兩種隱形眼鏡對護理液中薄荷醇的吸收及釋放研究

周方晴，曹陽，韓雪蓮，許茜

(1.東南大學(xué) 公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇 南京 210009； 2.海昌隱形眼鏡有限公司，江蘇 丹陽 212331)

除作為外用制劑輔料使用外，薄荷醇(menthol)亦可作為清涼劑加入眼部制劑，以期減輕眼部刺激，緩解眼部干澀、灼熱感[1]。研究[2-3]顯示，薄荷醇可明顯增加外用制劑中藥物的透皮吸收率。若隱形眼鏡片護理液中加入薄荷醇，鏡片浸泡時則可能吸收其中的薄荷醇，而佩戴該鏡片時其可能會釋放至眼中。那么此時的薄荷醇是否會因其促吸收作用而帶來一定的使用安全問題？國內(nèi)外均未見相關(guān)的研究報道。因此，基于對薄荷醇特性的全面考慮，有必要研究隱形眼鏡片對護理液中薄荷醇的吸收和釋放程度，以評估其導(dǎo)致的眼部刺激或致敏作用的可能性，保證使用安全。

本研究擬建立隱形眼鏡護理液和模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標準鹽溶液(ISO10344)[4]中薄荷醇的檢測方法，并進行隱形眼鏡片對護理液中薄荷醇的吸收情況(是否)及吸收程度(多少)，以及經(jīng)浸泡的隱形眼鏡片在模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標準鹽溶液中薄荷醇的釋放情況(是否)及釋放程度(多少)的測試，為含薄荷醇的隱形眼鏡護理液的安全性評價提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

受試樣品均由海昌隱形眼鏡有限公司提供，包括：J1102809隱形眼鏡片(非離子型，含水量38%)、G1105599隱形眼鏡片(離子型，含水量55%)；隱形眼鏡護理液(批號2120003)；陰性樣品液(除不含薄荷醇外，其他成分均按護理液配方配制的溶液)；ISO標準鹽溶液(pH 7.0等滲緩沖鹽水溶液)。薄荷醇標準品(供含量測定用)，面積歸一化法測得百分含量為99.80%(中國藥品生物制品檢定所)；色譜純甲醇(德國默克公司)。

1.2 儀器和器材

氣相色譜儀(日本島津公司GC2010)；固相萃取儀(美國Supelco公司Visiprep-DL)；C18固相萃取小柱(50 μm，50 mg，迪馬公司)；精密分析天平(感量0.01 mg，瑞士梅特勒公司)；超聲清洗儀(濟南巴克超聲波科技有限公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管氣相色譜柱(0.32 mm×30 m，固定液膜厚1.8 μm，美國Agilent公司)；檢測器：火焰離子化檢測器(flame ionization detector，F(xiàn)ID)；柱溫(程序升溫方式)：初溫80 ℃，3 min；溫度上升速率4 ℃·min-1；終溫150 ℃，3 min。進樣口溫度250 ℃；檢測器溫度250 ℃；氮氣流速9.5 ml·min-1,氫氣流速40 ml·min-1,空氣流速400 ml·min-1,尾吹氣流速30 ml·min-1。

1.3.2 護理液中薄荷醇鑒別及濃度測定

精密量取質(zhì)量濃度為1 mg·ml-1的薄荷醇標準貯備溶液適量，加甲醇稀釋制得質(zhì)量濃度為50 μg·ml-1的標準溶液；精密量取5 ml護理液，以5 ml·min-1的速度經(jīng)過固相萃取小柱(事先以0.5 ml蒸餾水和0.5 ml甲醇依次活化2次)，0.5 ml甲醇洗脫，取1 μl洗脫液進樣，按1.3.1之色譜條件行氣相色譜分析，與1 μl薄荷醇標準溶液進樣分析后所得的保留時間比較，以鑒別樣品中的薄荷醇，并記錄其峰面積，計算樣品中的薄荷醇質(zhì)量濃度(μg·ml-1)。

1.3.3 吸收試驗

1.3.3.1 隱形眼鏡片準備 以專用鑷子取出隱形眼鏡片，置吸水紙上將其表面水分輕輕拭干，之后精密稱取并記錄100片隱形眼鏡片總質(zhì)量(m總，mg)。如此法平行準備3份，共300片隱形眼鏡片。

1.3.3.2 吸收試驗容器對薄荷醇的吸收試驗 取干燥潔凈的1 000 ml廣口試劑瓶，準確加入已測得薄荷醇的原始質(zhì)量濃度(ρ0 h，μg·ml-1)的500 ml護理液，加蓋密封，置于(25±2)℃的恒溫水浴中，在2、4、6、8、12、24 h分別以移液管精密量取5 ml護理液，依1.3.2項下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過固相萃取小柱”起操作，分別計算各時間點護理液中薄荷醇的測得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，評價試驗容器對薄荷醇的吸收情況和吸收程度。每個時間點取樣結(jié)束后，即補充5 ml同溫度[(25±2)℃]護理液，使護理液總體積不變。如法同時進行3只試驗容器的吸收試驗，容器標好序號。

取Opadry中藥薄膜包衣材料適量，加水制成濃度為12%的包衣液，采用流化床包衣機對羚黃寶兒未包衣素丸（投料量750 g）進行包衣。

1.3.3.3 吸收試驗 如1.3.3.1表面拭干并精密稱重的100片隱形眼鏡片，將其放入序號與1.3.3.2一一對應(yīng)的容器中，準確加入500 ml已準確測得薄荷醇原始質(zhì)量濃度(ρ0 h，μg·ml-1)的護理液，加蓋密封，置于(25±2)℃的恒溫水浴中，在2、4、6、8、12、24 h分別精密量取5 ml護理液，依1.3.2項下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過固相萃取小柱”起操作，分別計算各時間點護理液中薄荷醇的測得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，并結(jié)合1.3.3.2的測試結(jié)果，評價隱形眼鏡片對薄荷醇的吸收情況和吸收程度。每個時間點取樣結(jié)束后，即補充5 ml同溫度[(25±2)℃]護理液，使護理液總體積不變。如法平行進行3份，共300片隱形眼鏡片的吸收試驗。

1.3.3.4 吸收試驗結(jié)果計算 單位質(zhì)量(mg)的干鏡片吸收薄荷醇的質(zhì)量(μg)設(shè)為m吸收，即m吸收=500×(ρ0 h-ρ吸收平衡)/m總，其中ρ吸收平衡為鏡片吸收薄荷醇達到平衡時的質(zhì)量濃度。

1.3.4 釋放試驗

1.3.4.1 隱形眼鏡片準備 以專用鑷子將1.3.3.3吸收實驗結(jié)束后的隱形眼鏡片取出，置吸水紙上將其表面水分輕輕拭干。從每份100片隱形眼鏡片中隨機挑出50片分為5組，每組10片，進行釋放試驗。

1.3.4.2 釋放試驗容器對薄荷醇的吸收試驗 精密量取標準貯備溶液適量，加ISO標準鹽溶液稀釋制成每1 ml中含0.1 μg薄荷醇的模擬樣品溶液，原始質(zhì)量濃度準確測定后記為ρ0 h(μg·ml-1)。

取干燥潔凈的50 ml廣口試劑瓶，準確加入如上所述的模擬樣品溶液10 ml，加蓋密封，置于(37±2)℃的恒溫水浴中。在2、4、6、8、15 h分別精密量取5 ml護理液(每個時間點從1只容器中取樣，下個時間點從另外的容器取樣)，依1.3.2項下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過固相萃取小柱”起操作，分別計算各時間點護理液中薄荷醇的測得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h，μg·ml-1)，與ρ0 h比較，評價試驗容器對薄荷醇的吸收情況和吸收程度。如法平行進行15只試驗容器(共分為3組，以便進行3份釋放平行試驗，每組5只)的吸收試驗，每只容器按組別和考察時間點標好序號。

1.3.4.3 釋放試驗 取1.3.4.1處理的5組隱形眼鏡片，將其分別放入5只經(jīng)1.3.4.2吸收測試的50 ml廣口試劑瓶中，每只容器中準確加入ISO標準鹽溶液10 ml，得5組釋放試驗用樣本，加蓋密封，置于(37±2)℃的恒溫水浴中。在2、4、6、8、15 h分別精密量取ISO標準鹽溶液5 ml(注意容器序號與1.3.4.2一一對應(yīng)，每個時間點從考察吸收時間相同的容器中取樣，下個時間點從另外的經(jīng)相應(yīng)時間點考察吸收情況的容器中取樣)，依1.3.2項下自“以5 ml·min-1的速度經(jīng)過固相萃取小柱”起操作，分別計算各時間點ISO標準鹽溶液中薄荷醇的測得質(zhì)量濃度(ρ2 h、ρ4 h、ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h，μg·ml-1)，并結(jié)合1.3.4.2的測試結(jié)果，評價隱形眼鏡片對其可能吸收的薄荷醇的釋放情況和釋放程度。如此法進行3份平行試驗。

1.3.4.4 釋放試驗結(jié)果計算 單個鏡片釋放薄荷醇的質(zhì)量設(shè)為m釋放(μg)，即m釋放=10×ρ釋放平衡/m總，其中ρ釋放平衡為鏡片釋放達到平衡時的質(zhì)量濃度，ISO標準鹽溶液中的薄荷醇質(zhì)量濃度(μg·ml-1)。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收試驗

2.1.1 吸收試驗容器對薄荷醇的吸收試驗

考察吸收試驗所用容器時，各時間點護理液中薄荷醇的測得濃度見表1所示。護理液中薄荷醇原始濃度ρ0 h測得值為4.10 μg·ml-1。

每個容器在各時間點時護理液中薄荷醇的測得濃度，經(jīng)t檢驗(置信度為95%)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，且與ρ0 h相比差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果提示，吸收試驗所用各容器對薄荷醇無吸收或吸收可忽略不計。

表1容器吸收試驗各時間點測得護理液中薄荷醇的質(zhì)量濃度μg·ml-1

Tab1Containerabsorptionexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepointμg·ml-1

容器各時間點薄荷醇質(zhì)量濃度2 h4 h6 h8 h12 h24 h容器14.124.153.974.054.113.92容器24.093.974.144.094.014.12容器34.083.953.974.154.114.07

2.1.2 隱形眼鏡片對護理液中薄荷醇吸收試驗

J1102809和G1105599隱形眼鏡片在吸收試驗各時間點測得護理液中薄荷醇的平均濃度(μg·ml-1)如表2所示。兩種隱形眼鏡片的測試結(jié)果經(jīng)t檢驗(置信度為95%)，各時間點質(zhì)量濃度與起始的相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表明兩種鏡片對護理液中的薄荷醇均吸收；而ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示兩種鏡片均在6.0 h對薄荷醇的吸收即達平衡。ρ吸收平衡則以ρ6 h、ρ8 h、ρ12 h、ρ24 h的平均值計，J1102809和G1105599隱形眼鏡片的ρ吸收平衡分別為3.65 μg·ml-1和3.74 μg·ml-1，表明100片浸泡于500 ml的護理液中共吸收薄荷醇分別為225 μg和180 μg。測得100片J1102809和G1105599干鏡片的總質(zhì)量分別為1 902.7 mg和1 493.4 mg，則計算得其單位質(zhì)量(mg)干鏡片吸收薄荷醇的質(zhì)量分別為0.118 2 μg和0.120 5 μg。

表2隱形眼鏡片吸收試驗各時間點測得護理液中薄荷醇的平均質(zhì)量濃度(n=3)μg·ml-1

Tab2Contactlensabsorptionexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint(n=3)μg·ml-1

時間點/h兩種鏡片所在護理液中薄荷醇質(zhì)量濃度J1102809鏡片G1105599鏡片2.03.873.924.03.753.836.03.673.748.03.653.7312.03.633.7224.03.663.76

2.2 釋放試驗結(jié)果

2.2.1 釋放試驗容器對薄荷醇的吸收試驗

考察釋放試驗所用容器時，各時間點ISO標準鹽溶液加標制成的模擬樣品溶液中薄荷醇的測得濃度如表3所示。ISO標準鹽溶液加標模擬樣品溶液中薄荷醇原始質(zhì)量濃度ρ0 h測得值為0.095 μg·ml-1。

表3容器釋放試驗各時間點測得護理液中薄荷醇的質(zhì)量濃度

μg·ml-1

Tab3Containerreleaseexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint

μg·ml-1

每個容器在各自時間點時ISO標準鹽溶液加標模擬樣品溶液中薄荷醇的測得濃度，經(jīng)t檢驗(置信度為95%)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，且與ρ0 h亦無顯著差異。結(jié)果提示，釋放試驗所用各容器對薄荷醇無吸收或吸收可忽略不計。

2.2.2 隱形眼鏡片吸收薄荷醇的釋放試驗

J1102809和G1105599隱形眼鏡片在釋放試驗各時間點測得薄荷醇的平均質(zhì)量濃度(μg·ml-1)如表4所示。結(jié)果表明，兩種鏡片在ISO標準鹽溶液中均會釋放之前在護理液中浸泡時吸收的薄荷醇。其檢測結(jié)果經(jīng)t檢驗(置信度為95%)，ρ2 h、ρ4 h與ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示兩種鏡片在6.0 h對薄荷醇的釋放均即達平衡。ρ釋放平衡則以ρ6 h、ρ8 h、ρ15 h的平均值計，J1102809和G1105599鏡片的ρ釋放平衡分別為0.082 μg·ml-1和0.084 μg·ml-1，則單個J1102809和G1105599鏡片釋放薄荷醇的質(zhì)量分別為0.082 μg和0.084 μg，計算得單位質(zhì)量(mg)的J1102809和G1105599干鏡片釋放薄荷醇分別為0.004 3 μg和0.005 6 μg。

表4隱形眼鏡片釋放試驗各時間點測得薄荷醇的平均濃度值(n=3) 兩組孕鼠的平均攝食μg·ml-1

Tab4Contactlensreleaseexperimenttesttheconcentrationofthementholinfunctionalcaresolutionateachtimepoint(n=3)μg·ml-1

時間點/h兩種鏡片所在ISO標準鹽溶液中薄荷醇質(zhì)量濃度J1102809鏡片G1105599鏡片2.00.0550.0564.00.0720.0756.00.0810.0868.00.0820.08315.00.0830.083

3 總 結(jié)

本研究的兩種隱形眼鏡片分別為高含水離子型和低含水非離子型，是具有一定代表性的試驗樣本。研究結(jié)果表明,兩種鏡片對護理液中的薄荷醇雖有少量的吸收，在模擬眼內(nèi)環(huán)境的ISO標準鹽溶液中均只有微量的釋放，提示含薄荷醇護理液的使用具有安全性。

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[4] ISO10344:1996《光學(xué)和光學(xué)儀器接觸鏡測試用鹽溶液》[S].