藏藥仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療白血病的實驗研究

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1.山東省淄博市淄川區(qū)醫(yī)院，山東 淄博 255100；2.山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101

藏藥仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療白血病的實驗研究

吳洪革1邵成雷2付素心2*

1.山東省淄博市淄川區(qū)醫(yī)院，山東 淄博 255100；2.山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101

目的觀察藏藥仁青常覺對抗腫瘤化療所致的免疫抑制。方法通過仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的藥效學(xué)實驗研究，比較各實驗組IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等細胞因子的變化。結(jié)果仁青常覺可以調(diào)節(jié)T細胞亞群比例及促進IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等細胞因子的分泌，且呈濃度依賴性。結(jié)論仁青常覺與化療藥物同用，能提高機體免疫，有助于化療的完成。

仁青常覺；環(huán)磷酰胺；白血病；實驗研究

仁青常覺系藏族驗方，成方于公元八世紀(jì)，具有一千多年的應(yīng)用歷史，現(xiàn)收載于《中國藥典》(2010版)一部。仁青常覺依據(jù)藏醫(yī)藥學(xué)原理，由珍珠、朱砂、檀香、降香、沉香、訶子、牛黃、人工麝香、西紅花等精選的160余味純天然、珍貴、稀有藏藥材組成，有“百病一藥”、“藥之珍寶”等美稱。臨床上廣泛用于腫瘤、胃腸潰瘍、各種中毒癥、缺鐵性貧血等，特別對萎縮性胃炎、久治不愈的頑固性疾病等有特殊療效。能提高機體免疫力和抗應(yīng)激能力，減輕放化療的毒副反應(yīng)[1]。本文通過環(huán)磷酰胺聯(lián)用仁青常覺治療L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的藥效學(xué)實驗，觀察仁青常覺對抗腫瘤化療所致的免疫抑制，對有效保證化療的完成，具有積極的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種一級小鼠，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，雌雄各半，體重18～22g，合格證號：SCXK(魯)20080002。

1.1.2 主要試劑和藥品 環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)；標(biāo)準(zhǔn)重組人白介素-2(北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司生產(chǎn))；Yackl及IL-2依賴細胞株CTLL(中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院細胞資源中心提供)；RPMII640細胞培養(yǎng)液及胎牛血清(華美生物工程公司生產(chǎn))；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、十二烷基磺酸鈉及刀豆球蛋白、二甲基甲酰胺均為Sigma公司生產(chǎn)；仁青常覺(金訶藏藥股份有限公司生產(chǎn))。

1.1.3 儀器 加樣器、CO2培養(yǎng)箱、ELX-800酶標(biāo)儀，均由美國Bio-Tek公司生產(chǎn)；96孔平底細胞培養(yǎng)板、Epics流式細胞儀，由美國Beckman公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對L615白血病小鼠的影響 取健康昆明種小鼠120只，雌雄各半，按體重隨機分為6組，每組20只，即正常對照組、模型對照組、化療組、化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組。除正常對照組外，各組小鼠接種L615白血病細胞0.2ml(在無菌條件下取L615白血病小鼠脾制成25%生理鹽水細胞懸液，小鼠皮下接種)，于接種后第3d給藥，化療組腹腔注射環(huán)磷酰胺200mg/(kg·d)；化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組和化療加仁青常覺高劑量組除注射環(huán)磷酰胺外，分別灌胃給予仁青常覺75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg，上、下午各1次；正常對照組和模型對照組腹腔注射生理鹽水0.2ml/(只·d)，同時上、下午各灌胃相同體積的生理鹽水。于第5天每組取10只動物處死，取脾臟勻漿，流式細胞儀測定T細胞亞群，酶聯(lián)免疫法測定IL-2，IL-6，IFN-γ活性，余下各動物進行生存期觀察。

1.2.2 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對P388白血病小鼠的影響 取健康昆明種小鼠48只，接體重隨機分為6組，每組8只，即正常對照組、模型對照組、化療組、化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組。除正常對照組外，各組小鼠接種P388淋巴細胞白血病瘤株(接種方法[2]：取腹水型P388白血病小鼠，脫頸椎處死，腹部消毒，抽吸腹水，加入生理鹽水混勻，顯微鏡下調(diào)整細胞濃度為1.5×107個/ml，每只小鼠右腋下注射0.2ml)?；熃M腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/(kg·d)，連續(xù)6d；化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組除注射環(huán)磷酰胺外，分別灌胃給予仁青常覺150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg，連續(xù)灌胃給藥14d;正常對照組和模型對照組給予相同體積的生理鹽水。于第15天脫頸椎處死，在無菌條件下取脾臟，勻漿，測定NKC、IL-2活性。

2 結(jié)果

2.1 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對L615白血病小鼠的影響

2.1.1 對生存期的影響 實驗結(jié)果表明，與模型對照組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組生存期明顯延長，差異具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組生存期亦明顯延長，差異具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 各實驗組生存期比較

注：與模型對照組比較，*P<0.05；與化療組比較，△P<0.05。

2.1.2 對T細胞亞群的影響 實驗結(jié)果表明，與模型對照組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組CD3+、CD4+明顯增加，CD8+明顯減少，CD4/CD8比值明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組亦表現(xiàn)出CD3+、CD4+明顯增加，CD8+明顯減少，CD4/CD8比值明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 對T細胞亞群的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，△P<0.05；與化療組比較，▲P<0.05。

2.1.3 對IL-2，IL-6，IFN-γ活性的影響 與模型組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組IL-6、IFN-γ明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組IL-2、IL-6、IFN-γ明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見表3。

表3 對IL-2，IL-6，IFN-γ活性的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，△P<0.05；與化療組比較，▲P<0.05。

2.2 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對P388白血病小鼠的影響 實驗結(jié)果表明，與模型組比較，化療組NKC及IL-2活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與化療組比較，化療加仁青常覺中、高劑量組IL-2活性明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表4

表4 對NKC及IL-2活性的影響

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與化療組比較，#P<0.05，##P<0.01。

9 心葉琉璃草 C. triste Diels.資源分布

中國特有植物。分布于云南、四川。生于海拔2500～3100米的陰濕山坡及松林下。

10 綠花琉璃草 C. viridiflorum Pall.資源分布

國內(nèi)：分布于新疆；國外：分布于蘇聯(lián)及西伯利亞。生于海拔700～1700米的灌木林緣。別名：綠花倒提壺。

11 西南琉璃草 C. wallichii G. Don.資源分布

國內(nèi)：分布于云南、四川、西藏及甘肅；國外：分布于阿富汗、巴基斯坦、克什米爾地區(qū)及印度；生于海拔1300～3600米的山坡草地、荒野路邊及密林陰濕處。

12 倒鉤琉璃草(為西南琉璃草的變種)C. wallichii G. Don var. Glochidiatum.資源分布

國內(nèi)：分布于西藏、云南、四川、甘肅及青海；國外：分布于阿富汗、巴基斯坦、印度、緬甸。 生于海拔1800～4000米的林緣草坡。別名：倒鉤西南琉璃草、稀刺琉璃草、粘粘草。

13 琉璃草/錫蘭琉璃草 C. zeylanicum (Vahl) Thunb.資源分布

國內(nèi)：分布于陜西、河南、甘肅、安徽、湖北、廣東、廣西、貴州、云南、四川、西藏及臺灣等地[5]。國外：分布于阿富汗、巴基斯坦、印度、菲律賓、馬來西亞、新幾內(nèi)亞及日本。生于海拔300～3040米林間草地、向陽山坡及路邊。別名狗屎花、藍布裙、攔路虎、鐵鏈子、貼骨散、牛舌頭草、綠花菜。以根和葉入藥，有清熱利濕、活調(diào)經(jīng)之功效，主治肝炎、月經(jīng)不調(diào)、水腫，外用治瘡瘕癰腫、毒蛇咬傷、跌打損傷、骨折。葉可止血。

14 云南倒提壺兩新變型

紅花倒提壺C.amabileStapfetDrummf．Ruberum，分布于云南大理下關(guān)、洱源、上關(guān)、漾濞等地。生于海拔2100米以上的山坡草地。白花倒提壺C.amabileStapfetDrummf．1eucanthum，分布于云南大理蒼山、永平、彌渡、巍山、洱源、鶴慶等地。生于海拔2200米以上的陰濕地帶。全草入藥，治療白帶和淋證。

綜上所述，云南、貴州、四川為該植物的主要分布地區(qū)，分布著倒提壺的不同品種，為倒提壺的進一步開發(fā)研究提供了豐富的資源。

[1]劉玉蘭.中國琉璃草屬植物[J].甘肅師大學(xué)報(自然科學(xué)版)，1979，(2)：64-72.

[2]中國科學(xué)院中國植物志編委會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1989.

[3]劉玉蘭.琉璃草屬植物之新種[J].植物分類學(xué)報，1981，19(4):519-520.

[4]董曉東,趙宏.云南倒提壺兩新變型[J].植物研究，1997，17(2)：141-142.

[5]常章富．野菜療法[M]．長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，2001:36-37.

ExperimentalstudyofRenqingchangjuecombinedwithcyclophosphamideontreatmentforleukemia

WU Hong-ge1SHAO Cheng-lei2FU Su-xin2

(1.The hospital of Zichuan District in zibo,ShanDong Province ,zibo 255100, china;2.Shandong Arura Medicine Research And Develop Corportion, ShanDong Province , Jinan 250101, china)

Objectiveto observe Renqingchangjue against chemotherapy-induced immune suppression.MethodsThrough experimental studies of Renqingchangjue in combination with cyclophosphamide on L615leukemia mice and P388leukemia mice ,comparing cytokines changes of IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC.ResultsRenqingchangjue can regulate the percentage of T cell subgroup and promote the secretion of cytokines such as IL - 2, IL - 6, IFN - gamma, NKC, etc.ConclusionRenqingchangjue combined with chemotherapy drugs,can improve the body immunity,helps chemotherapy completed.

Renqingchangjue; cyclophosphamide; leukemia; Experimental study

吳洪革，淄博市淄川區(qū)醫(yī)院，主管藥師，研究方向：藥學(xué)。

付素心，E-mail：FSX351@163.com

R285.5

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1007-8517(2014)15-0021-03

2014.05.27)