雌孕激素藥物與中老年女性體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)的相關(guān)性

于永玲 劉 超 初海鵬

(中國石化集團(tuán)勝利油田石油管理局勝利醫(yī)院婦產(chǎn)科,山東 東營 257055)

女性絕經(jīng)體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)致使心血管循環(huán)系統(tǒng)紊亂風(fēng)險增加〔1〕。目前普遍應(yīng)用雌孕激素治療來減輕或消除更年期前后臨床癥狀〔2〕。雌孕激素治療能否影響蛋白質(zhì)氧化、減緩細(xì)胞老化目前沒有確切的結(jié)論，本研究評估絕經(jīng)期女性，雌孕激素治療后體內(nèi)羰基化水平，為臨床治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1對象 研究對象為就診于我院婦產(chǎn)科的絕經(jīng)期女性，既往無血栓、高血壓、糖尿病、代謝疾病等影響心血管系統(tǒng)的疾病，血漿17-β-雌二醇均≤50 pg/ml的健康絕經(jīng)后女性，無吸煙史、飲酒史、甲狀腺疾病、肝臟疾病。研究前未服用降膽固醇藥物、抗氧化維生素制劑及影響新陳代謝的性激素藥物。隨機(jī)分成三組，各組受試者平均年齡、絕經(jīng)時間、體重指數(shù)(BMI)無統(tǒng)計學(xué)差異。見表1?？诜幬锝M予17-β-雌二醇1 mg，1次/d，去氧孕酮5 mg,1次/d。經(jīng)皮給藥組予17-β-雌二醇50 μg，1次/d，19-炔諾酮250 μg，1次/d；對照組Ⅲ無治療措施。本研究經(jīng)勝利油田醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，征得納入研究患同意并簽署書面文件。

1.2實(shí)驗(yàn)室檢查 研究開始前例行子宮頸細(xì)胞學(xué)分析、經(jīng)陰道超聲評估生殖器官、乳房觸診及X射線等婦科檢查。只有乳腺X線成像及細(xì)胞學(xué)檢查正常的女性才可以接受激素治療。血液檢查標(biāo)本采集于隔夜空腹后晨起8:00～9:00,采血位置為肘前靜脈。標(biāo)本均去除血小板。本研究前儲存溫度為-70℃。使用Multifibren U-kit (Dade-BehringDiagnostics,Warsaw,Poland)測定葡萄糖、17-β-雌二醇、卵泡刺激素(FSH)、纖維蛋白原(Fg)濃度；使用Baker 810血小板計數(shù)儀測定血小板計數(shù)(PLT)；使用Pathromtin SL試劑(Dade-Behring)測定部分活化凝血酶原時間；血甘油三酯(TG)水平測定在勝利油田醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。按照Alamdari等〔6〕報道的方法,使用〔2～4〕-二硝基苯酚抗體試劑(Sigma-Aldrich)通過敏感ELISA法測定血漿羰基化蛋白水平。

2 結(jié) 果

各組血清纖維蛋白原濃度有顯著差異(P=0.000)。經(jīng)治療后雌二醇水平顯著增加，而FSH水平在三組女性中無明顯差異。激素治療6個月后，其血漿蛋白羰基化水平〔口服給藥組(1.79±0.068)nmol/mg;經(jīng)皮給藥組(1.81±0.074)nmol/mg〕低于對照組〔(2.20±0.107)nmol/mg〕(P=0.000)，但兩種給藥方式血漿蛋白羰基化水平?jīng)]有顯著差異(P=0.326)。見表2。

表1 各組一般情況

表2 各實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

3 討 論

人體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)取決于活性氧(ROS)的產(chǎn)生與抗氧化系統(tǒng)清除之間的平衡。ROS能夠與體內(nèi)各種生物分子產(chǎn)生反應(yīng)使之失去正常功能，尤其是蛋白質(zhì)分子〔4〕。蛋白質(zhì)分子超氧化、羥基化、過氧化、臭氧化、氧化、過氧硝酸鹽化等導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能紊亂〔5〕。氧自由基與氨基酸殘基相互作用產(chǎn)生酮或醛衍生物統(tǒng)稱為羰基化。羰基化蛋白質(zhì)與二硝基苯肼(DNPH)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)〔6〕。機(jī)體老化及多種疾病過程體內(nèi)的血漿蛋白羰基化均有增加〔7〕。很多神經(jīng)退行性疾病與組織內(nèi)抗蛋白質(zhì)水解的羰基化蛋白質(zhì)堆積直接相關(guān)〔8〕。已經(jīng)證明氧自由基激活蛋白質(zhì)氧化損傷在老化過程中主要作用〔9〕。多數(shù)的氧化應(yīng)激研究都是通過測定蛋白的過氧化反應(yīng)進(jìn)行評估，并未關(guān)注血漿蛋白氧化反應(yīng)。

雖然荷爾蒙激素可以減輕絕經(jīng)期癥狀，能夠預(yù)防骨質(zhì)疏松以及冠心病，但其抗氧化作用尚存在爭議。雌激素的類固醇環(huán)能夠有效清除羥自由基，產(chǎn)生羥基化產(chǎn)物。雌激素在體內(nèi)外都能夠減少ROS種類，減輕氧化應(yīng)激癥狀。絕經(jīng)后女性卵巢產(chǎn)生雌激素減少可導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)的增加〔10〕。目前的研究部分解釋了雌激素如何起到抗氧化作用，并解釋了雌孕激素口服給藥途徑作用強(qiáng)于經(jīng)皮給藥。雌激素分子本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)特性決定了其本身具有抗氧化作用。另一方面，雌激素能夠間接增加如谷胱甘肽過氧化物酶(Gpx)和錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性。很多研究證實(shí)單純口服雌激素的抗氧化作用更強(qiáng)〔11〕。本研究也顯示雌激素經(jīng)口服給藥途徑比經(jīng)皮給藥途徑血漿蛋白羰基化水平要低，但是沒有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。雌激素口服后經(jīng)消化道吸收入肝，在肝細(xì)胞內(nèi)抑制催化蛋白1和k-B因子〔12〕從而中和氧化應(yīng)激反應(yīng)。本研究中口服給藥組和經(jīng)皮給藥兩組患者均給予雌孕激素復(fù)合給藥，治療后羰基化水平降低，雌孕激素復(fù)合應(yīng)用時作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)應(yīng)用〔13〕。多數(shù)研究通過不同方法關(guān)注脂質(zhì)氧化易感性〔14〕，重點(diǎn)不在脂質(zhì)氧化。本研究的重點(diǎn)關(guān)注女性荷爾蒙激素治療后血漿蛋白質(zhì)氧化應(yīng)激，發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后女性未經(jīng)荷爾蒙激素治療血漿蛋白質(zhì)氧化應(yīng)激水平高于治療組。因此得知，絕經(jīng)后女性血漿蛋白質(zhì)高羰基化是因?yàn)槁殉彩Чδ埽萍に靥娲煼軌蚴贵w內(nèi)氧化還原反應(yīng)重新達(dá)到平衡〔15〕?？傊瑹o論通過何種給藥途徑，女性雌孕激素聯(lián)合治療均能減少血漿蛋白質(zhì)氧化應(yīng)激反應(yīng)，而口服給藥效果更好。

4 參考文獻(xiàn)

1Castelao JE,Gago-Dominguez M.Risk factors for cardiovasculardisease in women:relationship to lipid peroxidation and oxidative stress〔J〕.Med Hypotheses,2008;71(1):39-44.

2Farquhar C,Marjoribanks J,Lethaby A,etal.Long term estrogen plus progestogen therapyfor perimenopausal and postmenopausal women〔J〕.Cochrane Database Syst Rev,2009;(2):281.

3Stadtman ER.Protein oxidation and aging〔J〕.Science,1992;257:1220-4.

4Nowak P,Zbikowska HM,Ponczek M,etal.Different vulnerability of fibrinogen subunits to oxidative/nitrative modifications induced by perixynitrite:functional consequences〔J〕.Thromb Res,2007;121(21):163-74.

6Dalle-Donne I,Rossi R,Giustarini D,etal.Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress〔J〕.Clin Chim Acta,2003;329(1-2):23-38.

6Alamdari DH,Kostidou E,Paletas K,etal.High sensitivity enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method for measuring protein carbonyl in samples with low amounts of protein〔J〕.Free Radic Biol Med,2005;39:1362-7.

7Paton LN,Mocatta TJ,Richards AM,etal.Increased thrombin-induced polymerization of fibrinogen associated with high protein carbonyl levels in plasma frompatients post myocardial infarction〔J〕.Free Radic Biol Med,2010;48(2):223-9.

8Baltacioglu E,Akalin FA,Alver A,etal.Protein carbonyl levels in serum and gingival crevicular fluid in patients with chronic peridontitis〔J〕.Arch Oral Biol,2008;53(8):716-22.

9Beal MF.Oxidatively modified proteins in aging and disease〔J〕.Free Radic Biol Med,2002;32(9):797-803.

10Thibodeau PA,Kachadourian R,Lemay R,etal.In vitro pro- and antioxidant properties of estrogens〔J〕.J Steroid Biochem Mol Biol,2002;81(3):227-36.

11Bednarek-Tupikowska G,Tupikowski K,Bidzinka B.Serum lipid peroxides and total antioxidant ststus in postemenopausal women on hormone replacement therapy〔J〕.Gynecol Endocrinol,2004;19(2):57-63.

12Vihma V,Vehkavaara S,Yki-Jarvinen H,etal.Differential effects of oral and transdermal estradiol treatment on circulating estradiol fatty acid ester concentrations in posmenopausal women〔J〕.J Clin EndocrinolMetab,2003;88(2):588.

13Shimizu I.Impact of oestrogengs on the progression of liver disease〔J〕.Liver Int,2003;23(1):63-9.

14Signorelli SS,Neri S,Sciachitano Setal.Behaviour of some indicators of oxidative stress in postmenopausal and fertile women〔J〕.Maturitas,2006;53(1):77-82.

15Stetkiwicz T,PoacI,Jedrzejczyk S,etal.Antioxidant activity of estrogens〔J〕.Menopausal Rev,2003;2:19-22.