TNF—α、SP—A在兒童不同程度肺炎中的表達(dá)和臨床意義

周佳磊++徐冬新++李儀++陳志敏

[摘要] 目的 觀察不同程度小兒肺炎時(shí)，血清致炎性因子腫瘤壞死因子（TNF-α）、肺表面活性蛋白A（SP-A）表達(dá)含量的變化及其臨床意義。方法 將195例肺炎兒童根據(jù)病情嚴(yán)重程度將其分為普通肺炎患兒及重癥肺炎患兒，另外選擇65例非肺炎患兒作為對(duì)照組，采用ELISA方法檢測(cè)不同程度肺炎血清中的TNF-α和 SP-A 水平。 結(jié)果 TNF-α、SP-A在普通、重癥肺炎患兒血清中表達(dá)水平顯著升高，且重癥肺炎組的TNF-α、SP-A表達(dá)水平顯著高于普通肺炎組。結(jié)論 在小兒重癥肺炎患兒發(fā)病過(guò)程中，血清中腫瘤壞死因子TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 的表達(dá)水平明顯增多，可以反映肺損傷程度，可作為臨床檢測(cè)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 兒童肺炎；TNF-α；肺表面活性蛋白A（SP-A）；血清

[中圖分類號(hào)] R725.6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2014）18-0145-03

TNFα， SP-A expression and clinical significance of varying degrees of pneumonia in children

ZHOU Jialei1 XU Dongxin1 LI Yi1 CHEN Zhimin2

1.Laboratory，Medicine of First People's Hospital in Xiaoshan District of Hangzhou City，Hangzhou 311200，China； 2.Respiratory Department of Children's Hospital of Zhejiang University，Hangzhou 310003，China

[Abstract] Objective To observe the expression levels change and it's clinical significance of TNF-α， SP-A in children with varying degrees of pneumonia. Methods A total 195 cases of pneumonia children patients were divided into ordinary pneumonia and severe pneumonia patients， another 65 cases of non-pneumonic children patients as the control group， ELISA assay was used to detect serum TNF-α and SP-A level. Results The levels of serum SP-A and TNF-α ofpneumonia children group were higher than the control group's， and severe pneumonia patients were higher than ordinary pneumonia. Conclusion The expression level of TNF-α and SP-A increased significant in the pathogenesis of children with severe pneumonia which could reflect the degree of lung injury and as a indicator in clinical testing.

[Key words] Child pneumonia； TNF-α； SP-A； Serum

小兒肺炎是兒童中最常見(jiàn)一種呼吸道疾病，居小兒常見(jiàn)疾病首位，四季均容易發(fā)生，3歲以下的嬰幼兒常在春季和冬季患病；其臨床表現(xiàn)多為咳嗽、發(fā)熱、氣促、呼吸困難或肺部啰音，如治療不徹底，容易反復(fù)發(fā)作，引起不同類型的重癥并發(fā)癥，病情重者死亡率較高[1]。小兒肺炎的發(fā)生一方面與細(xì)菌、病毒的侵染有關(guān)，造成肺部損傷，另一方面與機(jī)體的過(guò)度防御反應(yīng)有關(guān)，且一些細(xì)胞炎性因子如腫瘤壞死因子（TNF-α）會(huì)顯著增加[2]。肺表面活性蛋白A（SP-A）對(duì)維持肺泡的結(jié)構(gòu)及正常功能有著非常重要的作用，與多種肺部疾病密切相關(guān)[3]，且當(dāng)疾病引起肺部損傷的時(shí)候，肺組織內(nèi)的SP-A可進(jìn)入血液循環(huán)。本研究通過(guò)檢測(cè)不同程度肺炎患兒血清中TNF-α及SP-A表達(dá)水平，探討其對(duì)診治小兒肺炎的臨床指導(dǎo)意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇我院自2011年3月～2012年4月收治的195例肺炎兒童患兒，普通肺炎和重癥肺炎按照或參照“小兒四病防治方案和小兒肺炎防治方案”診斷標(biāo)準(zhǔn)定義，并排除既往有心肺疾病患兒；其中重癥肺炎患兒組90例，男59例，女31例，年齡1～3歲，平均（2.85±0.71）歲，病程7～20 d，平均（9.62±4.34） d；普通肺炎患兒組105例，男85例，女20例，年齡1～5歲，平均（2.91±2.63）歲，病程3～15 d，平均（5.79±3.38） d；同期選擇本院無(wú)肺炎的65例兒童作為對(duì)照組，其中男34例，女31例，年齡13個(gè)月～4歲，平均（3.02±1.65）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，所有患兒家長(zhǎng)均自愿參加本研究，并簽署知情同意書(shū)。三組患兒的性別構(gòu)成、年齡分布、病程等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

在入院診斷后三組患兒在治療前抽取靜脈血4 mL，然后室溫下放置1 h，之后以3000 r/min離心速率離心20 min，棄去沉淀取上清液，置于20℃冰箱保存以待檢測(cè)TNF-α和SP-A的表達(dá)水平。TNF-α的測(cè)定根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附法原理，采用購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院的試劑盒測(cè)定；同樣，采用ELISA法測(cè)定血清SP-A水平，該試劑盒購(gòu)自美國(guó) RD 公司。測(cè)定的原理是在酶標(biāo)儀下檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)下各孔的吸光度值（OD 值） ，根據(jù)吸光值的大小和相關(guān)曲線方程分析反應(yīng)樣品中TNF-α和SP-A濃度。endprint

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，多組比較采用方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

TNFα、SP-A在普通、重癥肺炎患兒血清中表達(dá)水平顯著升高（普通肺炎組：tTNFα=4.81，tSP-A=3.20，P<0.05；重癥肺炎組：tTNFα=9.52，tSP-A=5.63，P<0.01），且重癥肺炎組的TNFα、SP-A表達(dá)水平顯著高于普通肺炎組（tTNFα=4.68，tSP-A=3.26，P<0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同程度肺炎血清TNF-α、SP-A檢測(cè)（x±s，ng/L）

注：與對(duì)照組比較，a P<0.05，b P<0.01；重癥肺炎組與普通肺炎組比較，c P<0.05

3 討論

肺炎是小兒常發(fā)的肺部局部炎癥，除了感染病原菌作用外，機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)性在肺炎發(fā)生中也發(fā)揮重要作用。目前已經(jīng)了解到，重癥肺炎的發(fā)生與病原體感染后過(guò)激的炎癥反應(yīng)相關(guān)，由肺部局部炎癥發(fā)展成為全身性炎癥。對(duì)于肺炎衣原體（Cpn）感染所致的急性呼吸道感染、肺炎及其相關(guān)性疾病研究表明，感染Cpn后機(jī)體多呈慢性經(jīng)過(guò)，不僅誘發(fā)以Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)為主的特異性免疫，同時(shí)體液免疫及有ToⅡ樣受體參與的非特異性免疫也在病原菌的清除過(guò)程中發(fā)揮了重要的輔助作用?；诖耍诒狙芯恐羞x用常用的血清TNF-α和SP-A作為炎癥免疫性反應(yīng)的客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)。

TNF-α是一種廣泛存在于肺泡組織細(xì)胞中的腫瘤壞死因子[4]，可以殺死腫瘤壞死細(xì)胞，在肺炎發(fā)生時(shí)大量表達(dá)殺死被破壞的非正常細(xì)胞，可誘導(dǎo)其他炎癥因子的釋放，是免疫調(diào)解中的重要因子，由巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞產(chǎn)生。可介導(dǎo)多種炎癥的生理反應(yīng)，如局部免疫、器官損傷、系統(tǒng)損害，在炎性細(xì)胞因子中TNF-α是感染后機(jī)體最早產(chǎn)生的細(xì)胞因子之一，促進(jìn)B細(xì)胞增殖、誘發(fā)多種細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的產(chǎn)生，可以損傷毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加肺部毛細(xì)血管的通透性，大量細(xì)胞內(nèi)容物外泄發(fā)生炎癥反應(yīng)[5]。雖然TNF-α因子是機(jī)體清除病原體必需的，但是過(guò)度的釋放會(huì)引起組織損傷[6]。在本院測(cè)定的65例重癥肺炎和普通肺炎組小兒患者的TNF-α水平比非肺炎對(duì)照組顯著增高，表明TNF-α可能參與了肺炎炎癥反應(yīng)的過(guò)程， 推測(cè)可能是由于TNF-α水平的顯著升高通過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致患兒肺的損傷；且TNF-α含量多少可能反映了肺損傷程度，二者之間具有一定的相關(guān)性，因而可以作為臨床檢測(cè)指標(biāo)之一。

SP-A是肺表面含量最多的一種糖蛋白[7]，最早在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)量多、信號(hào)豐富，參與肺表面活性生物膜的形成和代謝。SP-A可以和二棕櫚酰卵磷脂結(jié)合形成肺表面PS（一種脂蛋白復(fù)合物）成分[8]，PS可以減少肺泡萎縮等肺病，其中SP-A是PS最重要的成分，對(duì)穩(wěn)定PS意義重大[9]。SP-A 在肺內(nèi)表達(dá)量豐富，肺外及其他器官組織表達(dá)量低，具有調(diào)節(jié)肺局部免疫和炎癥反應(yīng)的作用[10]，其生物學(xué)特性和功能復(fù)雜。當(dāng)兒童機(jī)體無(wú)肺炎病癥時(shí)肺泡和周圍的毛細(xì)血管可以阻止SP-A通過(guò)屏障進(jìn)入血液循環(huán)，但是當(dāng)機(jī)體肺部發(fā)生炎癥肺部損傷時(shí)，SP-A通過(guò)肺泡和毛細(xì)血管屏障進(jìn)入到血液循環(huán)，成為肺損傷的標(biāo)志性血清學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)[11]。SP-A隨著病情的加重不僅肺泡中的含量減少，血清中的含量也會(huì)逐漸減少，但是在一定損傷程度的范圍內(nèi)，肺部損傷程度與血清中SP-A 水平成正比，血清SP-A是反映肺功能障礙可靠的指標(biāo)[12]。體外檢測(cè)血清中SP-A水平，取樣簡(jiǎn)單易行，減輕患兒的痛苦，結(jié)果具有明顯特異性，有利于指導(dǎo)臨床治療[13]。

本文通過(guò)對(duì)重癥、普通肺炎患兒以及非肺炎患兒的比較表明，TNF-α在重癥、普通肺炎患兒血清中表達(dá)水平升高，提示當(dāng)炎癥反應(yīng)異?；钴S，致炎性細(xì)胞因子TNF-α過(guò)度釋放是向重癥肺炎發(fā)展的跡象[14]；TNF-α引發(fā)炎癥反應(yīng)使肺泡和周圍毛細(xì)血管通透性增加，SP-A從肺泡滲漏到血液，血清內(nèi)SP-A水平升高而肺泡內(nèi)SP-A水平降低。在患兒不同程度的肺炎中，TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 表達(dá)水平不同，在普通肺炎患兒中兩者的表達(dá)水平均在一定程度增高；在兒童重癥肺炎血清中腫瘤壞死因子TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 的表達(dá)水平明顯高于普通組和非肺炎患兒組。這與類似文獻(xiàn)研究的結(jié)果是基本一致的，如李穎[3]等選取重癥肺炎患兒20例、普通肺炎患兒25例以及擇期手術(shù)的非肺炎患兒14例，分別于治療前應(yīng)用ELISA定量法檢測(cè)各組患兒的血清SP-A水平，研究結(jié)果表明重癥肺炎及普通肺炎組患兒血清SP-A水平均高于擇期手術(shù)的非肺炎患兒的水平。進(jìn)一步的相關(guān)性研究表明，重癥肺炎組和普通肺炎組患兒血清SP-A水平與其動(dòng)脈血氧分壓（PaO2）呈顯著負(fù)相關(guān)，進(jìn)而認(rèn)為血清SP-A水平能有效反映兒童肺炎后肺損傷的嚴(yán)重程度，有利于進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療，對(duì)于兒童肺炎預(yù)后的判斷亦具有一定臨床意義。在本研究中，僅選取了血清TNF-α和SP-A作為炎癥免疫性反應(yīng)的客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)，在肺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能有其他較多的細(xì)胞因子和免疫炎癥介質(zhì)也參與其中，如白細(xì)胞介素家族、α-干擾素（α-INF）以及CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群等，由于倫理學(xué)所限及其他因素的原因，本研究未納入其他可能更具有意義的客觀性評(píng)價(jià)指標(biāo)，是本研究的不足之處。同時(shí)本研究未對(duì)肺炎患兒血清TNF-α與SP-A的相關(guān)性進(jìn)行分析，二者之間是否具有相關(guān)性亦未可知，也是本研究的不足之處。

綜上所述，可見(jiàn)肺炎患兒血清TNF-α與SP-A水平較高，且隨著疾病嚴(yán)重程度的增加，二者水平亦隨之增高，表明血清TNF-α與SP-A可能參與了患兒肺損傷的病理發(fā)生發(fā)展過(guò)程，在一定程度上反映了患兒肺損傷的程度，可作為臨床診斷和預(yù)后評(píng)估的檢測(cè)指標(biāo)之一。

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（收稿日期：2013-12-17）endprint