云南食用葛中大豆苷的含量測定

云南省藥物研究所，云南 昆明 650111

云南食用葛中大豆苷的含量測定

張曉南徐怡牛延菲符德歡周培軍毛宏云

云南省藥物研究所，云南 昆明 650111

目的測定食用葛中大豆苷的含量，并進行方法學考察，以期為其質量標準的建立提供可靠依據。方法樣品以甲醇(70%)超聲提取，采用高效液相色譜法測定，色譜條件為：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱，流動相為0～30min，甲醇-水(20∶80→65∶35)線性梯度洗脫，檢測波長為250nm，柱溫為30℃。結果建立了食用葛中大豆苷含量的測定方法，進行了方法學考察，并測定了三個產的食用葛藥材中的大豆苷含量，其中產于昆明的食用葛含有的大豆苷0.84%，產于大理的含1.12% ，產于香格里拉的含1.87%。結論測定結果表明各產地間大豆苷含量有明顯差異，本方法能有效測定食用葛中的大豆苷含量，且較為穩(wěn)定，所得數據可為將來建立食用葛藥材標準提供依據。

食用葛；大豆苷；含量測定；高效液相色譜法

食用葛為豆科葛根屬植物食用葛(Pueraria edulis Pamp.)的根，主要分布云南、四川、廣西等地區(qū)，在云南、四川有時作粉葛藥用，其資源量較為豐富，但現有研究比較薄弱。據《滇南本草》載“葛根(味甜者甘葛，味苦者苦葛),味甘，性微寒。入陽明經。治胃虛消渴，傷風、傷暑，傷寒，解表邪，發(fā)寒熱往來，濕瘧，解中酒熱毒。小兒痘疹初出要藥?！盵1]。食用葛根中含有尿囊素，二十四酸-α-甘油酯，β-谷甾醇，大豆苷元，染料木苷，大豆苷，葛根素，大豆苷元-8-C-芹菜糖(1→6)葡萄糖苷等成分。[2]在其有效成分中，最受關注的是異黃酮類，也是其主要活性成分，本文選取其含量較高的異黃酮類成分大豆苷，建立其含量測定方法，以期為其質量評價提供可靠依據。

1 藥材、儀器、藥品與試劑

1.1 食用葛藥材采自香格里拉、昆明、大理，經中國科學院昆明植物研究所分類鑒定室陶德定副研究員鑒定為食用葛Pueraria edulis Pamp.。

1.2 Agilent1100型高效液相色譜儀，DAD檢測器，Agilent Chemstation 工作站。

1.3 大豆苷對照品：中國食品藥品檢測研究院提供，批號：111738-201302。

試藥：甲醇(色譜純)，水(超純水)，95%乙醇(分析純)。

2 方法與結果

2.1 液相色譜條件 結合文獻報道[3～6]和實驗研究，色譜條件確定為：色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18；流動相：甲醇-水，線性梯度洗脫，條件見下表；流速：1ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：250nm；進樣量：10μl。

表1 梯度洗脫條件

2.2 標準品溶液制備 精密稱取大豆苷對照品20mg，加70%甲醇溶解，定容到25ml，即為標準品母液，取母液適量，加70%甲醇稀釋到需要濃度即得。

2.3 供試品溶液制備 精密稱取食用葛藥材約0.2g，加入甲醇(70%)20ml，稱定重量，超聲提取30min(59KHz， 325W)，放冷，用甲醇(70%)補足失重，濾過，濾液用0.2μm濾膜濾過，即得。

2.4 線性關系考察 精密量取大豆苷標準品母液適量，70%甲醇稀釋，分別配制成濃度為3.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0、200.0ug/ml的對照品溶液，照確定的色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，由濃度及相應峰面積得線性方程和相關系數。

表2 線性關系考察(n=7)

線性方程：Y=35.473X—55.138，r2=0.9999，大豆苷在3～200ug/ml濃度范圍內線性關系良好。

2.5 精密度考察 取同一大豆苷標準液(20ug/ml)，按選定色譜條件連續(xù)進樣6次，峰面積RSD為0.55 %<3%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性 精密稱取食用葛藥材(產地昆明)6份，按照2.3項下供試品溶液制備方法制備，測定大豆苷量，測得大豆苷平均含量為1692.9ug/g，RSD為2.17%，表明本方法重復性良好

2.7 回收率試驗 稱取已知含量的食用葛藥材(1692.9ug/g)9份，以1∶0.5，1∶1，1∶1.5分別精密加入大豆苷對照品，按照供試品溶液制備方法制備，測定大豆苷量，計算回收率，回收率為98.4%～103.2%，RSD為1.49%<3%。結果見下表3：

表3 加樣回收率試驗結果(n=9)

2.8 耐用性試驗

2.8.1 不同色譜柱考察 選用不同品牌的三根色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250mm,5μm)， Waters Symmetry C18(4.6×250mm,5μm)，Shiseido C18(4.6×250mm,5μm)；對供試品溶液和標準品溶液用2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果表明三根色譜柱保留時間與峰形略有差異，但大豆苷的峰都能完全分離，分離度達到1.5以上，且所測得的大豆苷含量只是略有差異。

2.8.2 不同柱溫考察 改變柱溫，其他條件不變，用2.1項下色譜條件進樣測定供試品溶液(產地昆明)，記錄色譜圖，結果表明柱溫在有變動時，測定結果不受大的影響，20℃時出峰時間為17.321min，峰面積為625.16；30℃是出峰時間為14.087min，峰面積為627.15；40℃時，出峰時間為14.523min，峰面積為634.62。

2.8.3 不同儀器考察 選用不同品牌的三臺高效液相色譜儀：Agilent 1100， Waters 2695，Shimadzu LC 2010；用2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果表明在儀器的品牌、型號有變動時，大豆苷的峰能夠完全分離，且進樣濃度有小的波動時，測定結果不受大的影響，在儀器穩(wěn)定的情況下，仍可以準確進行定量測定。

2.9 供試品溶液穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液(產地昆明)，分別在0h、2h、6h、12h照2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果大豆苷含量RSD值為1.75%，表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定性良好。

2.10 樣品測定 取不同產地的樣品，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣10μl，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄各成分的峰面積，以外標法計算樣品中各成分的含量，結果見表4。三個產地食用葛藥材中大豆苷含量分別為1.87%(香格里拉)，1.12%(大理)，0.84%(昆明)。

表4 樣品含量測定結果

3 討論

實驗結果表明，云南三個產地的食用葛中都含有一定量的大豆苷，但含量有明顯差異，產于大理和香格里拉的含量都高于昆明，這從一個方面提示食用葛將來栽培的優(yōu)質產區(qū)可在滇西北遴選。

在筆者的研究中還發(fā)現，食用葛不含葛根素，與藥典規(guī)定的粉葛在成分上差異較大，是否能與粉葛混用值得考證。如果食用葛作為地方習用藥藥用，則需新制定專門的藥材質量標準，本項研究的成果可為此提供可靠數據。此外，我們還進行過食用葛水提物解酒作用和急性毒性方面的研究，結果表明食用葛水提物有較明顯的解酒作用，且毒性較低，在將來的保健品開發(fā)中是值得注意的優(yōu)質資源。

[1]滇南本草整理組.《滇南本草》(整理本.第2卷)[M].昆明:云南人民出版社,1977:212.

[2]史海明,閔知大.食用葛根的化學成分研究[J].中國藥科大學學報,2000,31(6):411.

[3]欒玉泉,何作順.大理食用葛根中葛根素和葛根總黃酮含量分析與評價[J].云南中醫(yī)學院學報,2009,32(3):20-21.

[4]阮建林,張雯潔,谷俊峰,等.云南產葛根的葛根素及總黃酮含量測定[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2000,21(3):39-40.

[5]裴香萍，劉亞明.野葛、粉葛與云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量比較[J].中國藥房,2012,23(47):4462-4464

[6]胡江琴,王利琳.葛根的化學成分分析[J].杭州師范學報,1993(3):70-73.

TheQuantitativeDeterminationofDaidzinnFromEthnomedicinePuerariaedulisPamp.inYunnan

ZHANG Xiao-nan XU Yi NIU Yan-fei MAO Hong-yun

Yunnan Institute of Materia Medica, Yunnan, Kunming, 650111

ObjectiveTo determine and analyze the content of daidzin from Radix Pueraria edulis Pamp.MethodsHPLC method was used to determine and analyze the content of daidzin which were extracted by ultrasonic extraction.ResultThe results of the samples for the test have shown that the samples from Kunming contain Daidzin 0.84%, the samples from Dali contain 1.12%, the samples from Shangri-La contain 1.87% .ConclusionThis method is efficient and stable，can be used in the future quality standards.

Pueraria edulis Pamp.; daidzin; quantitative determination; HPLC

云南省應用基礎研究面上項目2010CD142。

張曉南(1981-)，女，云南昆明人，工程師，碩士，主要研究方向：天然藥物開發(fā)和質量控制,E-mail:xiaonan1242@126.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)17-0017-02

2014.07.05)