慢性阻塞性肺疾病患者靜脈血CD40、CD86和GSTO1變化及意義

程友靜 歐陽瑤

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸一科，貴州 遵義 563003)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)與肺對(duì)有害顆粒或有害氣體產(chǎn)生的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)〔1〕。目前認(rèn)為COPD發(fā)病機(jī)制中免疫因素及氧化應(yīng)激存在潛在作用。樹突細(xì)胞(DCs)是專職性抗原提呈細(xì)胞。該細(xì)胞核心作用體現(xiàn)在啟動(dòng)、調(diào)控并維持特異性免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)，在機(jī)體特異性及非特異性免疫反應(yīng)中扮演重要角色。谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是廣泛存在于生物體內(nèi)的Ⅱ相代謝酶，是機(jī)體重要的抗氧化酶。氧化應(yīng)激、DCs均在COPD的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，本研究測(cè)定COPD患者靜脈血CD40、CD86分子及還原型谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTO)1含量，總結(jié)DCs、GSTO1與COPD發(fā)病機(jī)制的潛在關(guān)系。

1 材料與方法

1.1臨床資料 我院2012年1月至2013年2月29例住院患者和17例同期健康體檢者。參照2011年COPD診治指南，按COPD病情輕重程度分為Ⅰ組：正常無吸煙健康者9例，年齡(65.89±6.75)歲；Ⅱ組：吸煙健康體檢者8例，年齡(67.75±6.04)歲；Ⅲ組COPD全球倡儀：(COPD GOLD)Ⅰ級(jí)10例，年齡(66.20±7.42)歲；Ⅳ組:COPD GOLD Ⅱ級(jí)，8例，年齡(69.25±7.78)歲；Ⅴ組：COPD GOLD Ⅲ～Ⅳ級(jí)11例，年齡(70.55±6.80)歲。吸煙指數(shù)均為大于400支/年，各組性別及年齡無明顯差異。

1.2試劑 美國(guó)BD公司抗人CD40單抗-PE標(biāo)記、抗人CD86單抗-FITC標(biāo)記；使用美國(guó)Abcam公司的抗-GST01抗體。

1.3標(biāo)本采集 采集清晨空腹肘靜脈血2 ml。

1.4標(biāo)本處理及測(cè)定 ①流式細(xì)胞術(shù)：每份取2個(gè)流式專用試管分做對(duì)照管以及測(cè)定管，測(cè)定管置入20 μl 的FITC鼠抗人CD40及同量的PE鼠抗人CD86。對(duì)照管置入20 μl 的K Isotype control及同量的PE鼠IgG1、K Isotype Control、FITC鼠IgG1。②Western印跡法：電泳初始電壓設(shè)置為60 V，維持大約30 min直至出現(xiàn)溴酚藍(lán)條帶進(jìn)入分離膠，改變電壓為120 V，直至出現(xiàn)溴酚藍(lán)條帶底部，完成電泳。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行LSD 或 Tamhane分析，多組間單因素方差分析和兩組間直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組血液CD40、CD86及GSTO1的測(cè)定結(jié)果 見圖1，表1。

圖1 各組血液中GSTO1、β-actin的結(jié)果

2.2相關(guān)性分析 FEV1%與CD40及CD86指標(biāo)負(fù)相關(guān)(rCD40=-0.879,rCD86=-0.894,P<0.05)；GSTO1與FEV1%呈正相關(guān)(r=0.989,P<0.05)；GSTO1與CD40、CD86呈負(fù)相關(guān)(rCD40=-0.888,rCD86=-0.892,P<0.05)。

表1 各組血液中CD40、CD86及GSTO1的測(cè)定結(jié)果±s)

3 討 論

COPD發(fā)病機(jī)制尚未明確，學(xué)界較為公認(rèn)的觀點(diǎn)是發(fā)病患者受到環(huán)境影響占主要原因，其中以吸煙為典型。我國(guó)COPD患者中吸煙比例超過了70%〔2〕。吸煙可通過多途徑引起COPD,在誘導(dǎo)痰實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)患者急性期呼出冷凝液升高明顯，即使在緩解期，患者呼出冷凝液也高于正常人群。COPD患者中存在氧化應(yīng)激，且氧化應(yīng)激很可能對(duì)患者疾病的誘發(fā)以及發(fā)展過程中起到關(guān)鍵作用。氧化程度加重以及較弱的抗氧化能力均會(huì)導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)生，還原型谷胱甘肽(GSH)是肺中最重要的抗氧化劑，其核心作用體現(xiàn)為肺臟抵抗外來侵襲及維持氧化-抗氧化平衡。生理情況下，其GSSG(氧化型)和GSH(還原型)，兩者在體內(nèi)保持動(dòng)態(tài)平衡。谷胱甘肽還原酶(GSH-R)是GSSG轉(zhuǎn)化為GSH的關(guān)鍵酶。研究表明谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTs)在兩者轉(zhuǎn)化過程中起重要作用。相比于正常人群，慢阻肺患者的GSTO1指標(biāo)很低〔3〕，本研究結(jié)果提示GSTO1水平改變程度與患者病情嚴(yán)重程度相關(guān)。COPD患者存在氧化應(yīng)激的另一事實(shí)表現(xiàn)為患者肺功能與GSTO1指標(biāo)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，同樣的，患者氧化應(yīng)激程度與其肺功能關(guān)系緊密。

本文提到COPD患者中吸煙患者比例很高，但事實(shí)上吸煙患者中僅有少部分患者發(fā)生COPD。此外，部分資料顯示患者的氣道炎癥并不會(huì)隨著吸煙的開始或停止改變，究其原因很有可能是患者自身免疫能力展現(xiàn)出了防御作用。盡管DCs在人體中含量較低，但其作用十分關(guān)鍵，對(duì)于非特異免疫以及特異免疫細(xì)胞的連接至關(guān)重要，同時(shí)也是唯一的激活原始T細(xì)胞增殖活化的抗原遞呈細(xì)胞，而患者局部病灶主要表現(xiàn)為T細(xì)胞浸潤(rùn)，因此DCs對(duì)于COPD的作用及發(fā)展可能有關(guān)鍵作用，但目前缺乏有力的研究證明其作用大小?；颊甙l(fā)生炎癥后，DCs細(xì)胞表面持續(xù)低水平表達(dá)共刺激分子CD40、CD86水平會(huì)明顯提升〔4〕，兩種指標(biāo)在慢阻肺患者中的含量明顯高于非COPD患者〔5〕， 表明DCs對(duì)于COPD的發(fā)生以及發(fā)展作用顯著。隨著DCs含量在COPD患者中的增加，患者肺部組織中DCs含量也相應(yīng)增加，因此對(duì)COPD的發(fā)展起到促進(jìn)作用，本文肺功能與CD40、CD86相關(guān)性分析結(jié)果表明患者肺功能與DCs水平表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)關(guān)系，結(jié)果驗(yàn)證了上文的結(jié)論。同時(shí)也表明COPD不但對(duì)患者肺臟有損害，對(duì)全身多系統(tǒng)都會(huì)造成一定損害。

目前認(rèn)為DCs以及氧化應(yīng)激對(duì)于COPD的發(fā)生及發(fā)展有重要作用，本文結(jié)果也驗(yàn)證了這一點(diǎn)。DCs正常情況下以未成熟DCs的形式存在，但是在一定的刺激下，可繼續(xù)發(fā)育為DCs，資料顯示，病原微生物感染、吸煙、氧化應(yīng)激、脂質(zhì)異常等因素均具有促進(jìn)DCs細(xì)胞表型成熟的作用〔6〕。Kantengwa等〔7〕研究結(jié)果表明DCs的成熟很大程度上受到ROS作用；同樣的結(jié)論也見于沈玲紅等〔8〕研究結(jié)果。Wang 等〔9〕研究結(jié)果顯示DCs在受到氧化劑刺激后， CD80、CD86指標(biāo)提升明顯。本文相關(guān)性研究結(jié)果表明GSTO1與CD40、CD86存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明很有可能DCs對(duì)氧化應(yīng)激做出了“危險(xiǎn)”防御反應(yīng)，進(jìn)而成熟?？傊?，COPD患者存在氧化應(yīng)激，且患者病情與抗氧化能力關(guān)系緊密；DCs在COPD發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。氧化應(yīng)激可能會(huì)刺激DCs成熟。

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