pcIL-18-MAGE-1基因疫苗免疫荷瘤小鼠抑瘤作用

齊亞靈 王偉群 楊廣民 陳玉強 王景霞 王淑英 李 堯 方艷秋

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154002)

pcIL-18/MAGE-1共表達基因疫苗免疫C57BL/6J小鼠可以提高其免疫功能〔1〕。用脂質(zhì)體介導方法，將MAGE-1基因轉(zhuǎn)染Hepal-6細胞，獲得穩(wěn)定表達MAGE-1基因的Hepal-6-MAGE-1細胞〔2〕。本實驗觀察pcIL-18-MAGE-1疫苗對MAGE-1(+)及MAGE-1(-)荷瘤小鼠成瘤情況及生存情況的影響。

1 材料和方法

1.1材料 質(zhì)粒pcDNA3、pcIL-18-pcMAGE-1、肝癌細胞株Hepal-6以及穩(wěn)定表達Hepal-6-MAGE-1細胞株為吉林省人民醫(yī)院腫瘤生物治療中心提供。清潔級雌性C57BL/6J小鼠60只(中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所)，體重(20±2)g，自由食水，無菌動物室飼養(yǎng)。IMDM 細胞培養(yǎng)液、胎牛血清(武漢博士德公司)。HF240二氧化碳培養(yǎng)箱(上海斯高勒生物科技有限公司)，游標卡尺。

1.2實驗分組 小鼠隨機分為6組各10只，見表1。

1.3免疫方法及模型制作 取100 μg質(zhì)粒(0.4 ml 3%氫氧化鋁膠)，小鼠大腿內(nèi)側(cè)肌群肌注。每隔10 d注射1次，共3次。陰性對照組與空白對照組分別注射等量pcDNA3與生理鹽水，末次注射7 d后，每只鼠取2×106個/0.1 ml對數(shù)生長期Hepal-6-MAGE-1細胞，接種于C57BL/6J小鼠腰肋部皮下，制作MAGE-1(+)荷瘤鼠；取對數(shù)生長期Hepa1-6細胞，按照相同的量與部位接種于C57BL/6J小鼠，制作MAGE-1(-)荷瘤鼠。

表1 實驗分組及免疫藥物

1.4檢測指標 成瘤時間即最早捫及皮下結(jié)節(jié)時間(腫瘤直徑達3 mm時，可捫及皮下結(jié)節(jié))；腫瘤體積：每3天測量腫瘤的最大直徑a及最大橫徑b，共計測量6次，V=π/6×a×b2；腫瘤生長速率：K=(InVt-InV0)/t〔3〕；荷瘤小鼠生存時間；HE染色法檢測瘤體病理結(jié)構(gòu)。

1.5統(tǒng)計學分析 使用SPSS19.0軟件進行單因素方差分析和t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組荷瘤小鼠成瘤情況 見表2。E組和F組成瘤后腫瘤體積、腫瘤生長速率差異不顯著(P>0.05)。與B組比較，A組腫瘤生長速率較低(P<0.05)，形成腫瘤時間較長(P<0.05)，成瘤率較低(P<0.05)。A組生存時間雖然比B組長，但差異不顯著(P>0.05)。A組和B組分別較C、E組與D、F組抑瘤效果顯著(P<0.05)。

表2 各組荷瘤小鼠腫瘤生長相關指標±s,n=10)

2.2荷瘤小鼠瘤體病理結(jié)構(gòu) 腫瘤外觀呈卵圓形，質(zhì)軟，A、B組未發(fā)現(xiàn)中央組織壞死。C、E、D、F組裸鼠自然死亡后解剖可見中央組織壞死，HE染色見腫瘤細胞大小不一，排列欠規(guī)則，多見病理性核分裂，血管豐富，間有少許淋巴細胞浸潤。見圖1。

圖1 各組小鼠成瘤情況(HE，×10)

3 討 論

MAGE-1基因、蛋白在多種惡性腫瘤組織中高表達，而在正常組織中不表達特性，表明MAGE可以作為抗原特異性抗腫瘤生物治療的靶點〔4〕。本文說明用兩種方法制作的荷瘤小鼠腫瘤生長相關指標一致，可以進行后續(xù)實驗。pcIL-18-pcMAGE-1基因疫苗對腫瘤的生成、生長起到一定抑制作用。針對MAGE-1基因，可以有效防治腫瘤的發(fā)生發(fā)展〔5〕。

4 參考文獻

1時 陽，楊廣民，李首慶，等.MAGE-1與IL-18共表達DNA疫苗的構(gòu)建與體外表達〔J〕. 中國老年學雜志，2007；27(19)：1865-8.

2楊廣民，齊亞靈，李首慶，等.pcDNA3-MAGE-1真核表達載體的構(gòu)建及其在Hepa1-6細胞中的穩(wěn)定表達〔J〕.吉林大學學報(醫(yī)學版)，2010；36(1):49-53.

3畢允力，高解春，姚 明.腎母細胞瘤裸鼠移植瘤模型的建立及其生物學特性〔J〕.中華小兒外科雜志，2000；21(2): 115-8.

4梁 爽，王曉華，趙艷明，等.直腸癌中腫瘤/睪丸抗原相關基因的表達〔J〕. 中國實驗診斷學，2011；15(1)：91-3.

5陳雪華，劉炳亞，張冬青，等.MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活檢組織中的表達及意義〔J〕. 細胞與分子免疫學雜志，2004；20(3)：310-3.