正交試驗(yàn)法優(yōu)選軟脈靈顆粒提取工藝

1.福建省漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建 漳州 363000；2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

正交試驗(yàn)法優(yōu)選軟脈靈顆粒提取工藝

鄭美娟1王瓊珺1胡娟2

1.福建省漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建 漳州 363000；2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

目的優(yōu)選軟脈靈顆粒最佳提取工藝條件。方法以各投料藥材干粉得率及干粉的指標(biāo)性成分丹酚酸B含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法篩選工藝條件。結(jié)果優(yōu)選工藝為16味藥材按一定比例混合，首先加8倍量水浸泡60min，沸后煎煮1 h；再分別加4、3倍量水，沸后各煎煮0.5h。結(jié)論優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、合理可行。

軟脈靈顆粒；提取工藝；正交試驗(yàn)；丹酚酸B

軟脈靈是預(yù)防與治療動(dòng)脈粥樣硬化的純中藥復(fù)方制劑，由熟地黃、五味子、枸杞、懷牛膝、茯苓、制何首烏、白芍、柏子仁、遠(yuǎn)志、炙黃芪、陳皮、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、丹參、人參等16味中藥制成，具有滋補(bǔ)肝腎、益氣活血的功效。臨床應(yīng)用多年未見明顯的毒副作用，療效確切，是腦動(dòng)脈硬化、中風(fēng)及冠心病等心腦血管疾病的理想藥物[1、2]。然此方目前只有口服液劑型，存在服用周期長(zhǎng)、口感欠佳、攜帶不便、保質(zhì)期短等缺陷，難于適應(yīng)現(xiàn)代社會(huì)防治疾病的需要。為給患者提供更加有效、方便的口服藥物，筆者通過制劑工藝研究，在給藥途徑不變并保持原有藥效的前提下，將口服液改進(jìn)為顆粒劑，以提高其制備工藝水平和科技含量。參照原軟脈靈口服液的提取過程，擬采用水提法，為使制劑工藝更加合理，在提取過程中采用L9(34)正交試驗(yàn)表，以丹酚酸B含量和干浸膏得率為考察指標(biāo)，綜合考察加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)等因素對(duì)軟脈靈顆粒劑提取效果的影響，優(yōu)選最佳提取工藝條件。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010AHT 高效液相色譜儀(包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二級(jí)管陣列檢測(cè)器、Solution 色譜工作站)；FA2104N型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；YB-z減壓真空干燥箱(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)；中藥材粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(寧波瑾瑞儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 熟地黃、五味子、枸杞、 懷牛膝、茯苓、制首烏、白芍、柏子仁、遠(yuǎn)志、炙黃芪、陳皮 淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、丹參、人參等以上藥材經(jīng)漳州市藥品檢驗(yàn)所鑒定為合格藥材。丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)：115939-201109，中國(guó)藥品生物制品檢定所)。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

以各投料藥材的干粉得率及干粉的指標(biāo)性成分丹酚酸B含量為考察指標(biāo)，以加水量、煎煮時(shí)間及煎煮次數(shù)為考察因素，進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)，優(yōu)選最佳的水提取工藝條件。

2.1 干浸膏得率 將藥材切碎過8目篩，按處方比例稱取100.0g置于適宜的容器內(nèi)，浸泡60min，按表1、2所設(shè)計(jì)的方案進(jìn)行各試驗(yàn)的提取，并將提取液趁熱用兩層紗布過濾，合并濾液，濃縮成浸膏狀，置于烘箱內(nèi)60～80℃進(jìn)一步完全干燥，取出稱定重量，按下述公式(式 1)計(jì)算干浸膏得率。試驗(yàn)結(jié)果見表3。

干浸膏得率%=﹝干浸膏重量÷生藥量﹞×100%

(式1)

2.2 含量測(cè)定 丹酚酸B照2010版《中國(guó)藥典》高效液相色譜法(附錄Ⅵ D)測(cè)定。

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶乙腈∶甲酸∶水(30∶10∶1∶59)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.2g，精密稱定，置于適宜的具塞錐形瓶中，精密加75%的甲醇溶液50ml，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用75%的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%的甲醇溶液適量，制成每1ml含有丹酚酸B 0.14mg的溶液，即得。

2.2.4 測(cè)定法 分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品以干燥品計(jì)算，含丹酚酸B(C36H30O16)不得低于3.0%。

2.3 正交實(shí)驗(yàn) 按處方比例稱取熟地黃、枸杞、懷牛膝、茯苓、何首烏、遠(yuǎn)志、黃芪、淫羊藿、丹參等16味藥材飲片共9份。照表1和表2所設(shè)計(jì)的因素水平條件進(jìn)行各試驗(yàn)的提取、濃縮及干燥，并計(jì)算各投料藥材的干粉得率，按上述含量測(cè)定方法測(cè)定各干粉中指標(biāo)性成分丹酚酸B含量，按下述公式(式 2)計(jì)算綜合得分，最后以綜合得分篩選最佳的提取工藝條件。試驗(yàn)結(jié)果見表3。

綜合得分=×[丹酚酸B提取率÷最大值)×0.5+(出膏率×最大值)×0.5]×100[3](式 2)

表1 水提取因素水平表

注：A為藥材投料量的倍數(shù)， B為沸后煎煮時(shí)間。

表1中A、B、C各因素的分配關(guān)系，即各試驗(yàn)的煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間及加水量的關(guān)系，根據(jù)專業(yè)知識(shí)及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)各試驗(yàn)的煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間及加水量的分配關(guān)系，見表2。

表2 煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間和加水量分配關(guān)系表

根據(jù)表2，如果實(shí)驗(yàn)因素水平為A2B2C2，即表示該實(shí)驗(yàn)提取總時(shí)間為2.0h，分2次進(jìn)行提取，第一次加8倍量的水，沸后煎煮1 h；第二次加7倍量水，沸后煎煮1h；其余依此類推。

表3 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 浸膏得率方差分析結(jié)果表

注a：F0.01(2，2)=99，F(xiàn)0.05(2，2)=19.0

2.4 結(jié)果分析 比較表3水提取工藝正交試驗(yàn)的結(jié)果，各列水平情況：第1列A因素K2>K3>K1，第2列B因素K2>K3>K1，第3列C因素K3>K2>K1，所以提取條件A因素取2水平(A2)，B因素取2水平(B2)，C因素取3水平(C3)為優(yōu)。并且由極差數(shù)據(jù)可知RC>RA>RB，說明A、B、C三個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要性為：C>A>B，即首先是煎煮次數(shù)，其次是加水量，最后是煎煮時(shí)間。同時(shí)由方差分析表4可知，煎煮次數(shù)和加水量的P<0.05，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，煎煮時(shí)間P>0.05，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無明顯影響。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，篩選出最佳的提取條件為C3A2B2，其綜合得分為94.83分，即最佳水提取工藝為：16味藥材，取當(dāng)歸、川芎、人參、陳皮、白芍、五味子、柏子仁等七味加適量水，水蒸氣蒸餾，收集餾液，備用；所得藥渣與其余熟地黃等9味混合，首先加8倍量的水浸泡60 min，沸后煎煮1 h；再分別加入4倍、3倍水，沸后各煎煮0.5 h。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方比例稱取藥材，對(duì)上述優(yōu)選的提取工藝條件進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

表5 三批水提取C3A2B2表(n=3)

從表5可知，在優(yōu)選工藝條件下干浸膏得率和丹酚酸B含量的波動(dòng)較小，并且與水提取工藝優(yōu)選的試驗(yàn)結(jié)果基本吻合，,說明經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)選的水提取工藝條件穩(wěn)定，具有良好的重現(xiàn)性和可操作性。

3 討論

3.1 水提取工藝 為了保證軟脈靈顆粒的臨床療效與原口服液一致，在提取工藝的設(shè)計(jì)中，應(yīng)盡可能地保持原口服液的生產(chǎn)加工工藝，以水為溶劑的煎煮提取工藝與原口服液的提取工藝十分相近，因此采用水煎煮法提取，以保證制劑的臨床療效。

3.2 優(yōu)選指標(biāo)的設(shè)計(jì) 丹參具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩等功效，在此方中為臣藥，考慮到丹酚酸B的藥理作用更能反應(yīng)軟脈靈顆粒的臨床療效。丹參的指標(biāo)性成分可分為脂溶性和水溶性成分，水溶性主要為酚酸類成分，包括丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素以及原兒茶醛等。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，丹參酚酸類成分具有抗凝及抗氧化活性，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有預(yù)防和治療作用。丹參水溶性成分中含量最高的是丹酚酸B，約占3.0%，可作為工藝優(yōu)選的指標(biāo)[4]。基于以上分析，確定丹酚酸B作為該制劑工藝優(yōu)選的考察指標(biāo)之一?？紤]到用單一考察指標(biāo)篩選中藥提取工藝條件不夠全面，筆者在軟脈靈顆粒劑水提取工藝的優(yōu)選實(shí)驗(yàn)中，采用丹酚酸B含量和干浸膏得率2個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)法，以綜合考察提取工藝的優(yōu)劣。

3.3 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的丹參藥材，丹酚酸B含量有一定的差異，這與資料[5]記載一致。因此，在實(shí)際的生產(chǎn)過程中，為了保證制劑的質(zhì)量穩(wěn)定、可靠，在選擇丹參藥材時(shí)應(yīng)該重視其產(chǎn)地。

[1]林友愉．軟脈靈治療冠心病心絞痛的臨床療效[J]．海峽藥學(xué)，2009，8(6)：174-175．

[2]游雯等．軟脈靈治療高脂血癥的臨床觀[J]．海峽藥學(xué)，2009，6(7)：155-156．

[3]趙琳，童曉青，佟占柱．腎石消片提取工藝研究[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，12(5)：206-207．

[4]孫紅麗．HPLC法同時(shí)測(cè)定丹參沖劑中丹酚酸B的含量[J]．黑龍江醫(yī)藥，2009，22(3)：268-269．

[5]徐山．不同產(chǎn)地丹酚酸B的含量測(cè)定[J]．山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，35(5)：178-179．

Orthogonalexperimenttooptimizeextractionprocessofruanmailinggranules

ZHENG Mei-juan,WANG Qiong-jun,HU Juan

Zhangzhou vocational college of health, Fujian province，Zhangzhou 363000,china；Institute of traditional Chinese medicine of Fujian province, Fuzhou City, Fujian province 350003,China

ObjectiveOptimal best extraction condition of Ruan Mai-Ling granules.MethodGinseng powder feeding rate and dry study of the indicator of the ingredient content of salvianolic acid b indicator filter ruanmailing granule by orthogonal design optimal extraction conditions.ResultsOptimizing process are: 16 mix the herbs in a certain, 60min first add 8 times times the volume of water immersion, after boiling decoction 1h; Plus 4, 3 times the amount respectively water, boiling, boiling after 0.5 h.ConclusionOptimum extraction process of a stable, rational, viable.

Ruan Mai-Ling granules；Extraction technology；By orthogonal test；Salvianolic acid b

福建省教育廳B類課題(JB12322)。

鄭美娟(1975-)，女，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事中藥學(xué)研究。

胡娟(1964-)，女，醫(yī)學(xué)博士，教授，碩士生導(dǎo)師。E-mail：huj@fjtcm.edu.cn

R283.6

A

1007-8517(2014)15-0014-03

2014.06.08)