氣相色譜法測定草果揮發(fā)油及其桉油精的含量

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1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省優(yōu)勢中藥材規(guī)范化種植工程研究中心，云南 昆明 650201

氣相色譜法測定草果揮發(fā)油及其桉油精的含量

沈勇1吳靜1熊嬌1呂丹1謝世清2楊生超2字淑慧1楊志清1,2*

1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省優(yōu)勢中藥材規(guī)范化種植工程研究中心，云南 昆明 650201

目的檢測云南不同產(chǎn)區(qū)草果揮發(fā)油的含量，并建立測定草果揮發(fā)油中桉油精含量的氣相色譜方法。方法采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行揮發(fā)油的提取，用GC法桉油精進(jìn)行含量測定。結(jié)果不同產(chǎn)區(qū)草果揮發(fā)油及桉油精含量差別較大；桉油精在0.381 1～3.811 5 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r>0.999 5)，平均回收率(n=6)為99.53%，RSD=1.28%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確，分離快速，可為草果揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

草果；揮發(fā)油；桉油精；氣相色譜

草果為姜科豆蔻屬植物草果Amomumtaso-koCrevost et Lemaire的干燥成熟果實[1]，主產(chǎn)于云南、廣西、貴州等省區(qū)[2]，具有燥濕祛寒，除痰截瘧的功效。草果是藥食兩用大宗中藥材，其作為香料的用量要遠(yuǎn)大于藥用。2010年版《中國藥典》把測定揮發(fā)油總量作為評價草果品質(zhì)的重要指標(biāo)，其揮發(fā)油主要有α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、香葉醇、檸檬醛、反-2-十二烯醛等[3、4]。其中桉油精含量較高并具有解熱、消炎、抗菌、防腐、平喘及鎮(zhèn)痛等作用，常作為藥品和日化產(chǎn)品的原料使用。目前草果揮發(fā)油的研究多集中于化學(xué)成分的鑒別[4-6]和指紋圖譜[7、8]，對不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)油的含量及其成分定量分析相對較少。本試驗對產(chǎn)于云南不同地區(qū)的草果進(jìn)行揮發(fā)油含量的檢測，同時建立了測定其揮發(fā)油中桉油精的氣相色譜法(GC)，具有簡便、準(zhǔn)確、快速分離的特點，為草果揮發(fā)油成分的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 6890毛細(xì)管氣相色譜儀，HP CORE色譜工作站，氫火焰離子檢測器(FID),梅特勒托利多AE240型電子天平(瑞士Mettler Toledo 公司)，中藥高速粉碎機(jī)(浙江永歷制藥機(jī)械有限公司)。桉油精對照品(批號：110788-201004，上海同田生物技術(shù)有限公司)；所用試劑均為分析純。

草果樣品采自云南省，經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所雷立功副研究員鑒定為姜科豆蔻屬植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemair.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 毛細(xì)管柱Agilent 19091N-213 HP-INNOWAX Polyethlene Glycol(30.0 mm×320 μm,0.50 μm) ，F(xiàn)ID檢測器；進(jìn)樣口溫度200℃；檢測器溫度250℃；柱溫以60℃為起始溫度，保持4 min，以5℃/min的速率升至180℃；不分流，進(jìn)樣量1 μl。對照品及草果揮發(fā)油樣品溶液色譜圖見圖1。桉油精色譜峰的保留時間為10.45 min。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取桉油精適量，用正己烷制成每1 ml含桉油精38.1 mg的溶液作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取臨用前粉碎過40目篩的樣品粉末約100 g，精密稱定，按《中國藥典》2010年版(一部)附錄XD甲法[1]提取各樣品的揮發(fā)油，加適量無水硫酸鈉脫水，振搖，靜置，過夜。精密量取脫水后的樣品50 μl于5 ml量瓶中，加正己烷定容至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2”項下桉油精對照品溶液10、20、40、80、100 μl，分置1 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0 μl注入氣相色譜儀。以色譜峰峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=108 3.7X+181.4，r=0.999 8。結(jié)果表明：桉油精進(jìn)樣量在0.381 1～3.811 5 μg之間具有良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1.0 μl，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，桉油精峰面積的RSD為0.26%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液按“2.1”項下色譜條件分別在0，2，4，6，12，24 h后進(jìn)樣測定，桉油精峰面積的RSD為1.42%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批草果藥材粉末6 份，平行稱定，按“2.3”項下方法操作，制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件測定，桉油精的平均含量為 4.831 5 mg·g-1，RSD(n=6)為0.92%。表明方法的重復(fù)性較好。

2.8 回收率試驗 精密稱取桉油精，配成濃度為47.53 mg·ml-1的對照品溶液，取已知含量的同一批草果藥材粉末約50 g，平行試驗6份，精密稱定，分別加入混合對照品溶液5 mL，按“2.3”項下方法制備供試溶液，精密吸取1 μL注入氣相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定。桉油精的平均回收率(n=6)為99.53%，RSD為1.28%。

2.9 樣品含量測定 取不同產(chǎn)地草果藥材粉末約100 g，精密稱定，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，按“2.3”項下制成供試品溶液，依法進(jìn)樣測定，用外標(biāo)法計算桉油精的百分含量。結(jié)果見表1。

表1 5個產(chǎn)區(qū)草果揮發(fā)油及桉油精的含量(n=3)

3 討論

草果為藥食兩用大宗中藥材，2010年版《中國藥典》把測定揮發(fā)油總量作為評價草果品質(zhì)的重要指標(biāo)。本實驗對云南不同產(chǎn)區(qū)草果揮發(fā)油和桉油精的含量分別進(jìn)行檢測，結(jié)果兩項檢測指標(biāo)含量差別較大，紅河和騰沖地區(qū)兩項指標(biāo)含量相對較高。

試驗采用氣相色譜法對草果揮發(fā)油中桉油精的含量進(jìn)行檢測，經(jīng)過方法學(xué)考察，篩選出較佳的實驗參數(shù)，色譜條件簡單，方法可靠，分離效果好，可為草果揮發(fā)油的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:222-223.

[2]徐國鈞.常用中藥品種整理和研究(第三冊)[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社，1997:217.

[3]趙怡，張國英，肖中華，等.超臨界流體萃取法提取草果揮發(fā)油化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志，2004，39(199):705-706.

[4]林敬明，鄭玉華，許寅超，等.超臨界CO2流體萃取草果揮發(fā)油成分分析[J].中藥材，2000，23(3):145-148.

[5]朱纓，俞迪佳，吳健.草果揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].中國藥業(yè)，2012，21(21):4-5.

[6]趙怡，張國英，肖中華，等.超臨界CO2流體萃取法提取草果揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2004，39(9):705-706.

[7]丁艷霞，崔秀明，李雪玲，等.草果揮發(fā)油的GC-MS指紋圖譜[J].光譜實驗室，2006，23(1):81-84.

[8]吳惠勤，黃曉蘭，黃芳，等.草果揮發(fā)油的氣相色譜-質(zhì)譜指紋圖譜[J].質(zhì)譜學(xué)報，2004，25(2):92-95.

DeterminationofvolatileoilandeucalyptolinAmomumtaso-ko

SHEN Yong1,WU Jing1,XIONG Jiao1,LV Dan1,XIE Shi-qing2,YANG Sheng-chao2,YANG Zhi-qing1,2

1.College of Agriculture and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201,China;2.Yunnan Research Center on Good Agriculture Practice for Dominant Chinese Medicinal Meterials, Kunming 650201,China

ObjectiveTo determine the content of volatile oil and establish a GC method for the determination of eucalyptol in volatile oil from Amomum taso-ko Crevost et Lemaire in different regions of Yunnan province.MethodsThe essential oil was extracted by steam distillation. The content of eucalyptol were measured by GC.ResultsThere is much difference in the content of volatile oil and eucalyptol from Amomum taso-ko in different regions of Yunnan province. Linearity of each standard was established in the concentration range of 0.381 1～3.811 5 μg with correlation coefficient r>0.999 5.Average recoveries (n=6) of eucalyptol were 99.53% with a RSD of 1.28%.ConclusionThe developed method is simple, accurate, well separated and quick, which can be used as quantitative analysis of Amomum taso-ko Crevost et Lemaire.

Amomum taso-ko;volatile oil;eucalyptol;GC

云南省科技計劃項目(編號：2011CG015)；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)高原山地作物可持續(xù)生產(chǎn)系統(tǒng)研究省創(chuàng)新團(tuán)隊“高原山地特色作物種質(zhì)創(chuàng)新及利用”(編號：云科人發(fā)[2012]18號)。

沈勇(1976-)，男，云南大理人，講師，博士，主要從事藥物化學(xué)和藥物開發(fā)研究。 E-mail：pharmsy@sina.com

楊志清(1968-)，女，云南普洱人，副教授，碩士，主要從事藥用植物栽培與資源評價研究。 E-mail：yzq1468@126.com

R284.1

A

1007-8517(2014)11-0014-02

2014.04.06)