)生組織國際心臟病學會聯(lián)合工作組關于心肌病定義和分類的意見.中華心血管病雜志，1999，27：405.

［4］Sagar S，Liu PP，Cooper LT.Myocarditis.Lancet，2012，379：738-747.

［5］Panagopoulos P，Terzi I，Karanikas M，et al.Myocarditis，pancreatitis，polyarthritis，mononeuritis multiplex and vasculitis with symmetrical peripheral gangrene of the lower extremities as a rare presentation of leptospirosis：a case report and review of the literature.J Med Case Rep，2014，8：150-158.

［6］Arola A，Ojala T，Lauerma K，et al.Myocarditis in children：a diagnostic and therapeutic challenge.Duodecim，2014，130：317-325.

［7］孫景輝，翟淑波.病毒性心肌炎發(fā)病機制的研究進展.臨床兒科雜志，2012，30：607-612.

［8］陳雪嬌，朱紅楓.病毒性心肌炎發(fā)病機制研究進展.西南軍醫(yī)，2012，14：294-295.

［9］Shen Y，Kan QC，Xu W，et al.Coxsackievirus B3 infection induced viral myocarditis by regulating the expression pattern of chemokines in cardiac myocytes.Iran J Allergy Asthma Immunol，2009，8：1-9.

［10］Brunetti L，Evelyn R，Pesantis D.Treatments of viral myocarditis caused by coxsackievirus B.Am J Health Syst Pharm，2008，65：132-137.

［11］Schultz JC，Hilliard AA，Cooper LT Jr，et al.Diagnosis and treatment of viral myocarditis.Mayo Clin Proc，2009，84：1001-1009.

［12］Shauer A，Gotsman I，Keren A，et al.Acute viral myocarditis：current concepts in diagnosis and treatment.Isr Med Assoc J，2013，15：180-185.

［13］Stuart MJ，Baune BT.Chemokines and chemokine receptors in mood disorders， schizophrenia， and cognitive impairment： a systematic review of biomarker studies.Neurosci Biobehav Rev，2014，42：93-115.

［14］Petkovi AB，Mati SM，Stamatovi NV，et al.Proinflammatory cytokines（IL-1beta and TNF-alpha） and chemokines（IL-8 and MIP-1alpha）as markers of periimplant tissue condition.Int J Oral Maxillofac Surg，2010，39：478-485.

［15］Okamura T，Katayama T，Obinata C，et al.Neuronal injury induces microglial production of macrophage inflammatory protein-1α in rat corticostriatal slice cultures.J Neurosci Res，2012，90：2127-2133.

［16］Toyozaki T，Saito T，Shiraishi H，et al.Macrophage inflammatory protein-1α relates to the recruitment of inflammatory cells in myosin-induced autoimmune myocarditis in rats.Lab Invest，2001，81：929-936.

［17］ Cook DN.The role of MIP-1 alpha in inflammation and hematopoiesis.J Leukoc Biol，1996，59：61-66.

Serum changes of macrophage inammatory protein-1α and its relationship with myocardial impairment in patients with viral myocarditis

QIAN Hong＊，LIU Li-jing，ZOU Tao.＊Department of Clinical Medicine，Hunan University of Medicine，Huaihua 418000，China

Objective To explore the changes of serum macrophage inammatory protein-1α（MIP-1α）levels in patients with viral myocarditis（VMC）and its clinical significance.Methods The serum was collected from 26 cases with the acute stage VMC，20 cases with the recovery stage，and 25 healthy people（control group）.Serum levels of MIP-1α and cardiac troponin I（cTnI）were measured using enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.Also，serum creatine kinase isozyme（CK-MB）levels were detected by the 7180 type holo-automatic biochemistry analyzer of Hitachi.Results Serum MIP-1α，cTnI and CK-MB levels were higher in VMC group with the acute stage than those of VMC group with recovery stage and control group（P＜0.01）.There was no significant difference in above indicators between VMC group with recovery stage and control group（P＞0.05）.There was positive correlations between MIP-1α and cTnI as well as CK-MB（r=0.78，0.75，P＜0.05）in VMC patients with acute stage，but these correlations did not exist in VMC patients with recovery stage （r=0.32，0.39，P＞0.05）.Conclusion MIP-1α may play an important role in the occurrence and development of VMC，and it can act as a serum indicator to evaluate myocardial impairment in VMC patients.

Virus； Myocarditis； Macrophage inammatory protein-1α

懷化市科技計劃項目資助（項目編號：2013-10-4）

10.3969/j.issn.1672－5301.2014.08.005

R542.2+1

A

1672-5301（2014）08-0689－03

2014-06-18）