HPLC法測定秋水仙藥材中秋水仙堿的含量

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新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

HPLC法測定秋水仙藥材中秋水仙堿的含量

劉偉新沈曉麗蘇萊曼·哈力克

新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

目的研究秋水仙藥材中秋水仙堿的提取分離及對秋水仙堿進(jìn)行質(zhì)量控制。方法用0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液提取藥材。色譜柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流動相：甲醇-水(45∶55)；檢測波長：353nm；流速：1.0ml/min。結(jié)果能很好的將秋水仙堿分離出來，秋水仙堿在0.074～0.444mg/ml之間線性關(guān)系良好，r=0.9999；平均回收率為103.57%，RSD為4.58%。結(jié)論本文使用用乙醇做提取溶劑，無毒性;含量測定方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于秋水仙藥材的質(zhì)量控制。

維吾爾藥材秋水仙；秋水仙堿；質(zhì)量控制；含量測定

秋水仙為百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鱗莖。為維吾爾藥常用藥材，維吾爾語稱“蘇潤江”。主產(chǎn)于歐洲，尤盛產(chǎn)于地中海和黑海沿岸，非洲和西亞、南亞等地亦有分布 ，目前多從巴基斯坦進(jìn)口。我國自七十年代起從國外引進(jìn)種子和球莖，分別在北京、廬山、昆明等地試種。

秋水仙被收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊》，秋水仙堿作為秋水仙的主要化學(xué)成分，尚未建立含量測定方法。此次，作為國家藥品(維藥)標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題，對原有的秋水仙標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂、提高，同時，建立了秋水仙堿含量測定的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)，Empower工作站(美國Waters公司)；ZY012臺式電熱干燥箱；METTLER AE 200型電子分析天平(瑞士)。

1.2 材料 秋水仙堿(批號101176-201001，中國藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純，水為去離子水，其余試劑均為分析純。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供試品藥材分別從伊朗、巴基斯坦進(jìn)口，由新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司、新疆華康藥業(yè)股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 秋水仙提取分離 取秋水仙粉末(過3號篩)2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→100)20ml，振蕩15min，放置24h，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 秋水仙堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流動相：甲醇-水(45∶55)；檢測波長：353nm；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μl 。在此色譜條件下，秋水仙堿峰型較好，并且能夠較好的分離。色譜圖見圖1。

2.2.2 對照品溶液的制備 取秋水仙堿對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的鹽酸乙醇溶液(2.7→1000)20ml，振蕩15min(恒溫振蕩器；室溫；中等強(qiáng)度)，放置24h，過0.45微孔濾膜，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取秋水仙堿6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇適量，溶解，并定容至刻度，搖勻，作為對照儲備液。精密量取上述儲備液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色譜儀，照上述色譜條件測定峰面積。以秋水仙堿濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2446183.144X-18495.7333 (r=0.9999)，結(jié)果表明，秋水仙堿量在0.074～0.444mg/ml之間線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度實驗 吸取秋水仙堿對照品溶液10μl，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果秋水仙堿峰面積RSD值為0.15%。

2.2.6 重復(fù)性試驗 取秋水仙藥材6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品，在相同的色譜條件下，連續(xù)進(jìn)6針，進(jìn)樣量10μl，依次測定。結(jié)果供試品中秋水仙的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.04%，RSD為0.73%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 分別于0、4、8、12、24h后進(jìn)樣，共5次，結(jié)果秋水仙峰面積的 RSD值為0.56%。結(jié)果表明，供試品溶液室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收試驗 精密稱取已測定的秋水仙藥材供試品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙堿對照品溶液1ml，因所用秋水仙對照品含量為93.0%，實際加入量為0.2295mg/ml，按供試品溶液制備方法同法操作，進(jìn)樣量10μl。結(jié)果秋水仙堿平均回收率為103.57%，RSD為4.58%。

2.2.9 專屬性試驗 將制得的供試品溶液、空白溶液和秋水仙堿對照品溶液，依次進(jìn)樣，結(jié)果：空白溶液不干擾供試品中秋水仙堿的含量測定。

表1 秋水仙藥材中秋水仙堿的含量測定結(jié)果(n=2)

2.2.10 供試品測定 取不同產(chǎn)地、不同批次的秋水仙藥材供試品，按供試品制備方法處理，依次測定(n=10)，結(jié)果見表1。

根據(jù)測定結(jié)果，秋水仙藥材的含量定為按干燥品計算，含秋水仙堿 (C22H25NO6)不得少于0.008%，納入標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

秋水仙Colchicum autumnale L．的干燥鱗莖做為維吾爾常用藥材，一直被用來治療關(guān)節(jié)骨痛，肝炎，黃疸等疾病。秋水仙藥材中秋水仙堿的含量測定也曾有文章報導(dǎo)過，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含測方法都較為繁復(fù)。本文使用的含測方法，用乙醇做提取溶劑，無毒性，操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于秋水仙藥材的質(zhì)量控制。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會．衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊[S]．烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:721．

[2]劉勇民．維吾爾藥志下冊[M]．烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：588-592．

[3]何紅平．秋水仙化學(xué)成分研究[J]．化學(xué)研究與應(yīng)用，1999，11(5)：509-510．

[4]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會編．中華本草(維吾爾藥卷)[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005：281-283．

國家藥品(維藥)標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題(2010-777)。

劉偉新(1964-)，女,滿族，副主任藥師，主要從事中藥、民族藥檢驗及研究。

R284.1

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1007-8517(2014)17-0010-02

2014.07.10)