宮頸癌患者臨床分期與免疫功能的關(guān)系研究

洪珍汶 李道成

腫瘤相關(guān)免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤發(fā)病的原因可能與免疫功能的下降有關(guān)[1]。同時(shí)以T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞(NK)為代表的機(jī)體免疫功能細(xì)胞也在抗腫瘤機(jī)制中發(fā)揮著免疫監(jiān)視、殺傷、調(diào)節(jié)等重要作用[2]。宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一，在女性腫瘤發(fā)生率中僅次于乳腺癌，居于第2位[3]。其嚴(yán)重威脅著女性患者的健康和生活質(zhì)量。本研究旨在了解宮頸癌患者免疫功能狀況及其與分期的相關(guān)性，為臨床工作中對(duì)宮頸癌患者的預(yù)后和病情評(píng)估提供參考。我們比較了各期宮頸癌患者與健康體檢女性外周血中的T細(xì)胞亞群數(shù)量及比例、NK細(xì)胞數(shù)量，并分析了各期宮頸癌患者的免疫功能狀況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2009年1月至2013年1月診治的0～Ⅳ期宮頸患者患者(觀察組)共70例，同期健康女性(對(duì)照組)60例。觀察組患者年齡38～69歲，平均年齡(45.8±3.9)歲，所有患者均經(jīng)過(guò)病理檢測(cè)確診。按照《新編常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》分期標(biāo)準(zhǔn)，0期14例，Ⅰ期21例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期17例。對(duì)照組研究對(duì)象年齡33～70歲，平均年齡(44.9±4.2)歲。所有入組研究對(duì)象均排除免疫抑制劑服用史及免疫系統(tǒng)疾病。2組患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。此外，入組前所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，并上報(bào)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

使用流式細(xì)胞儀和免疫熒光法檢測(cè)研究對(duì)象外周血中的T細(xì)胞亞群數(shù)量及比例、NK細(xì)胞數(shù)量。T淋巴細(xì)胞由CD3、CD4、CD8標(biāo)記，NK細(xì)胞由CD16和CD56標(biāo)記。所有研究對(duì)象均于同一采血部位抽取清晨空腹外周血2 ml，經(jīng)肝素抗凝，于4 ℃下保存。每個(gè)樣本取外周血100 μl，加入100 μl PBS稀釋，加入單抗[小鼠抗人CD3-FITC、CD8-PE、CD4-PE,(CD16+CD56)-PE抗體，Becton Dickinson公司]各20 μl。避光室溫下20 min，后加入1.5 ml紅細(xì)胞裂解液(BD公司),再經(jīng)過(guò)室溫避光10 min。紅細(xì)胞裂解后加入0.1%的PBS緩沖液2 ml，300 g下離心，清洗3次，棄去上清液。加入1 ml 0.1%的甲醛溶液固定,2 h內(nèi)于流式細(xì)胞儀(FACSCalibur型，Becton Dickinson公司)上檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用t檢驗(yàn)，使用單因素方差分析比較多樣本均數(shù)，使用q檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。宮頸癌患者的臨床分期與外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞數(shù)量的相關(guān)性分析使用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組研究對(duì)象的免疫細(xì)胞數(shù)量及比例比較

觀察組各期患者的CD3+、CD3+CD4+、NK細(xì)胞數(shù)量和CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均低于對(duì)照組，且分期越晚數(shù)量越低；而觀察組各期CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)量高于對(duì)照組，且分期越晚數(shù)量越高。對(duì)照組及觀察組Ⅱ～Ⅳ期研究對(duì)象中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞數(shù)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌0期研究對(duì)象CD3+CD4+細(xì)胞及CD3+CD4+/CD3+CD8+細(xì)胞比值低于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組研究對(duì)象的免疫細(xì)胞數(shù)量及比例比較結(jié)果

注：a為與對(duì)照組比較，P<0.05；b為與0期比較，P<0.05；c為與Ⅰ期比較，P<0.05；d為與Ⅱ期比較，P<0.05；e為與Ⅲ期比較，P<0.05。

2.2 宮頸癌分期與患者外周血中T細(xì)胞亞群數(shù)量及比例、NK細(xì)胞數(shù)量相關(guān)性分析

使用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析顯示宮頸癌患者的分期與其外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞數(shù)量有相關(guān)性；CD3+、CD3+CD4+、NK細(xì)胞數(shù)量和CD3+CD4+/CD3+CD8+細(xì)胞比值與宮頸癌患者的分期呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)；而CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)量與宮頸癌分析呈正相關(guān)(P<0.01)。

3 討論

正常的機(jī)體免疫系統(tǒng)能夠及時(shí)的識(shí)別并且有效的清除體內(nèi)的異常細(xì)胞和病原體，防御各種致病因素的侵襲，對(duì)于防止腫瘤的發(fā)生有著重要的意義。尤其是以T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞為代表的細(xì)胞免疫，是機(jī)體防御腫瘤機(jī)制中的主要成員[4]。它們能監(jiān)視并及時(shí)識(shí)別腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而對(duì)其發(fā)動(dòng)攻擊，并且轉(zhuǎn)化成能殺傷腫瘤細(xì)胞的致敏淋巴細(xì)胞。正是由于這種免疫機(jī)制的存在才能夠有效的降低腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[5]。

細(xì)胞免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，CD3+細(xì)胞能夠代表體內(nèi)T淋巴細(xì)胞的整體水平，其抗原分子表達(dá)于成熟的T細(xì)胞表面，主要包括CD4+和CD8+兩大亞群[6]。其中CD4+細(xì)胞主要是輔助性T淋巴細(xì)胞，協(xié)同并誘導(dǎo)其他免疫機(jī)制發(fā)揮作用；而CD8+細(xì)胞主要是抑制性T淋巴細(xì)胞，能夠抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞的活性和功能，從而抑制機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫[7]。因此，CD4+/CD8+細(xì)胞的比例下降說(shuō)明機(jī)體細(xì)胞免疫失衡，免疫功能下降。而NK細(xì)胞在腫瘤發(fā)生的早期便能夠發(fā)揮作用，是人體低抗腫瘤發(fā)生的第一道屏障，其表面表達(dá)CD16+CD56+，無(wú)組織相容性復(fù)合體的(MHC)限制[8]。它能夠在未預(yù)先接觸抗原的情況下分泌具有細(xì)胞毒活性和免疫調(diào)節(jié)功能的各種細(xì)胞因子和介導(dǎo)的抗體，直接對(duì)抗腫瘤細(xì)胞[9]。因此NK細(xì)胞的數(shù)量減少也預(yù)示著機(jī)體免疫功能的下降，腫瘤惡性程度的增高。

本研究中發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者外周血中NK細(xì)胞、CD3+、CD3+CD4+數(shù)量以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均較正常對(duì)照者低，CD3+CD8+數(shù)量較正常對(duì)照者高。其中宮頸癌Ⅱ～Ⅳ期患者的以上指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，0期患者的CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)量以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值也明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。此外，進(jìn)一步研究也發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞、CD3+、CD3+CD4+數(shù)量以及CD3+CD4+/CD3+CD8比值與宮頸癌患者的分期也有明顯的相關(guān)性(P<0.05)。與健康的對(duì)照者相比，宮頸癌患者的輔助性CD4+細(xì)胞數(shù)量的減少和抑制性CD8+細(xì)胞數(shù)量的增加都表明機(jī)體免疫功能的失衡和紊亂，造成對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的防御能力下降?；颊叻制谠酵鞱K細(xì)胞、CD3+、CD3+CD4+數(shù)量數(shù)量越少，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值越低，這說(shuō)明宮頸癌晚期患者體內(nèi)的免疫機(jī)制也越來(lái)越差。NK細(xì)胞數(shù)量的下降一方面可能是機(jī)體本身免疫功能紊亂和抑制造成的NK細(xì)胞活性下降和在血液循環(huán)中的再分布造成，另一方面隨著病情的進(jìn)展和腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移等，可能與NK細(xì)胞在參與針對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷過(guò)程中的消耗有關(guān)[10]。

除了宮頸癌患者，目前對(duì)于淋巴瘤、大腸癌、頭頸部等惡性腫瘤的研究也發(fā)現(xiàn)患者存在著免疫功能下降以及與臨床分期有關(guān)的狀況[11-14]。因此，對(duì)于檢測(cè)T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的數(shù)量和組成不但可以準(zhǔn)確的評(píng)估患者機(jī)體的免疫功能狀況，而且對(duì)腫瘤的預(yù)后和分期也有重要的參考價(jià)值。

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