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    EZH2在宮頸上皮內瘤變(CIN)及宮頸癌組織中的表達及意義

    2014-09-13 08:01:02翟錦霞馬雪梅杜秀英張一兵
    實用癌癥雜志 2014年9期
    關鍵詞:內瘤癌基因上皮

    魏 璇 翟錦霞 馬雪梅 杜秀英 張一兵

    子宮頸癌(cervical carcinoma,CC)的發(fā)生呈逐年上升并且有年輕化的趨勢[1],我國每年宮頸癌新增病例約為13.7萬人[2]。子宮頸癌是由癌前病變宮頸上皮內瘤變 (cervical intraepithelial neoplasia,CIN)逐步發(fā)展形成的,其發(fā)病過程經(jīng)歷了CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、早期浸潤癌、浸潤癌五個階段。宮頸癌的發(fā)生機制尚不完全明確,涉及多種因素,其中癌基因和抑癌基因在宮頸癌演變過程中的作用已越來越多地受到人們的重視。

    腫瘤中的分子標志物的表達可以表現(xiàn)腫瘤的一些生物學特性,檢測這些分子標志物對腫瘤的早期診斷、進展檢測和預后評估有潛在的臨床應用價值。迄今為止,EZH2在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中的表達及功能少有報道,本研究通過對不同病變的宮頸上皮內瘤變、宮頸癌組織中EZH2的表達,來探討他們在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及其相互關系。

    1 材料與方法

    1.1 研究對象

    收集我院2009年1月-2010年6月收治的65例宮頸癌石蠟標本(其中活檢標本31例,手術標本34例)及CIN 90例(其中CINⅠ 30例,CINⅡ 30例,CINⅢ級30例)作為實驗組。同時,隨機選取同期因良性病變行全子宮切除的30例正常宮頸組織作為對照組。實驗組155例,對照組30例,實驗組與對照組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學意義。入選病例既往均無放療、化療及激素治療史。

    1.2 主要試劑

    EZH2抗體、S-P試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。

    1.3 方法

    EZH2蛋白表達的檢測采用免疫組織化學S-P法,嚴格按照試劑盒說明進行操作,以PBS代替一抗作為陰性對照,以已知陽性切片作為陽性對照。

    1.4 免疫組化結果判定標準

    EZH2主要表達于細胞核。按照參考文獻[3]中的方法判定陽性細胞:陽性染色為棕黃色,以陽性細胞占腫瘤細胞總數(shù)的比率和染色強度作為陽性判斷依據(jù)。于高倍鏡下隨機取 10 個不同視野,各計數(shù)100 個細胞觀察。陽性細胞數(shù)≤25%為0分,26%~50%為1分,51%~75%為2分,>75%為3分;陽性染色強度:無著色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。上述兩者得分相乘為最后結果,0~1分為陰性表達,≥2分為陽性表達。

    1.5 統(tǒng)計學處理

    所有數(shù)據(jù)均應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析,陽性率間的比較采用卡方(χ2)檢驗及Fisher確切概率計算法;蛋白表達相關性分析采用有序分組資料的線性趨勢檢驗。

    2 結果

    2.1 EZH2在正常宮頸組織、CIN和宮頸癌組織中的表達

    正常對照組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組、宮頸癌組中EZH2陽性表達率分別為 13.3%(4/30)、30.0%(9/30)、40.0%(12/30)、56.7%(17/30)和76.9%(50/65);差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。

    2.2 EZH2表達與CIN組織和宮頸癌組織臨床病理特征的關系

    EZH2陽性表達與CIN組織病理學分級顯著相關,其與宮頸癌臨床分期無顯著相關性,見表1。

    表1 EZH2表達與CIN組織和宮頸癌組織臨床病理特征的關系(例,%)

    3 討論

    宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤,其死亡率居女性腫瘤的第一位。近幾年來,宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢[4]。我國宮頸癌患病率和病死率占世界總和的三分之一[5],隨著分子生物學的發(fā)展和臨床深入研究,宮頸癌的發(fā)生是一個從非典型增生到原位癌再到浸潤癌的漸進過程。Sawaya等[6]研究表明,CIN Ⅰ級發(fā)展至CIN Ⅲ級的平均時間為9年,再發(fā)展到浸潤性癌則需要3個月到2年,宮頸癌5年存活率為67%,宮頸上皮內瘤樣變存活率變?yōu)?00%,故早期診治CIN是降低宮頸癌發(fā)生的關鍵。

    目前研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌的發(fā)生發(fā)展由癌基因及抑癌基因共同參與,通過不同機制使原癌基因激活,抑癌基因失活,從而使細胞增殖和凋亡失調。臨床上常用的巴氏試驗、宮頸細胞學涂片和活體組織學檢查方法受觀察者主客觀因素的影響,有些癌前病變難以做出準確診斷[7]。

    EZH2 (enhancer of zeste homolog 2 )是1996年發(fā)現(xiàn)的1種新型人類基因,是果蠅zeste基因的增強子,EZH2定位于人染色體7q35 位置上,該基因在基因組結構中覆蓋了近40kb, EZH2 具有組蛋白甲基轉移酶 HDAC 和多種基因外的調控作用,參與細胞的生長調節(jié),能夠減少轉錄因子與DNA結合,抑制靶基因的表達,促進細胞周期的演進和惡變[8-9]。EZH2還能增強原代細胞的生長能力。多項研究表明,EZH2基因在多種腫瘤中均呈高表達,被認為是一個新的候選癌基因,EZH2 表達上調使一些腫瘤抑制基因和腫瘤轉移抑制基因的表達受到抑制,導致細胞無限增殖,最終促進惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,另外,EZH2位于pRB-E2F通路的下游,上調EZH2 基因表達,使細胞周期調控異常,細胞增殖明顯,分化異常,導致腫瘤形成[10]。

    本研究采用免疫組化方法檢測EZH2在宮頸癌組織中的表達及其意義。本實驗正常對照組30例,CIN組共90例(CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ組均為30例),宮頸癌組65例。其中宮頸癌組根據(jù)臨床分期分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期,有淋巴結轉移11例,無淋巴結轉移54例,EZH2蛋白的陽性表達率依次顯著性升高 。EZH2在宮頸癌組中的表達高于正常宮頸組織及CIN組。EZH2基因表達增強與宮頸癌惡性生長及不良預后有關。本研究結果也提示宮頸癌中 EZH2 基因表達可考慮作為宮頸癌新的分子標志物,用于宮頸癌早期診斷、監(jiān)測病情進展,并可以作為判斷預后的指標之一,同時也為應用EZH2作為靶點對宮頸癌進行基因治療提供了重要的實驗依據(jù)。

    [1] 張敏鴿.高危HPV與宮頸癌發(fā)生的相關性〔J〕.實用癌癥雜志,2012,27(6):670-672.

    [2] Ju XZ,Yang JM,Zhou XY,et al.EMMPRIN expression as a prognostic factor in radiotherapy of cervical cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2008,14(2):494-501.

    [3] 徐良中,楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志,1996,6(04):229-231.

    [4] Xue Q,Sano T,Kashiwabara K,et al.Aberrant expression of pRb,p16,p14ARF,MDM2,p21 and p53 in stage I adenocarcinomas of the lung〔J〕.Pathol Int,2002,52(2):103-109.

    [5] Levert M,Clavel C,Graesslin O,et al.Human papillo-mavirus typing in routine cervical smears:results from a series of 3778 patients〔J〕.Gynecol Obstel Fertil,2000,28 (10):722-728.

    [6] 李 雪,孔為民,韓 超,等.首都醫(yī)科大學附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院1992-2011年間宮頸癌發(fā)病趨勢分析〔J〕.中華婦幼臨床醫(yī)學雜志(電子版),2013,9(3):310-314.

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    [8] 呼松月,杜麗霞.宮頸細胞學涂片配合陰道鏡檢查對農村婦女宮頸疾病篩查的價值〔J〕.中國計劃生育和婦產(chǎn)科,2009,1(5):40-42.

    [9] Hock H.A complex polycomb issue:the two faces EZH2 in cancer〔J〕.Genes Dev,2012,26(8):751-755.

    [10] Coe BP,Thu KL,Aviel-Ronen S,et al.Genomic deregulation of the E2F/Rb pathway leads to activation of the oncogene EZH2 in small cell lung cancer〔J〕.PLoS One,2013,8(8):e71670.

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