激素受體及HER-2在乳腺癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)灶中表達差異及意義

陳志萍 周 毅 胡筱玉 萬向華 黃傳生 高 文

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展具有激素依賴性，因而內(nèi)分泌治療在乳腺癌的臨床治療中具有重要意義。內(nèi)分泌治療的有效率與ER、PR陽性表達正相關(guān)，ER陽性患者有效率達到50%～60%，對于受體陽性、病情發(fā)展緩慢的骨及軟組織轉(zhuǎn)移患者，主張首先內(nèi)分泌治療[1]。

值得注意的是，臨床上我們往往對復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的ER、PR受體狀況及HER2癌基因蛋白表達的判斷主要依賴于對原發(fā)灶測定而忽略了復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移灶中受體狀況是否會發(fā)生變化，從而造成內(nèi)分泌治療及靶向治療的過度治療或欠缺治療。本研究中針對30例乳腺癌出現(xiàn)復(fù)發(fā)時進行重新檢測復(fù)發(fā)灶中ER、PR及HER-2的表達水平，與原發(fā)灶相關(guān)表達水平進行比較，分析其臨床意義，根據(jù)復(fù)發(fā)灶中表達水平進行內(nèi)分泌治療。

1 材料與方法

1.1 病例資料

收集江西省腫瘤醫(yī)院2009年5月～2011年5月收治的30例復(fù)發(fā)乳腺癌患者,均為女性,年齡25～65歲，中位年齡40歲。所有患者初診時均已行手術(shù)治療，均行病理活檢證實為乳腺癌復(fù)發(fā)，所有病例均有病史資料及存檔的石蠟標本。所有標本均行3 μm厚連續(xù)切片，分別行HE 染色和免疫組化檢測。

1.2 方法與試劑

ER、PR 及HER-2 癌基因蛋白的單克隆抗體購自上海長島公司，貨號分別為M-0241，M-0448，M-0196，DAB顯色劑，超敏型免疫組化試劑盒購自于上海長島公司，乙醇、二甲苯等其它試劑購于市售。切片經(jīng)二甲苯脫蠟，常規(guī)梯度乙醇脫苯入水,3%H2O2處理5 min，PBS充分洗滌后置入檸檬酸緩沖液(pH 6.0),于微波爐中進行抗原熱修復(fù)，自然冷卻至室溫，加ER、PR及HER-2單克隆抗體,每片50 ml，4 ℃冰箱孵育過夜,PSB充分洗滌后加生物素標記的二抗(每片50 ml),室溫下30 min后PBS充分洗滌，加DAB顯色,蘇木精復(fù)染，中性樹脂封片，用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

隨機選擇5個高倍視野，計數(shù)500 個以上細胞，以細胞核著色為陽性,根據(jù)陽性細胞數(shù)及細胞染色強度進行半定量。無陽性細胞，計0分；陽性細胞數(shù)1 %～30 %計1 分；31 %～70 %計2 分；71 %～100 %計3分；再根據(jù)陽性著色強度依次計1、2、3 分(淺棕色為1 分,棕黃色為2 分,深棕色為3 分)，上述兩項分數(shù)之和為最后得分，0分為陰性，1～2 分為+，3～4 分為++，5～6 分為+++。其中ER、PR 按“+ ”以上均記為陽性，HER-2 按“+++” (即過表達) 記為陽性。

1.4 治療方法

根據(jù)復(fù)發(fā)灶ER、PR及HER-2表達狀況進行內(nèi)分泌治療。HR陰性患者未給予內(nèi)分泌治療，HR陽性患者給予內(nèi)分泌治療(三苯氧胺，芳香化酶抑制劑)，HER-2陽性患者給予靶向藥物治療及全身化療。

1.5 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR 及HER-2 癌基因蛋白在乳腺癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶組織中的表達

30例原發(fā)灶中ER陽性18例(60.0%)，PR陽性16例(53.3%)；復(fù)發(fā)灶中ER陽性11例(36.7%)，PR陽性9例(30.0%)，原發(fā)灶中8例HER-2陽性，陽性率為26.7%，復(fù)發(fā)灶中10例陽性，陽性率為33.3%。McNemer檢驗顯示原發(fā)灶和復(fù)發(fā)灶中ER、PR表達有顯著性差異(P<0.01)；HER-2表達差異無顯著性(P>0.01)，見表1。

表1 ER、PR 及HER-2 癌基因蛋白在乳腺癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)灶中的表達情況/%

2.2 ER、PR 及HER-2 癌基因蛋白在乳腺癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶組織中的表達

30例復(fù)發(fā)性乳腺癌患者中，ER由陽性轉(zhuǎn)為陰性率為66.7%(n=12)，陰性轉(zhuǎn)為陽性率為41.7%(n=5)，總的變化率為56.7%(17/30)；PR由陽性轉(zhuǎn)為陰性率為68.8%(n=11)，陰性轉(zhuǎn)為陽性率為28.6%(n=4)，PR總的變化率為50.0%(15/30)；HER-2由陽性轉(zhuǎn)為陰性率為25.0%(n=2)，陰性轉(zhuǎn)為陽性率為13.3%(n=4)，HER-2總的變化率為20.0%(n=6)，見表2。

表2 乳腺癌原發(fā)灶及復(fù)發(fā)灶中ER、PR及HER-2受體受體表達變化情況/例

2.3 隨訪結(jié)果

所有病例隨訪至2012年11月，中位隨訪時間為22.5個月(17.6～28.4個月)，隨訪率為100%。30例存活至今，未出現(xiàn)新的復(fù)發(fā)病灶，6例患者(復(fù)發(fā)灶中ER、PR及HER-2不存在表達差異)出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移病灶(肝臟轉(zhuǎn)移3例，骨轉(zhuǎn)移3例)。

3 討論

乳腺癌治療失敗主要原因為局部復(fù)發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移。臨床實際工作中，乳腺癌內(nèi)分泌治療依靠ER、PR表達狀況，靶向治療依靠HER-2表達狀況，即使出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移后內(nèi)分泌及靶向治療仍多依靠原發(fā)灶ER/PR表達狀況。2007年美國ASCO年會上，R.J.Broom等[2]研究268例患者原發(fā)灶、復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移灶中ER、PR的表達差異，結(jié)果顯示ER總的變化率為47%,、PR總的變化率為40%。通過此報道，乳腺癌相關(guān)性受體ER、PR、HER-2是否在乳腺癌進展期發(fā)生變化、如何變化及變化程度等問題引起廣泛關(guān)注。本研究得出：ER總的變化率為56.7%(17/30)，PR總的變化率為50.0%(15/30)，HER-2總的變化率為20.0%(n=6)。ER、PR變化率稍高于國內(nèi)外報道結(jié)果，HER-2變化率接近國內(nèi)外報道。結(jié)合上述結(jié)果提示：ER、PR會隨著腫瘤復(fù)發(fā)發(fā)生改變，對于復(fù)發(fā)患者，有必要重新測定復(fù)發(fā)病灶中ER、PR的實際狀況。本研究結(jié)果及國外多位學者研究結(jié)果中雖然各受體變化率存在差異[2-8]，但均提示ER、PR、HER-2表達狀況在乳腺癌腫瘤進展期間會發(fā)生變化。ER、PR、HER-2表達狀況發(fā)生變化的具體機制尚不明確。 從腫瘤基因角度尋找原因。首先，存在乳腺癌腫瘤內(nèi)部異質(zhì)性的可能，學者認為具有潛在轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)特性的克隆基因組只代表原發(fā)病灶中基因的一小部分，不一定能夠被檢測出來。原發(fā)灶被切除后，具有潛在轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)特性的基因組在不同于原發(fā)灶部位的生物環(huán)境中沉積，通過增殖、變異形成能夠被檢測出的轉(zhuǎn)移灶、復(fù)發(fā)灶[9-11]。其次，在腫瘤進展過程中，可能出現(xiàn)基因漂移或選擇性基因克隆[12]。另外,也有可能因為化療、放療等腫瘤治療方法對腫瘤克隆基因組造成一定影響[13-14]。

ER、PR、HER-2表達差異與其檢測技術(shù)、檢測人員等具有一定的相關(guān)性。ER、PR、HER-2的表達技術(shù)上能否完全重復(fù)。迄今為止，免疫組化檢測及FISH技術(shù)被認為是檢測ER、PR、HER-2最佳方法。然而，免疫組化檢測及FISH技術(shù)不是100%準確，也不能100%重復(fù)。不少研究中報道顯示即使是同一塊病理標本在不同醫(yī)院的病理科或同所醫(yī)院中不同病理醫(yī)生閱片所得出ER、PR、HER-2的表達狀況可能存在顯著性差異[15-16].檢測方法中不同的固定方法，選擇的抗體不同及評斷標準不同對免疫組化結(jié)果均有一定影響[17-18]。本研究為避免檢測方法、檢測人員方面的誤差，采用相同檢測技術(shù)人員及兩位高年資的病理醫(yī)師雙盲閱片后得出的診斷結(jié)果，其一致性為97%。本研究缺陷為樣本數(shù)有限，而且研究對象局限，僅對復(fù)發(fā)性乳腺癌患者的ER、PR及HER-2受體表達差異進行研究總結(jié)。因此加大研究的樣本量，檢測乳腺癌轉(zhuǎn)移病灶中ER、PR及HER-2受體表達并與原發(fā)灶進行分析研究，有望對臨床治療有更大的幫助。通過本項研究顯示乳腺癌復(fù)發(fā)灶與原發(fā)灶中ER、PR及HER-2受體表達存在差異，需要根據(jù)復(fù)發(fā)灶中ER、PR及HER-2受體實際表達，指導復(fù)發(fā)性乳腺癌的內(nèi)分泌治療及靶向治療，避免過度治療或欠缺治療。

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