CIP2A在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

黎 劍 于曉紅 杜 峰 謝 康 魏玲麗 黃雅娟 張 樂

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，早期患者預(yù)后較好，但晚期乳腺癌預(yù)后仍較差。目前研究認(rèn)為，乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與癌基因關(guān)系密切[1-2]。蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被發(fā)現(xiàn)的1種癌蛋白[3]。其在乳腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理的相關(guān)性仍不十分清楚。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法及RT-PCR檢測CIP2A在乳腺癌組織及癌旁組織的表達(dá)，探討乳腺癌組織中CIP2A表達(dá)，以及與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月-2012年12月我院乳腺外科收治的70例行手術(shù)切除的臨床病理資料保存完整的乳腺癌石蠟切塊，癌旁組織取自距癌組織0.5～1.0 cm。70例乳腺癌患者，年齡29～74歲，平均(48.6±13.2)歲；鱗狀細(xì)胞癌46例，腺細(xì)胞癌24例；病理分級：G1～G2級39例，G3級31例；根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)提出的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期26例。所有病例術(shù)前均未行放化療。另取20例正常乳腺組織作為對照組。上述組織均由同一副主任以上病理醫(yī)師閱片明確病理診斷。

1.2 免疫組織化學(xué)

收集石蠟包埋的組織標(biāo)本，切片(厚4～5 μm)，免疫組織化學(xué)采用S-P法，兔抗人CIP2A單克隆抗體(福建邁新生物工程公司)，工作濃度1∶20，S-P免疫組化試劑盒購自北京中杉橋生物公司，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。PBS代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標(biāo)本作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

CIP2A陽性染色信號為棕色細(xì)小顆粒，均位于細(xì)胞質(zhì)。隨機(jī)抽取10個高倍視野，結(jié)果判斷采用半定量方法。按著色強(qiáng)度分：細(xì)胞無著色為0分；細(xì)胞著色為淺黃色為1分；細(xì)胞著色為棕黃色為2分；細(xì)胞著色為棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分率：無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞數(shù)<10%為1分；11%～50%為2分；51%～75%為3分；>75%為4分。上述兩者積分相乘為最后結(jié)果：0～2分為-；3～5分為+；6～8分為++；9～12分為+++。3分及以上為陽性。

1.4 RT-PCR檢測

將乳腺癌組織剪碎后提取總RNA，按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行RT-PCR檢測，應(yīng)用GeneSnap軟件對成像進(jìn)行分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CIP2A在乳腺癌、癌旁及正常組織中的表達(dá)

CIP2A陽性染色定位于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中，呈棕色細(xì)小顆粒，也可以呈彌漫分布。在乳腺癌組織中CIP2A陽性表達(dá)率為65.7%(46/70)，而20例正常組織中僅2例陽性(10.0%)，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；癌旁組織中CIP2A陽性表達(dá)率為21.4%(15/70)，與正常組及乳腺癌組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 CIP2A mRNA在乳腺癌組織中的轉(zhuǎn)錄水平

乳腺癌組織中CIP2A mRNA陽性檢出率為81.7%，高于癌旁組織中的26.7%。根據(jù)GeneSnap軟件分析提示，乳腺癌組織中CIP2A mRNA的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于癌旁組織的，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0 05)。

2.3 CIP2A表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系

CIP2A陽性表達(dá)與乳腺癌患者年齡、家族史無關(guān)，而與腫瘤大小、病理類型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腫瘤組織學(xué)分級、病理分期及病理分級有關(guān)(P<0.05)，見表1。

3 討論

表1 CIP2A表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系(例，%)

CIP2A(cancerous inhibitor of PP2A)是近年來新發(fā)現(xiàn)的抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白，大量研究表明，CIP2A在人肺癌、直腸癌、胃癌等中大量存在，而且與癌癥的惡性程度密切相關(guān)，提示腫瘤的不良結(jié)局[4-6]。進(jìn)一步研究證實(shí)，CIP2A在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂和腫瘤生長方面起到關(guān)鍵作用[7]。CIP2A的大量擴(kuò)增能防止腫瘤細(xì)胞的過度衰亡，使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖[8-10]。因此，推測CIP2A可能與癌癥的起源、進(jìn)展關(guān)系密切，被認(rèn)為是新一代的癌癥基因。

本研究結(jié)果表明，乳腺癌組織高表達(dá)CIP2A mRNA及蛋白，而且樣本陽性率高于癌旁組織。結(jié)果提示，CIP2A的存在代表著細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)化的中間環(huán)節(jié)，其水平變化在正常組織向乳腺癌轉(zhuǎn)化中起重要作用。同時(shí)，結(jié)合臨床資料研究發(fā)現(xiàn)，我們回顧性分析CIP2A蛋白與乳腺癌各臨床參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示CIP2A蛋白在乳腺癌中表達(dá)情況與患者家族史、腫瘤大小、病理類型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。而且隨著組織學(xué)分級和病理分期、分級的增加，CIP2A過表達(dá)也隨之升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以看出，CIP2A基因表達(dá)程度與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和惡性程度相關(guān)。

綜上所述，CIP2A在乳腺癌中的異常表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生展密切相關(guān)，有望成為早期診斷及預(yù)測乳腺癌預(yù)后的一個重要指標(biāo)。

[1] 馮 云，張 練，李振宇,等.Bmi-1和P16蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2012,33(17)：2616-2618.

[2] 楊 雪，宋 濤，楊 威，等.CIP2A在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué))，2011,32(4)：477-479.

[3] 游經(jīng)宏，周 凱，黃品助，等.CIP2A在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中華肝膽外科雜志，2011，17(3)：75-76.

[4] 麥 聰,唐云強(qiáng),洪 健,等.CIP2A在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國醫(yī)藥科學(xué),2011，2(11):35-36.

[5] 錢安平，辛 彥，肖玉平.CIP2A與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.世界華人消化雜志，2009，17(26)：2700-2704.

[6] 李 晶,蔣 瑛,李惠新,等.CIP2A在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,39(2):21-24.

[7] Dong QZ，Wang Y，Dong XJ,et al.CIP2A is overexpressed in non-small celllung Cancer and correlates with poor prognosis〔J〕.Ann Surg Oncol,2011，18(3):857-865.

[8] 周炳娟,張金庫,趙文明,等.基底細(xì)胞樣乳腺癌中CIP2A及c-myc蛋白表達(dá)及意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2012,28(9)：966-969.

[9] 周炳娟,張金庫,趙文明,等.基底細(xì)胞樣乳腺癌組織CIP2A蛋白表達(dá)臨床意義分析〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2012,19(13):1004-1006.

[10] Wang J,Li W，Li L,et al.CIP2A is over expressed in acute myeloidleukaemia and associated with HL60 cells proliferation and differentiation〔J〕.Int J Lab Hematol,2011，33(3):290-298.