慢性腦供血不足患者早期認(rèn)知障礙的血液標(biāo)志物

賈曉靜 張靖涵 賈少杰

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院骨外二科，吉林 吉林 132001)

慢性腦供血不足(CCCI)因其臨床發(fā)病率較高、可干預(yù)性較強(qiáng)而逐漸被多數(shù)學(xué)者所熟識(shí)〔1，2〕。但因其發(fā)病具有隱襲性，早期癥狀輕微、檢測(cè)手段繁瑣不易被發(fā)現(xiàn)而延誤，直至發(fā)展成癡呆或缺血性腦卒中〔3，4〕。本研究應(yīng)用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表(MoCA)、簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(MMSE)對(duì)CCCI患者進(jìn)行綜合檢測(cè)評(píng)分，對(duì)入選認(rèn)知障礙的CCCI患者進(jìn)行血液指標(biāo)：S100β、血漿酸性磷脂(AP)及相關(guān)血液檢查(如血糖、血脂、血粘等)，試圖找到一種或多種血清學(xué)標(biāo)志物對(duì)CCCI患者是否存在認(rèn)知障礙進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，以便提高檢測(cè)效率，為早預(yù)防、早干預(yù)、早治療找到一個(gè)新的思路，避免進(jìn)一步加重發(fā)展成癡呆或缺血性腦卒中。

1 材料與方法

1.1一般資料 按照2000年日本腦卒中學(xué)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)最新修訂版選擇2011年8月至2012年10月在北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診及住院治療的患者57例為CCCI組，其中男30例，女27例，平均年齡 (64.33±6.98)歲；健康體檢人員69例為正常對(duì)照組(C組)，男33例，女36例，平均年齡(62.83± 5.75)歲。排除其他疾病導(dǎo)致的認(rèn)知障礙，如Alzheimer病(AD)、正常顱壓腦積水、多發(fā)性硬化、腦腫瘤、一氧化碳中毒、前庭-迷路疾病、外傷性疾病、貧血等。

應(yīng)用MMSE量表和MoCA量表對(duì)入選的CCCI組患者進(jìn)行認(rèn)知障礙的檢測(cè)，將有認(rèn)知障礙的46例患者及健康組人群經(jīng)認(rèn)知評(píng)定后無(wú)認(rèn)知障礙的53例患者采集空腹血液，檢測(cè)S100β、AP、血糖、血脂、血黏度等相關(guān)指標(biāo)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 對(duì)測(cè)試人群一次性采集空腹靜脈血15 ml，其中4 ml置于加入促凝劑的潔凈玻璃管內(nèi)，2～3 h內(nèi)離心，3 000 r/min離心10 min，取上清液置于-70℃的冰箱內(nèi)保存待S100β蛋白測(cè)定。另4 ml置于特殊抗凝管內(nèi)，60 min內(nèi)離心，8 000 r/min離心10 min，取上層血漿用于測(cè)定AP。余血液常規(guī)送我院檢驗(yàn)科進(jìn)行血糖、血脂等檢測(cè)。為避免影響測(cè)定結(jié)果，要求測(cè)試者血液檢測(cè)前2 d未進(jìn)食大量高蛋白、高脂肪、高嘌呤食物及飲酒，采集標(biāo)本血樣過(guò)程中無(wú)溶血。

1.2.2測(cè)定方法 S100β蛋白測(cè)定的試劑采用北京泰福仕科技開發(fā)公司試劑盒，使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中S100β蛋白濃度。AP測(cè)定套裝試劑盒購(gòu)自北京泰福仕科技開發(fā)公司，按試劑盒說(shuō)操作，主要步驟為磷脂抽提、分離、過(guò)濾、顯色。血清生化指標(biāo)采用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀進(jìn)行常規(guī)檢查。

2 結(jié) 果

2.1兩組病例血清學(xué)分析 CCCI組S100β及AP濃度明顯高于正常對(duì)照組(均P<0.000 1)。見表1。

表1 兩組人群血清S100β及AP檢測(cè)指標(biāo)

2.2兩組病例的空腹血糖、血脂情況分析 CCCI組的血脂濃度均高于健康對(duì)照組，其中CCCI組甘油三酯(TG)與低密度脂蛋白水平(LDL)明顯高于對(duì)照組(P<0.001)。其余檢測(cè)參數(shù)兩組之間無(wú)明顯差異性。見表2。

表2 兩組人群空腹血糖、血脂濃度比較

2.3血清指標(biāo)與CCCI患者認(rèn)知情況的相關(guān)性 以患者M(jìn)oCA總分為應(yīng)變量(Y)，S100β濃度為自變量(X1)，AP濃度為自變量(X2)，進(jìn)行相關(guān)性分析。CCCI患者的MoCA量表認(rèn)知功能得分與其血液S100β、AP檢測(cè)濃度呈明顯負(fù)相關(guān)(Rs=-0.972,P<0.01)，MoCA得分越低S100β及AP濃度超出正常水平越多。而MoCA得分越低與S100β和AP濃度越高時(shí)患者認(rèn)知障礙越嚴(yán)重。見圖1，圖2。

圖1 CCCI組患者M(jìn)oCA評(píng)分與S100β濃度的相關(guān)性分析

圖2 CCCI組患者M(jìn)oCA評(píng)分與AP濃度的相關(guān)性分析

3 討 論

CCCI不僅嚴(yán)重?fù)p傷腦細(xì)胞，同時(shí)破壞了血腦屏障，使原本僅存在于中樞神經(jīng)組織內(nèi)的一些蛋白或酶類，從壞死或凋亡的腦細(xì)胞中釋放出來(lái)，通過(guò)被破壞的血腦屏障進(jìn)入血液，所以監(jiān)測(cè)患者血清中相關(guān)蛋白或酶類的濃度變化，能夠較可靠地反映腦損傷的嚴(yán)重程度，亦有可能對(duì)腦認(rèn)知損傷的治療及預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)意義〔5〕。

S100蛋白是一種鈣離子結(jié)合蛋白，由α、β兩種亞基組成。而S100β蛋白主要存在于腦中(約占96%)，較其他亞型更具有活性，因此被認(rèn)為是腦內(nèi)特異蛋白〔6〕。S100β蛋白主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)膠質(zhì)細(xì)胞中，由星形膠質(zhì)細(xì)胞合成，其他少數(shù)腫瘤細(xì)胞(如：神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤等)、不同區(qū)域的神經(jīng)元、突觸小體和突觸膜上也存在S100β蛋白的表達(dá)〔7〕。且S100β蛋白的半衰期約為25 min，時(shí)間較短，由于半衰期很短，因此其持續(xù)升高提示可能繼發(fā)有腦細(xì)胞損傷，監(jiān)測(cè)S100β蛋白水平變化程度可反映腦膠質(zhì)細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度。此蛋白的水平變化不僅反映腦膠質(zhì)細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度，在眾多研究中發(fā)現(xiàn)其還可以調(diào)控神經(jīng)元與膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用。在經(jīng)過(guò)大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究中發(fā)現(xiàn)，S100β蛋白在腦出現(xiàn)缺血、缺氧、外傷及血管性意外時(shí)因神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞受到刺激后被大量激活、釋放入腦脊液中，再因血腦屏障受損而進(jìn)入血液。亦有報(bào)道顯示，血清S100β蛋白濃度水平與動(dòng)脈中乳酸鹽的水平呈正相關(guān)，血清S100β蛋白濃度水平與平均動(dòng)脈壓和pH值呈負(fù)相關(guān)，因此可以看出人體內(nèi)血清S100β蛋白水平與組織灌注量具有密切關(guān)系〔8，9〕。

血漿酸性磷脂AP是在機(jī)體缺血、缺氧時(shí)磷脂酶D氧化應(yīng)激的直接產(chǎn)物〔10〕，極性與溶血磷脂酸極為相似。當(dāng)機(jī)體細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，AP被大量釋放，會(huì)引起鈣離子的動(dòng)員，并且會(huì)激活或協(xié)同激活細(xì)胞內(nèi)各種酶(如蛋白激酶C、磷酸二酯酶、還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶等)〔11〕。在此基礎(chǔ)上AP還可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)超氧化物的形成和誘發(fā)血小板聚集。雖然目前對(duì)于AP的研究甚少，許多發(fā)生機(jī)制不明確，但根據(jù)其極性、來(lái)源并綜合眾多臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，AP對(duì)于腦部缺血、缺氧極為敏感，在腦缺血后24 h內(nèi)就產(chǎn)生，亦被作為腦缺血標(biāo)志物，可以及時(shí)反映患者當(dāng)前腦部供血水平。因此AP是缺血性腦卒中早期的預(yù)警分子，在缺血性腦病中具有重要的研究?jī)r(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。

本研究可以看出血清中S100β蛋白、血脂及血漿酸性磷脂可能參與了CCCI〔12〕。考慮血清S100β蛋白及AP是CCCI患者認(rèn)知功能障礙的高危因素，其檢測(cè)對(duì)CCCI發(fā)生認(rèn)知障礙的診斷和預(yù)后具有潛在的臨床價(jià)值。但限于受試者數(shù)目較少，僅為小樣本實(shí)驗(yàn)，只是初步進(jìn)行了探討，仍需進(jìn)一步的大樣本研究及流行病學(xué)調(diào)查，如可早期識(shí)別CCCI引起的認(rèn)知障礙〔13〕，并了解其影響因素，對(duì)其進(jìn)行及時(shí)而有效地干預(yù)，防止癡呆形成，將對(duì)臨床工作及社會(huì)家庭產(chǎn)生十分重要的意義。

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