祛瘀通脈湯對家兔DVT同型半胱氨酸的影響

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；2.廣東省陽江市中醫(yī)院，廣東 陽江 529500

祛瘀通脈湯對家兔DVT同型半胱氨酸的影響

藍丹純1廖榮臻2

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；2.廣東省陽江市中醫(yī)院，廣東 陽江 529500

目的觀察祛瘀通脈湯對家兔深靜脈血栓同型半胱氨酸的影響。方法通過結(jié)扎家兔股靜脈造成深靜脈血栓模型，分為A組為祛瘀通脈湯組、B組為血塞通組、C組為空白對照組，D組正常組，觀察干預(yù)后，家兔同型半胱氨酸及血管阻塞程度的變化。結(jié)果A、B、C三組間同型半胱氨酸濃度無差異。三組白兔同型半胱氨酸各指標均數(shù)與D組同型半胱氨酸各指標均數(shù)比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。造模后第7天、14天，A、B兩組同型半胱氨酸各指標均數(shù)與C組各均數(shù)比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。A、B兩組間的兩兩比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。三組均有血栓形成，且用藥干預(yù)組2級以上血栓發(fā)生率均明顯低于空白對照組。結(jié)論祛瘀通脈湯顯著降低血液中同型半胱氨酸濃度，抑制靜脈血栓形成。

祛瘀通脈湯；同型半胱氨酸；血栓；動物實驗

深靜脈血栓形成(deep venous thrombosis，DVT)是一種嚴重的骨科術(shù)后并發(fā)癥。隨著骨科內(nèi)固定術(shù)以及膝關(guān)節(jié)置換術(shù)、人工髖關(guān)節(jié)的廣發(fā)開展，骨科術(shù)后DVT的發(fā)生率逐漸增高。DVT并發(fā)癥急性期有肺栓塞等，而慢性期可能遺留血栓形成后綜合征。前者可能導(dǎo)致DVT患者截肢，同時也是DVT患者的主要死亡原因之一；后者則可導(dǎo)致患者患肢處于失去功能狀態(tài)，嚴重影響患者生活質(zhì)量。因此，防治骨科術(shù)后DVT發(fā)生越來越受到重視。當前DVT防治措施以機械性治療、抗凝溶栓及手術(shù)治療為主，但存在風險大、費用高等不利因素。近年來，許多學(xué)者采用中醫(yī)藥防治DVT，取得一定的療效。此外，許多學(xué)者通過臨床病例統(tǒng)計報道及實驗室相關(guān)研究表明DVT患者中同型半胱氨酸(homo-cysteine，Hcy)與深靜脈血栓形成有密切關(guān)系，兩者相互影響，存在協(xié)同作用。祛瘀通脈湯是黃有榮教授臨床防治下肢骨折術(shù)后DVT的經(jīng)驗方，臨床療效好。試驗通過探討祛瘀通脈湯對兔DVT的影響，以期評價祛瘀通脈湯對DVT的防治效果，為治療DVT提供新的視野，為推動中醫(yī)藥治療DVT的機理研究和臨床應(yīng)用提供進一步實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 40只健康大白兔，體重(2.5±0.5)kg，雌雄各半。單籠飼養(yǎng)，期間給兔子自由飲水，顆粒飼料，兔舍室溫約25℃，相對濕度65%RH，保持通風良好。實驗用兔及飼料均購于廣西中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。

1.2 試藥及儀器

1.2.1 藥物 祛瘀通脈湯(丹參20g，川芎10g，當歸15g，丹皮10g，牛膝15g，赤芍15g，黃芪20g，甘草5g)，康美藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。由廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院煎藥機濃煎并真空包裝待用。血塞通片購自云南維和藥業(yè)股份有限公司。將血塞通片按1.76mg/ml溶于蒸餾水中制成溶液待用。

1.2.2 試劑 同型半胱氨酸檢測試劑盒，北京九強生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2.3 儀器 7600全自動生化分析儀，日本株式會社日立制作所制造；ZMN-2802全電腦自動組織染色機；ZMN-7803自動組織包埋機，常州市華利電子公司生產(chǎn)；MOOEL DSU-N組織標本快速處理儀，中科集團提供；TS-12H 生物組織自動脫水機，孝感市電子儀器廠制造；SHAN DON全自動切片機；OLYMPUS光學(xué)顯微鏡。

1.3 模型制備及分組 造模前1天，全部兔禁食12h，隨機抽取10只兔子，作為D組(正常對照組)，取空腹靜脈血5ml，做同型半胱氨酸檢測。采血后予以自由飲水及顆粒飼料喂養(yǎng)，并于第二天參照王輝等[1]的下肢深靜脈血栓動物模型的制備方法建立兔左后肢股靜脈結(jié)扎DVT模型：取30只大白兔耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉，按1ml/kg體重進行麻醉。麻醉顯效后，取仰臥位，四肢外展固定于兔架手術(shù)臺上。在腹股溝韌帶下約1cm，捫及股動脈搏動處，沿股動靜脈走向切開皮膚約2cm，逐層分離出股動靜脈，并用1#線結(jié)扎股靜脈。生理鹽水沖洗術(shù)口，逐層縫合皮下及皮膚。

將模型白兔隨機分A、B、C三組：A組為祛瘀通脈湯組、B組為血塞通組、C組為空白對照組。每組10只。予以自由飲水，顆粒飼料喂養(yǎng)，均不用抗生素。

1.4 灌胃及取材 造模后第2d開始給藥，按10ml/kg體重灌胃，每日1次。A組：給予祛瘀通脈湯煎劑濃縮液，按10ml/kg灌胃；B組：給予血塞通溶液，按17.6mg/kg灌胃；C組：給予等量蒸餾水。于造模后第2d、第7d及第14d清晨取三組兔空腹靜脈血5ml，做同型半胱氨酸檢測。并于造模后第14d采血后麻醉，于血栓發(fā)生明顯處結(jié)扎近端及遠端并切取股靜脈，標記近遠端，置于10%福爾馬林液中固定48h。

1.5 指標觀測

1.5.1 同型半胱氨酸檢測 采血前兔子均禁食12h，并于清晨經(jīng)兔子耳緣靜脈采空腹血5ml，置于分好組并做好標記的血生化真空采血管中，豎直擺放，并于采血后2h內(nèi)送廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院檢驗科做同型半胱氨酸檢測，記錄檢測結(jié)果。

1.5.2 病理切片制作 取出的股靜脈經(jīng)過水洗、脫水、媒浸后，用自動組織包埋機石蠟包埋后切片，并自動組織染色機行HE染色，制成切片在100倍光鏡下觀察有無血栓形成。根據(jù)組織學(xué)檢查血栓分級評價標準，由病理科專業(yè)人員進行評定及記錄。血栓發(fā)生不確定的，取遠端、中間、近端三點作切片，以血栓明顯的納入統(tǒng)計。

1.5.3 組織學(xué)檢查血栓分級評價標準[2]根據(jù)血栓對血管的阻塞程度分為4級：0級為血管無血栓；1級為血管阻塞<50%；2級為血管阻塞>50%，但未完全阻塞；3級為血管完全阻塞。

2 結(jié)果與分析

2.1 兔子存活情況 兔子左后肢股靜脈結(jié)扎DVT模型造模成功率100%；實驗期間，A組：造模后第4d，死亡1只，B組：造模后第3d，灌胃時死亡1只，C組：于造模后第6d，死亡1只。

2.2 對同型半胱氨酸的影響

表1 造模后第2天同型半胱氨酸結(jié)果±s)

注：與D組比較，*P<0.05。

表2 造模后第7天同型半胱氨酸結(jié)果±s)

注：與C組比較，*P<0.05。

表3 造模后第14天三組白兔同型半胱氨酸結(jié)果±s)

注：與C組比較，*P<0.05。

2.3 光鏡觀察血栓形成結(jié)果 光鏡觀察各組左股靜脈血栓發(fā)生結(jié)果見表4，可見三組均有血栓形成，本實驗兔子左肢股靜脈結(jié)扎DVT模型造模成功率100%。且用藥干預(yù)組2級以上血栓發(fā)生率均明顯低于模型組，說明祛瘀通脈湯與血塞通均具有防治DVT的作用。

表4 光鏡下觀察各組深靜脈血栓發(fā)生結(jié)果

3 討論

造模后第2d，根據(jù)統(tǒng)計學(xué)結(jié)果可以說明A、B、C三組間同型半胱氨酸濃度無差異。三組白兔同型半胱氨酸各指標均數(shù)與D組同型半胱氨酸各指標均數(shù)比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明造模后第2d三組均處于DVT造模后的高同型半胱氨酸血癥狀態(tài)且各組間無明顯差異。造模后第7d、14d，A、B兩組同型半胱氨酸各指標均數(shù)與C組各均數(shù)比較有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明祛瘀通脈湯用藥組及血塞通用藥組均能顯著降低血液中同型半胱氨酸濃度。A、B兩組間的兩兩比較均無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明祛瘀通脈湯用藥組及血塞通用藥組在降低血液中同型半胱氨酸濃度方面無顯著差異，祛瘀通脈湯與血塞通具有同樣的改善高同型半胱氨酸血癥的作用。祛瘀通脈湯為黃有榮教授臨床防治下肢骨折術(shù)后DVT經(jīng)驗方。丹參具有活血祛瘀、調(diào)經(jīng)止痛、涼血消癰等功效，研究表明，丹參中的丹參素能明顯抗體外血栓形成，抑制血小板的增殖。楊鐵虹等[3]通過分析當歸多糖與硫酸酯抗凝血的過程中，發(fā)現(xiàn)其具有雙向性調(diào)節(jié)作用，既具有抗凝血功能，又具有促凝血功能。川芎具有活血祛瘀、行氣開郁、祛風止痛等功效。牡丹皮、赤芍等都具有活血祛瘀的功效。牛膝具有改善血液流變學(xué)、抗凝血等功效。綜上所述，祛瘀通脈湯具有明顯的活血通絡(luò)功效，可減少血栓造成的損傷。

近年來，中醫(yī)藥防治下肢深靜脈血栓形成的實驗研究取得了很大的進展，各家從不同角度，不同觀測指標進行觀察，為中醫(yī)藥防治下肢深靜脈血栓提供了客觀依據(jù)。本實驗通過探討祛瘀通脈湯對兔結(jié)扎股靜脈DVT模型的影響，結(jié)果可見祛瘀通脈湯在防治DVT方面與血塞通均有較好的療效，為中醫(yī)藥結(jié)合現(xiàn)在代科技手段防治DVT積累可以借鑒的研究思路與方法。

[1] 王輝，王嶺，陳江浩，等．下肢深靜脈血栓模型制備更接近臨床血栓形成的可行性研究[J]．中國臨床康復(fù)，2003,7(14)：2001-2002．

[2] 王鴻利，王學(xué)鋒．血栓病臨床新技術(shù)[M]．北京:人民軍醫(yī)出版社，2003. 25-26．

[3] 楊鐵虹，商澎，梅其炳．當歸多糖硫酸酯對凝血和血小板聚集的作用[J]．中草藥，2002，33(11)：1011-1013．

藍丹純(1988-)，2012級碩士研究生，E-mail: 644173677@qq.com

R285.5

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1007-8517(2014)14-0009-02

2014.05.25)