老年乳腺浸潤性癌組織中ACK1、 表皮生長因子受體和PTEN的表達(dá)及意義

烏力吉白乙

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 208000)

腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中涉及多種蛋白和基因的表達(dá)失調(diào)，尤其是癌基因的激活和抑癌基因的失活。ACK1蛋白(ACK1)具有癌基因的作用，其主要分布在胞質(zhì)，是非受體的酪氨酸激酶，具有催化底物蛋白的功能〔1〕。近來研究顯示其還具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附和重組細(xì)胞骨架的作用〔2〕。表皮生長因子受體(EGFR)屬酪氨酸激酶Ⅰ型受體家族，是多種腫瘤DNA合成和細(xì)胞生長的催化劑，其過度表達(dá)常引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及浸潤〔3〕。PTEN 蛋白(PTEN)具有抑癌作用，可參與化學(xué)通路的傳導(dǎo)，把信號(hào)傳導(dǎo)給細(xì)胞，使細(xì)胞停止分裂并進(jìn)入凋亡階段，這種功能可以阻止不受控制的細(xì)胞生長進(jìn)而對腫瘤的形成起到明顯抑制作用〔4〕。本實(shí)驗(yàn)擬觀察老年乳腺浸潤性癌患者癌組織中ACK1、EGFR和PTEN的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1材料 收集科爾沁區(qū)第一人民醫(yī)院2011年12月至2013年4月行乳腺浸潤性癌根治手術(shù)的老年女性患者作為觀察組，共95例，標(biāo)本于術(shù)后15 min內(nèi)進(jìn)行取材后置于-80℃冰箱中凍存。年齡60～72(平均65.2)歲。同時(shí)選取其他象限并經(jīng)病理證實(shí)為正常乳腺組織的67例新鮮組織作為對照組，取材及保存方法同上，年齡60～68(平均65.4)歲。兩組一般資料無顯著差別(P>0.05)。

1.2ACK1、EGFR和PTEN蛋白檢測 ACK1、EGFR和PTEN抗體均購自武漢博士德生物工程有限公司。半定量表達(dá)均應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。取出凍存標(biāo)本，置于75%酒精中24～36 h后，制備單細(xì)胞懸液。取1 ml，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟滴加一抗和熒光二抗后上機(jī)檢測，應(yīng)用美國BC公司的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，做好質(zhì)量控制。

1.3流式細(xì)胞術(shù)檢測ACK1、EGFR和PTEN蛋白的判斷標(biāo)準(zhǔn) 以熒光指數(shù)(FI)表示半定量表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組ACK1、EGFR和PTEN蛋白表達(dá)的比較 兩組ACK1、EGFR和PTEN的表達(dá)量差別顯著(P<0.05)，見表1。

2.2觀察組中ACK1、EGFR和PTEN的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組中ACK1、EGFR和PTEN的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、腫瘤最大徑、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)。見表2。

表1 兩組ACK1、EGFR及PTEN蛋白的比較

表2 觀察組中ACK1、EGFR和PTEN的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3觀察組中ACK1、EGFR和PTEN表達(dá)的相關(guān)性 觀察組中ACK1和EGFR(r=0.47，P=0.0243)的表達(dá)具有正相關(guān)性，而ACK1和PTEN(r=-0.45，P=0.0315)、EGFR和PTEN(r=-0.42，P=0.0237)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。

3 討 論

乳腺浸潤性癌在老年患者發(fā)病過程中基因和蛋白表達(dá)常出現(xiàn)明顯異常。ACK1是一種酪氨酸激酶，可以結(jié)合Cdc42Hs的GTP位點(diǎn)，以抑制其GTP酶活性，與酪氨酸磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有直接關(guān)系〔5〕。近來人們研究認(rèn)為ACK1可以起到類似癌基因的作用，并在鱗癌等不同腫瘤中表達(dá)升高〔2，6〕。EGFR在腫瘤中的表達(dá)目前可用于判斷增殖及預(yù)后，主要與EGFR及其信號(hào)傳導(dǎo)通路對細(xì)胞增殖及調(diào)控的作用相關(guān)。EGFR激活后可以引起Ras-MAPK、PI3K-Akt及STAT等通路的活化，使細(xì)胞核外的信號(hào)傳導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)控細(xì)胞的生長及分裂。如果EGFR表達(dá)持續(xù)增加，使細(xì)胞的增殖能力增加，對腫瘤細(xì)胞凋亡的抑制作用減弱，此時(shí)細(xì)胞增殖活躍〔7〕。PTEN是一種抑癌基因，由多功能磷酸酶編碼，具有磷酸酯酶的活性。也有觀點(diǎn)認(rèn)為PTEN的C端尾部具有富含絲/蘇氨酸殘基的序列和一個(gè)相關(guān)的結(jié)合區(qū)域，如果這個(gè)區(qū)域出現(xiàn)明顯的突變則可以逆轉(zhuǎn)抑癌基因，進(jìn)而影響突變體的穩(wěn)定性和磷酸酯酶的活性，分子結(jié)構(gòu)也將發(fā)生明顯的變化〔8〕。

本實(shí)驗(yàn)提示ACK1、EGFR和PTEN異常表達(dá)是促進(jìn)腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的重要因素之一。3種蛋白可能與ER、PR功能及細(xì)胞增殖有關(guān)，三者具有協(xié)同作用。ACK1和EGFR作為癌基因，而PTEN作為抑癌基因在體內(nèi)是一種動(dòng)態(tài)平衡，維系這種平衡失調(diào)后，癌細(xì)胞活化，腫瘤細(xì)胞進(jìn)展加速。PTEN可以直接使PIP3的D3位點(diǎn)去磷酸化，有效地降解PKB/AKT的磷酸化水平，拮抗下游通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制血管活性因子的分泌而抑制血管的新生。也有研究認(rèn)為PTEN表達(dá)丟失或下降可以增加VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤中微血管內(nèi)皮細(xì)胞的新生〔9，10〕。而ACK1和EGFR在作用過程中也能增加血管的新生，也與VEGF的功能也有同向作用，因此ACK1、EGFR和PTEN協(xié)同作用機(jī)制可能與VEGF或血管生成相關(guān)。但是具體調(diào)節(jié)通路尚需要更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。還有觀點(diǎn)顯示EGFR高表達(dá)可能與調(diào)節(jié)黏附作用有關(guān)，即EGFR表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)，通過影響細(xì)胞支架結(jié)構(gòu)和整合素介導(dǎo)的信號(hào)傳遞，參與腫瘤的進(jìn)展〔11〕。

4 參考文獻(xiàn)

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