炙甘草湯加減對(duì)急性心肌缺血大鼠心電圖和血清酶學(xué)指標(biāo)的影響

王 智 徐瑞鑫

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展和人口的老齡化，心腦血管系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和死亡率日益增高。急性心肌缺血是最為常見的心血管疾病之一，是中老年人群的多發(fā)病。心肌缺血最為明顯的特征是心電圖(ECG)的改變〔1〕以及血清中各種心肌酶濃度的變化〔2〕。炙甘草湯是中醫(yī)臨床上治療心動(dòng)悸、脈結(jié)代的經(jīng)典方劑，具有益氣養(yǎng)血、通陽(yáng)復(fù)脈的功效。本院臨床上常使用炙甘草湯加減治療心肌缺血性疾病，在原方的基礎(chǔ)上去地黃、阿膠、麥門冬、麻仁及大棗，加入開竅藥冰片，益氣通脈作用更強(qiáng)，在實(shí)際臨床上取得了令人滿意的療效。但是該方屬于經(jīng)驗(yàn)用方，缺乏藥效學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的方法復(fù)制急性心肌缺血大鼠的模型，并考察炙甘草湯加減對(duì)該模型大鼠ECG以及血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)以及丙二醛(MDA)濃度的影響，以期為該炙甘草湯加減方在臨床上的更廣泛應(yīng)用奠定前期基礎(chǔ)并提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar雄性6月齡大鼠30只，體重(240±20)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心(GLP)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：黑動(dòng)字第P00700619號(hào)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑 氨基甲酸乙酯(烏拉坦，上海三浦化工有限公司，批號(hào)：20120418)；CK試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：120530)；LDH試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：120423)；MDA試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：120507)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器 分析天平(梅特勒-托力多儀器上海有限公司，型號(hào)：MS204S)；低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，型號(hào)：KDC-40)；多道生理記錄儀(美國(guó)BIOPAC公司，型號(hào)：MP-100)；小動(dòng)物呼吸機(jī)(江西特力麻醉呼吸設(shè)備有限公司，型號(hào)：TKR-200C)；電子秤(亞太電子天平有限公司，型號(hào)：DJ-500A)；半自動(dòng)生化儀(日立公司，型號(hào)：KY2000)；電磁屏蔽室 (常州第二無線電廠，型號(hào)：P-22)。

1.2實(shí)驗(yàn)環(huán)境 為了避免電磁波對(duì)大鼠ECG的干擾，本實(shí)驗(yàn)操作在電磁屏蔽室內(nèi)進(jìn)行，屏蔽室內(nèi)溫度控制在20℃～22℃，相對(duì)濕度控制在45%～75%，采用24 h明暗自動(dòng)控制系統(tǒng)(設(shè)定早7：00時(shí)和晚19：00時(shí)為自動(dòng)明暗切換時(shí)間點(diǎn))。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1炙甘草湯加減方的制備 取炙甘草240 g，生姜180 g，桂枝180 g，人參120 g，冰片20 g加8倍量的水，浸泡1 h后，沸水煎煮90 min，過濾，藥渣再加6倍量水，沸后煎煮30 min，再過濾后，合并兩次濾液，濃縮至740 ml，使每毫升濃縮液中含生藥量的濃度為1.0 g/ml，備用。

1.3.2大鼠急性心肌缺血模型的復(fù)制 實(shí)驗(yàn)前記錄實(shí)驗(yàn)大鼠Ⅱ?qū)CG，心電不正常的大鼠剔除。將篩選后雄性Wistar大鼠30只，按照體重區(qū)域化隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組和給藥組，給藥組大鼠每天灌胃炙甘草湯加減方16 ml/kg，假手術(shù)組和模型組灌胃給予等體積的生理鹽水，連續(xù)14 d，于末次給藥后，給大鼠腹腔注射10%的烏拉坦麻醉(1 g/kg)，仰位固定，剪開頸部毛皮，剝離肌肉，暴露氣管，行氣管插管〔3〕，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，呼吸頻率設(shè)定為90次/min，呼吸比為1∶1。將大鼠左側(cè)胸部去毛，在左側(cè)第3～4肋間開胸，輕壓右側(cè)胸部，暴露心臟，剝離心包膜，在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳之間，左心耳下緣約2～3 mm處進(jìn)針結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，以排除手術(shù)對(duì)大鼠造成的影響?？p合肌肉層及毛皮層，采用帶注射器的膠管，邊縫合邊抽出胸腔內(nèi)空氣，以免造成氣胸〔4〕。

1.3.3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的監(jiān)測(cè) 采用生理記錄儀監(jiān)測(cè)大鼠的Ⅱ?qū)CG，并記錄大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎30、60 min、2、4、6 h后ECG中J點(diǎn)的位移△J。并在末次記錄△J后，經(jīng)頸靜脈取血0.5 ml，在離心機(jī)上離心，3 500 r/min，離心10 min后取上層血清，用半自動(dòng)生化儀測(cè)定其中CK、LDH及MDA的濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，運(yùn)用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)(One-way ANOVA)。

2 結(jié) 果

2.1炙甘草湯加減對(duì)急性心肌缺血大鼠心電圖J點(diǎn)位移的影響 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈30、60 min、2、4、6 h后心電圖△J明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，給藥組大鼠各時(shí)間點(diǎn)心電圖△J明顯降低(P<0.05)。見表1。

表1 炙甘草湯加減對(duì)急性心肌缺血大鼠心電圖J點(diǎn)位移的影響

2.2炙甘草湯加減對(duì)急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA濃度的影響 與假手術(shù)組相比，冠脈結(jié)扎6 h后模型組大鼠血清中CK、LDH及MDA濃度明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，給藥組大鼠血清中CK和LDH濃度顯著降低(P<0.05)，在MDA這個(gè)指標(biāo)上雖有下降的趨勢(shì)，但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P>0.05)。見表2。

表2 炙甘草湯加減對(duì)急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA濃度的影響

3 討 論

急性心肌缺血是對(duì)人類健康危害最大的疾病之一，發(fā)病快且致死率高，因此，尋找有效對(duì)抗急性心肌缺血的藥物尤為重要。中藥復(fù)方炙甘草湯是中醫(yī)臨床上較為常用的治療缺血性心臟病的基礎(chǔ)方劑，本研究中在該方的基礎(chǔ)上去地黃、阿膠、麥門冬、麻仁及大棗，加入開竅藥冰片，增強(qiáng)其益氣通脈的作用。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈復(fù)制急性心肌缺血大鼠模型的方法是目前國(guó)內(nèi)、國(guó)外研究者最為常用的復(fù)制該模型的方法，通過使冠狀動(dòng)脈變狹窄，導(dǎo)致其供應(yīng)區(qū)域的血流減少或缺失，進(jìn)而造成心肌缺血〔5～7〕。心肌細(xì)胞因缺血、缺氧導(dǎo)致代謝的紊亂，進(jìn)而造成局部凝固性的壞死，其發(fā)病過程和機(jī)制與臨床十分相似。

對(duì)心肌缺血進(jìn)行ECG的ST段標(biāo)測(cè)不僅可以定性、定量地觀察大鼠心肌缺血的嚴(yán)重程度，也可以用來考察抗心肌缺血藥物的療效。由于大鼠和人ECG的差異性，常選用J點(diǎn)位移(△J)作為評(píng)價(jià)其心肌缺血的首選指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，炙甘草湯加減能明顯對(duì)抗結(jié)扎冠狀動(dòng)脈對(duì)大鼠心肌造成的影響，且該作用從冠脈結(jié)扎后的30 min開始，至少能維持6 h。

CK主要儲(chǔ)存在心肌細(xì)胞的線粒體內(nèi)，LDH則廣泛分布在心肌組織中，當(dāng)心肌缺血后，心肌細(xì)胞受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂壞死，CK和LDH就會(huì)被釋放而進(jìn)入血液，因此，CK和LDH在血液中濃度的變化對(duì)診斷缺血性心臟疾病有著十分重要的意義。心肌缺血后會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，MDA就是氧自由基攻擊生物膜后發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，因此血液中MDA的濃度能間接反映心肌細(xì)胞受到氧自由基攻擊而造成損傷的程度〔8〕。本研究結(jié)果表明，炙甘草湯加減能顯著對(duì)抗心肌缺血對(duì)大鼠心肌細(xì)胞造成的損傷，能明顯降低血清中CK和LDH的濃度，但在MDA這個(gè)指標(biāo)上，雖有降低的趨勢(shì)，但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。

本研究初步闡明了該炙甘草湯加減方對(duì)大鼠心肌缺血的對(duì)抗作用，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度明確了炙甘草湯加減的療效，為該方在臨床上更廣泛的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4 參考文獻(xiàn)

1白 雪，宋志宙，楊思進(jìn)，等.心安顆粒對(duì)急性心肌缺血大鼠心電圖影響的研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010；21(10)：2707-9.

2王曉明，李付彪，呂文偉，等.白芍總苷對(duì)犬急性心肌缺血的保護(hù)作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2006；32(3)：393-6.

3周文武，林 玲，陳 軍，等.冠脈結(jié)扎法制作大鼠心肌缺血模型〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2004；4(12)：226-30.

4徐瑞鑫，譚銀豐，李廷利.刺丹混合液對(duì)急性心肌缺血大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響〔J〕.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009；11(6)：852-5.

5He HB,Xu J,Xu YQ，etal.Cardioprotective effects of saponins from Panax japonicus on acute myocardial ischemia against oxidative stress-triggered damage and cardiac cell death in rats〔J〕.Ethnopharmacol，2012；140(1)：73-82.

6Guven-Bagla A，Ercan E，Asgun HF，etal.Experimental acute myocardial infarction in rats：HIF-1α，caspase-3，erythropoietin and erythropoietin receptor expression and the cardioprotective effects of two different erythropoietin doses〔J〕.Acta Histochemica，2013；115(7)：658-68.

7Di Paola R，Mazzon E，Paterniti I，etal.Olprinone，a PDE3 inhibitor，modulates the inflammation associated with myocardial ischemia-reperfusion injury in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2011；650(2-3)：612-20.

8譚銀豐.刺丹混合液抗心肌缺血作用的實(shí)驗(yàn)研究〔D〕.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)碩士論文，2008.