酸棗仁湯對(duì)虛勞不眠小鼠腦內(nèi)NO、SOD和Glu含量及學(xué)習(xí)記憶能力的影響

李家娣 范桂紅 吳 迪 孫雨薇 韓 雪 張亞男

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥局,黑龍江 齊齊哈爾 161041)

目前失眠的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，已成為嚴(yán)重影響人們身心健康的主要疾患之一〔1〕。目前，臨床對(duì)其治療仍以藥物為主，西藥以鎮(zhèn)靜、催眠類藥物為主，但需要長期服藥，影響患者的依從性及出現(xiàn)戒斷綜合征〔2〕，且由于對(duì)失眠的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，以致臨床缺乏針對(duì)性的治療措施。本研究擬探討失眠經(jīng)典方藥酸棗仁湯對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響及干預(yù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡SPF級(jí)SD小鼠80只〔動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(津)2013-0002〕，雌雄各半，體質(zhì)量(60±20)g，由天津?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2實(shí)驗(yàn)分組 依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，即空白對(duì)照組(簡稱空白組)、模型對(duì)照組(簡稱模型組)、中藥酸棗仁湯治療組(簡稱中藥組)、西藥安定治療組(簡稱西藥組)，每組20只。

1.3給藥方法 每日固定時(shí)間進(jìn)行灌胃，其中西藥組胃飼安定0.2 mg·kg-1·d-1，中藥組胃飼酸棗仁湯10 g·kg-1·d-1，模型組、空白組胃飼生理鹽水2 ml/(kg·d)。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 紫外可見分光光度計(jì)(上海欣茂儀器有限公司，UV-7504型)；電熱恒溫水浴鍋(上海儀表供銷公司))；Y型迷宮(廣州威佳科技有限公司)。氯苯丙氨酸(PCPA)購自Sigma公司；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物制劑研究所)；血糖(Glu)試劑北京博奧森公司。

1.5研究方法

1.5.1模型制備 采取大鼠跑臺(tái)力竭訓(xùn)練+Y型迷宮十PCPA失眠的動(dòng)物模型，跑臺(tái)力竭實(shí)驗(yàn)主要是對(duì)除空白組之外的所有小鼠，每天進(jìn)行20 min的跑臺(tái)訓(xùn)練，5只/次，直到其力竭；而后進(jìn)行Y型迷宮訓(xùn)練，即：將小鼠放入Y型迷宮的任一支臂之中，予以小鼠電擊，直至其進(jìn)入安全區(qū)后停止，而后熄燈結(jié)束測試，同時(shí)將小鼠所在支臂作為下一測試的起點(diǎn)，進(jìn)行電擊實(shí)驗(yàn)，以測試其走完迷宮所用時(shí)間、錯(cuò)誤總數(shù)及首錯(cuò)前正確數(shù)，上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)開始1 w后，對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射PCPA，劑量為350 mg/kg，至小鼠出現(xiàn)攣縮性疼痛，約持續(xù)60 min，疼痛緩解。72 h后對(duì)小鼠進(jìn)行體表特征積分評(píng)定，檢驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

1.5.2檢測指標(biāo)與方法 猝死動(dòng)物，取出腦組織，將其稱重，吸水紙洗盡水分后置于超低溫冰箱中，NO、SOD 、Glu檢測按照試劑盒中步驟進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠統(tǒng)計(jì)學(xué)描述 模型組小鼠在實(shí)驗(yàn)第4天因跑臺(tái)力竭實(shí)驗(yàn)死亡1只，西藥組小鼠在實(shí)驗(yàn)第7天因灌胃死亡1只，故共78只小鼠進(jìn)入相關(guān)數(shù)據(jù)分析。

2.2各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較 與空白組比較，模型組的SOD含量增加明顯，Glu含量則降低明顯(P<0.05)，NO含量無明顯變化(P>0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的NO、Glu含量升高明顯，SOD含量降低明顯(P<0.05)；中、西藥組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較±s)

2.3各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較 與空白組比較，模型組的走完迷宮所用時(shí)間、錯(cuò)誤總數(shù)均增加明顯，首錯(cuò)前正確數(shù)降低明顯(P<0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的走完迷宮所用時(shí)間、錯(cuò)誤總數(shù)均降低明顯，首錯(cuò)前正確數(shù)增加明顯(P<0.05)；中、西藥組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較±s)

3 討 論

失眠在中醫(yī)學(xué)中根據(jù)其癥狀，將其隸屬于“不寐”范疇，將其分為實(shí)證與虛證兩種，其中實(shí)證多由于營衛(wèi)不和，陽不入陰而引發(fā)，虛證則多與精血虧虛，臟不藏神有關(guān)〔3〕。本研究中所用酸棗仁湯為治療失眠的經(jīng)典方劑，出自仲景的《金匱要略》，方中以酸棗仁為君藥，取其養(yǎng)血補(bǔ)肝、寧心安神之功，茯苓與知母共為臣藥，一則輔助君藥以加強(qiáng)安神除煩之功，再則取茯苓健脾利濕，知母滋陰清熱，使其清熱除煩之力強(qiáng)；以調(diào)暢氣機(jī)、舒暢肝氣之白芍為佐藥，與君藥相反相成，以達(dá)養(yǎng)血調(diào)肝之妙；甘草和中緩急為使藥，且能與酸棗仁相合，增強(qiáng)酸甘化陰之能，補(bǔ)充肝血不足之征，全方養(yǎng)肝血以寧心神,清內(nèi)熱以除虛煩為組方原則，諸藥相合，則失眠可望向愈。

有學(xué)者研究證實(shí)：酸棗仁湯可減少小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，延長失眠小鼠的睡眠時(shí)間，其催眠效果與劑量具有相關(guān)性〔4〕；而通過酸棗仁湯的不同劑量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)不同劑量均對(duì)于小鼠的活動(dòng)具抑制作用，且可明顯抑制中樞神經(jīng)興奮，延長睡眠百分率及睡眠持續(xù)時(shí)間，呈現(xiàn)量效關(guān)系〔5〕。亦有研究表明，安神藥物可提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，尤其是記憶獲得障礙及再現(xiàn)障礙〔6〕，縱觀近年研究，對(duì)于本方的研究多針對(duì)鎮(zhèn)靜催眠效應(yīng)機(jī)制而展開，對(duì)于失眠較容易導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶能力的降低的改善及其機(jī)制研究鮮見。

SOD作為人體內(nèi)最重要的自由基清除劑，模型組的SOD活性增高,則可能由于睡眠剝奪加重了自由基清除系統(tǒng)的反應(yīng)性升高,過度的氧自由基會(huì)滅活SOD，使得SOD活性下降，進(jìn)一步加重對(duì)腦組織的損害；Glu屬于興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，由于可改變興奮性氨基酸濃度而導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生興奮性毒性，誘發(fā)失眠〔7〕。提示酸棗仁湯可調(diào)控NO、SOD和Glu水平，其功效與西藥相似。

本研究結(jié)果顯示，酸棗仁湯可有效改善虛勞不眠小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與調(diào)控NO、SOD和Glu水平有關(guān)。

4 參考文獻(xiàn)

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7張林挺.酸棗仁湯對(duì)虛勞失眠大鼠干預(yù)機(jī)理的研究〔D〕.廣州中醫(yī)藥大學(xué)博士論文，2009.