取卵術(shù)中卵泡沖洗對IVF-ET的安全性分析

暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第五醫(yī)院廣東省清遠市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科， 廣東 清遠 511518

取卵術(shù)中卵泡沖洗對IVF-ET的安全性分析

王秋香冼英杰陳彩蓉

暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第五醫(yī)院廣東省清遠市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科， 廣東 清遠 511518

目的探討取卵術(shù)中卵泡沖洗的安全性、卵泡沖洗的適宜次數(shù)。方法選擇因輸卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據(jù)其在取卵過程中經(jīng)過卵泡沖洗的次數(shù)分為4組，A組為無需卵泡沖洗即獲得的卵母細胞，B組為經(jīng)過1次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，C組為經(jīng)過2次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，D組為經(jīng)過3次以上(包括3次)卵泡沖洗獲得的卵母細胞，觀察四組卵母細胞的情況。結(jié)果A組、B組、C組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及可用胚胎數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。D組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及可用胚胎數(shù)較前3組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論適宜的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發(fā)育情況，是安全的。但反復(fù)的卵泡沖洗(≥3次以上)所獲得胚胎質(zhì)量差，建議將卵泡沖洗次數(shù)控制在3次以下。

卵泡沖洗；IVF-ET；安全性

在輔助生殖技術(shù)中，取卵術(shù)是體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的主要技術(shù)之一，取卵是否成功，能否獲得卵子是關(guān)鍵。有研究認為取卵術(shù)中使用雙腔取卵針進行卵泡沖洗可以直接提高獲卵率，不影響卵子受精、卵裂及胚胎發(fā)育情況，并且顯著改善妊娠結(jié)局[1-3]。本研究選擇因輸卵管因素不孕而接受IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據(jù)其在取卵過程中經(jīng)過卵泡沖洗的次數(shù)分為4組，觀察4組卵母細胞的情況。從而探討取卵術(shù)中卵泡沖洗的安全性、卵泡沖洗的適宜次數(shù).

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年12月至2013年12月因不孕癥在清遠市人民醫(yī)院生殖中心接受常規(guī)IVF-ET助孕治療的不孕癥患者60例為研究對象。納入標準： ①年齡≤35 歲；②基礎(chǔ)FSH<10IU/L；③因輸卵管因素導(dǎo)致不孕而接受IVF-ET；④子宮正常；⑤既往無子宮手術(shù)史；排除標準：①年齡>35歲；②高PRL血癥或合并甲狀腺功能異常、卵巢腫瘤等全身系統(tǒng)疾??；③先天性子宮畸形；④既往有子宮手術(shù)史。均采用黃體中期短效長方案行控制性超促排卵，將60例患者所獲得的全部卵母細胞根據(jù)其在取卵過程中經(jīng)過卵泡沖洗的次數(shù)而分為4組。A組為無需卵泡沖洗即獲得的卵母細胞，B組為經(jīng)過1次卵泡沖洗獲得的卵母細胞，C組為經(jīng)過2次卵泡沖洗獲得的卵母細胞， D組為經(jīng)過3次以上(包括3次)卵泡沖洗獲得的卵母細胞.

1.2 方法

1.2.1 超促排卵治療 所有患者均采取黃體中期短效長方案降調(diào)節(jié)治療，于前次月經(jīng)周期的黃體中期開始使用短效促性腺激素釋放激素激動劑達菲林針劑0.03-0.1 mg /d至HCG日，注射GnRH-a后10-15天經(jīng)證實達到垂體降調(diào)節(jié)標準后，使用重組FSH(果納芬)或結(jié)合尿促性腺激素刺激卵泡發(fā)育。當1個優(yōu)勢卵泡直徑≥19mm，或2-3個優(yōu)勢卵泡≥17mm，血E2達到平均每個優(yōu)勢卵泡(≥14mm卵泡)250-300pg/ml時，當晚肌肉注射HCG 5000-10000IU。注射HCG 后36-38h 左右在陰道B超引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺取卵,穿刺HCG日≥12mm的卵泡。

1.2.2 取卵及卵泡沖洗方法：所有病例均空腹，于取卵前靜脈全麻鎮(zhèn)痛，患者取膀胱截石位，常規(guī)消毒鋪巾、放入陰道探頭及穿刺架，找到一側(cè)卵巢后，再尋找穿刺針與卵泡間最佳進針位置，手術(shù)者將穿刺針快速刺入卵泡，穿刺針用COOK16G雙腔針，一腔吸取卵子，另一腔供沖洗，啟動吸引器(COOK負壓吸引器)，抽吸壓力為120-130mmHg，使卵泡液吸入15ml試管內(nèi)，當一個卵泡液抽凈后，將抽吸出的卵泡液交與胚胎實驗室技術(shù)員在顯微鏡下查找卵子，若一次抽吸即可獲得卵子則無需沖洗，如果未獲得卵子，則從雙腔取卵針的沖洗腔注入卵泡沖洗液來沖洗，通過用卵泡沖洗液來反復(fù)沖洗，再反復(fù)抽吸卵泡，直到獲得卵子。沖洗液為卵泡培養(yǎng)液，產(chǎn)品類別G-MOPS PIUS (125ml/瓶)+肝素25ul，瑞典Vitrolife公司生產(chǎn)。一般一次的沖針量約4ml。

1.2.3 卵母細胞收集 將收集的卵泡液或卵泡沖洗液迅速倒入100mm×15mm 培養(yǎng)皿，肉眼初步識別卵冠丘復(fù)合體 (OCCC )， 在體視鏡下證實后轉(zhuǎn)移至撿卵皿中，用G-IVF plus 洗滌后轉(zhuǎn)入受精皿收集。

1.2.4 體外受精 將收集的卵母細胞培養(yǎng)3-6h后取出 ，加入獲能后的精子，加精后將精卵放回37℃、6%CO2濃度的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.5 受精卵裂觀察、胚胎移植 加精后16- 18h觀察受精情況，顯微鏡下見2原核為正常受精，受精后24h開始觀察卵裂情況，在第3天根據(jù)卵裂球數(shù)目、大小 、形狀、均勻程度、有無碎片等對胚胎進行分級，將D3卵裂球數(shù)為6-9的Ⅰ級或Ⅱ級，D1原核評分為Z1或Z2的胚胎評為優(yōu)質(zhì)胚胎，在第3天挑選評分最優(yōu)的胚胎進行胚胎移植。

1.2.6 監(jiān)測內(nèi)容 觀察4組卵母細胞的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計 ，兩組均數(shù)的比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗 ,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組、B組、C組的成熟卵率、受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及可用胚胎數(shù)無顯著性差異。D組成熟卵率、受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及可用胚胎數(shù)較前3組低，有顯著性差異(<0.05)。見下表1。

表1 組卵母細胞受精及胚胎相關(guān)參數(shù)比較

注：與A、B、C組比較,*P<0.05。

3 討論

在體外受精胚胎移植技術(shù)中，我們的共識是以最小的代價獲取高質(zhì)量的卵母細胞，進而得到高質(zhì)量的胚胎以提高臨床妊娠率。而獲卵困難為體外受精-胚胎移植取卵手術(shù)中較為常見的問題，對于IVF取卵手術(shù)中獲卵困難的女性不孕患者，通過反復(fù)卵泡沖洗可以提高獲卵率。為什么有的成熟卵子要通過沖洗才可以獲得？原因在于成熟卵泡發(fā)生了一系列形態(tài)、細胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的變化。FSH的濃度升高使顆粒細胞發(fā)生脂肪變性，卵泡液侵入到卵丘細胞之間，導(dǎo)致卵丘細胞之間失去粘連而彼此分散開來，最終使卵母細胞連同放射冠從卵泡壁上游離出來，懸浮于卵泡液中，有利于卵母細胞在卵泡壁破裂時隨卵泡液一起流出[4]。

本研究結(jié)果顯示A、B、C組3組的成熟卵率、受精率、卵裂率、可用胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明≤2次的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發(fā)育情況，是安全的。

Hussein E[5]通過對陰道超聲下卵泡穿刺抽吸與卵泡沖洗抽吸所回收的卵母細胞活力、受精后的分裂率等進行比較，認為在陰道超聲引導(dǎo)下通過卵泡穿刺和4ml的培養(yǎng)液沖洗所得卵母細胞的回收率及其質(zhì)量是適合于進行IVF的，沒必要進行反復(fù)的卵泡沖洗。本研究結(jié)果也顯示D組(經(jīng)過≥3次的卵泡沖洗獲得的卵母細胞 )的成熟卵率、受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及可用胚胎數(shù)較前3組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(<0.05)。其原因可能為①獲卵困難可能預(yù)示卵的質(zhì)量，胚胎質(zhì)量下降，從而導(dǎo)致較差的IVF實驗室結(jié)局，進行卵泡沖洗獲得了一部分成熟度低的卵子，雖然在一定程度上提高了獲卵困難的獲卵數(shù)，但不能改變其卵子質(zhì)量差的本質(zhì)。②反復(fù)的卵泡沖洗延長了卵母細胞與外界環(huán)境的接觸，卵子對溫度、pH及滲透壓非常敏感，輕微的改變即引起不可逆的改變。

由此認為適宜的卵泡沖洗不影響卵子受精、卵裂及胚胎發(fā)育情況，是安全的。但反復(fù)的卵泡沖洗(≥3次以上)所獲得未成熟卵增多，胚胎質(zhì)量差，因此沒必要進行反復(fù)的卵泡沖洗，建議將卵泡沖洗次數(shù)控制在3次以下。

[1]陳娟. 卵泡沖洗對來曲唑促排卵方案患者妊娠結(jié)局的影響[J].鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2011,(2)：160-162.

[2]陳娟.來曲唑促排卵方案取卵術(shù)中卵泡沖洗安全性分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2011,19(11)：113-114.

[3]舒黎.雙腔取卵針患者IVF/ICSI-ET結(jié)局分析[J].江蘇醫(yī)學(xué),2010,(24)：2895-2897.

[4]李媛.人類輔助生殖技術(shù)[M].北京：科學(xué)出版社， 2008, 11,93.

[5]Hussein E ，Br J Obetet Gynaecol.1992：814-844.

廣東省清遠市2013年科技計劃項目，項目編號44011120133183k。

王秋香,女,本科,主治醫(yī)師，研究方向：婦科生殖內(nèi)分泌。

R713.7

A

1007-8517(2014)11-0084-02

2014.04.10)