食管癌術(shù)中胸腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查及DNA倍體分析

何枝生 匡?？?陳愛會 陰兵林 謝 梅 王東升 黃 建 郭昌瑩 程效良 王歡元

2007年4月2013年8月，我們將96例食管癌手術(shù)切除患者術(shù)中胸腔沖洗液行細(xì)胞學(xué)檢查及DNA倍體分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

96例均為我科2007年4月至2013年8月收治的行手術(shù)治療的食管癌患者，男性為71例，女性為25例，平均年齡為62.9歲。行左頸左胸二切口57例；左頸右胸腹正中三切口21例，右胸腹正中二切口8例，單純左開胸10例。

1.2 儀器和試劑

流式細(xì)胞儀為美國BCKMAN COULTER公司產(chǎn)品，DNA stain kit 為美國BCKMAN COULTER公司產(chǎn)品，免洗溶血素。

1.3 方法

開胸后即注入生理鹽水300 ml，用手輕輕攪拌，使生理鹽水與臟、壁層胸膜及縱膈胸膜充分接觸，特別注意肋膈角及胸腔頂部，用鹽水反復(fù)沖刷，同時將手術(shù)床調(diào)成頭高腳底位，用特制的小勺子將胸腔沖洗液取出，盡量避免使用注射器，以免細(xì)胞被破壞；同時開胸時止血，盡量減少沖洗液中的紅細(xì)胞，以免影響細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果；取出的胸腔沖洗液分成AB兩瓶，A瓶送細(xì)胞學(xué)檢查，B瓶送DNA倍體分析。將A瓶中胸腔沖洗液離心，3 000轉(zhuǎn)/min,每次3 min，共2～3次，棄去上清液，沉淀物2～4張，及時固定，HE染色，光鏡下觀察脫落細(xì)胞的形態(tài)。流式細(xì)胞儀測定DNA含量：800～1 000 r/min離心沉淀收集到的胸腔沖洗液，如為血性液體，用37 ℃預(yù)溫過的溶血劑溶解紅細(xì)胞，用pH 7.4 0.01 mol/L PBS洗滌2次，350目的濾網(wǎng)過濾除去細(xì)胞團(tuán)塊，將細(xì)胞數(shù)調(diào)整至106個/ml；按照DNA stain Kit st說明書進(jìn)行染色和固定，即時應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測；不能即刻上機(jī)檢測的，用終濃度為70%的酒精固定，4 ℃冰箱保存，上機(jī)前再染色固定。

2 結(jié)果

96例食管癌中細(xì)胞學(xué)檢查9例找到癌細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)21例異倍體。細(xì)胞學(xué)檢測陽性率及DNA異倍體檢出率與患者病程、年齡及性別無明顯相關(guān)性；但臨床分期越高，細(xì)胞學(xué)檢測陽性率及DNA異倍體檢出率越高，見表1。

表1 食管癌PLC細(xì)胞學(xué)檢查及DNA異倍體檢出情況/例

3 討論

開胸后未作任何胸內(nèi)操作前胸腔是一個剛被打開封閉了很久的潛在腔隙，被覆蓋的間皮細(xì)胞及其內(nèi)脫落細(xì)胞保持了術(shù)前在胸腔內(nèi)的狀態(tài)，選擇此時沖洗胸腔，沖洗液中的細(xì)胞均來自胸膜腔，較客觀反映胸膜腔的真實情況。術(shù)中胸腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查(pleural lavae cytology，PLC)在國內(nèi)外有多篇報道[1-2]，但因受到取材等多種因素影響，檢出率偏低，結(jié)合流式細(xì)胞儀檢查，特異性及敏感性均提高。

關(guān)于胸腔沖洗液癌細(xì)胞來源有學(xué)者提出3種途徑：①各種創(chuàng)傷性操作及手術(shù)本身引起的癌細(xì)胞擴(kuò)散；②癌細(xì)胞直接脫落；③淋巴源性。1975年Wang首次在胸膜上才淋巴孔，為胸腔沖洗液的研究提供了理論依據(jù)。食管粘膜下層具有豐富的毛細(xì)血管和毛細(xì)淋巴管，食管癌一旦侵犯到粘膜下層，就容易累及淋巴系統(tǒng)；由于胸膜下淋巴管有微小空隙與胸膜腔相通；本組病例中有1例早期患者胸腔沖洗液中找到癌細(xì)胞可能跟此有關(guān)。

部分術(shù)前無胸膜腔轉(zhuǎn)移征象患者胸腔沖洗液中細(xì)胞學(xué)陽性和(或)NNA異倍體陽性，提示胸膜腔受侵或胸膜播散或胸膜下淋巴網(wǎng)有腫瘤浸潤；此類患者為不完全切除；此類患者腫瘤侵襲性強(qiáng)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)的風(fēng)險高。

綜上所述我們認(rèn)為，食管癌術(shù)后應(yīng)給予化療或胸腔內(nèi)灌注化療，以提高患者生存率及改善患者生存質(zhì)量。

[1] 謝 冬,周 曉,姜格寧，等.肺癌胸腔沖洗液的研究進(jìn)展〔J〕.中華胸心血管外科雜志,2012,28(11):696-697,699.

[2] 王東升,匡裕康,謝 梅，等.肺癌術(shù)中胸腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查及DNA倍體分析〔J〕.實用癌癥雜志,2008,23(6):605-606.