番石榴葉調(diào)節(jié)小鼠血糖血脂作用的研究

1.廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，2. 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，3.廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 廣州 510006

番石榴葉調(diào)節(jié)小鼠血糖血脂作用的研究

張玉英1陳艷芬2 *楊超燕2李書(shū)淵2唐春萍2陶曙紅2曾昭智3

1.廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，2. 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，3.廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 廣州 510006

目的研究番石榴葉對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠和高脂血癥小鼠的影響。方法采用鏈脲佐菌素復(fù)制糖尿病小鼠模型，觀察番石榴葉對(duì)小鼠空腹血糖和糖耐量的影響；采用脂肪乳劑灌胃建立高血脂小鼠模型，觀察番石榴葉對(duì)小鼠血脂水平及肝臟指數(shù)的影響。結(jié)果番石榴葉高、低劑量(10g/kg、5g/kg)均能明顯降低糖尿病小鼠空腹血糖，改善其糖耐量，也能明顯調(diào)節(jié)高脂血癥小鼠的血脂水平，高劑量還能降低高脂血癥小鼠的肝臟指數(shù)。結(jié)論番石榴葉有明顯的降糖和調(diào)脂作用，為其臨床應(yīng)用和研究開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

番石榴葉;血糖;血脂;小鼠

番石榴(PsidiumguajavaL)是桃金娘科(Myrtaceae)番石榴屬植物，又叫芭樂(lè)、雞屎果、喇叭果等，是我國(guó)南方地區(qū)的常見(jiàn)水果，在廣東、廣西、海南、臺(tái)灣等地都有野生和人工栽培。《全國(guó)中草藥匯編》記載：番石榴藥用價(jià)值高，可防治高血壓、糖尿病。番石榴葉為番石榴的干燥葉及帶葉嫩枝。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為：番石榴葉性平，味甘澀，入脾、胃、大腸、肝經(jīng)等，且具有生津止渴、除煩、止癢、收斂止瀉，消炎止血等功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，番石榴葉的主要化學(xué)成分有黃酮類、鞣質(zhì)類、三萜類等[2]，具有降血糖[3]、抗氧化[4]、抗病毒[5]抗菌[6]等藥理作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠糖尿病模型和高脂血癥模型，分別觀察番石榴葉對(duì)血糖和血脂的影響，為本品的臨床應(yīng)用和中藥防治代謝綜合征新藥研究開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SPF級(jí)昆明種小鼠，體重18～22g/只，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(粵)2008-0002，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后供試。

1.2 藥物與試劑 番石榴葉流浸膏(1g生藥/ml)，由廣東藥學(xué)院中藥鑒定教研室李書(shū)淵教授提供；格列齊特片，深圳海王藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20101201；血脂康膠囊：北京大維信生物科技有限公司，批號(hào)：20110510。

高血脂模型脂肪乳劑的制備：10%膽固醇、20%豬油、2%脫氧膽酸鈉、1%丙硫氧嘧啶、5%吐溫-80、蒸餾水按一定比例配制，用前37℃水浴融化。葡萄糖檢測(cè)試劑盒，上海科欣生物技術(shù)研究所，批號(hào)：20110701。血脂各指標(biāo)檢測(cè)試劑盒為中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品，總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)測(cè)定試劑盒批號(hào)分別為：121321，114961，110431，110441。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 UV-1800型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京瑞利分析儀器公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)鏈脲佐菌素糖尿病小鼠血糖及糖耐量的影響 隨機(jī)選擇12只小鼠注射生理鹽水作為正常對(duì)照組，其余小鼠按150mg/kg腹腔注射0.1mol/L的鏈脲佐菌素(STZ)溶液，72h后(空腹12h)，乙醚麻醉小鼠，經(jīng)眼底靜脈叢取血，離心取上清，檢測(cè)血糖值。選擇空腹血糖≥11.1mmol/L的小鼠48只為糖尿病模型小鼠，隨機(jī)分成4組：模型組，格列齊特片陽(yáng)性對(duì)照組(32mg/kg)，番石榴葉高劑量組(10g/kg)、番石榴葉低劑量組(5g/kg)，每組12只。正常對(duì)照組及模型組予以等體積的蒸餾水(20ml/kg)，其余各組分別灌胃給藥，每天1次，持續(xù)14天。末次給藥后禁食12h，每只小鼠取少量血后，灌胃5%葡萄糖溶液(20ml/kg)，然后分別于灌胃后的30min，60min，120min四個(gè)時(shí)間點(diǎn)眼底靜脈叢取血，測(cè)血糖值，并計(jì)算血糖曲線下面積(AUC)。

AUC計(jì)算方法：mmol.h/L=(A+B)×15/60+(B+C)×15/60+(C+D)×30/60(A、B、C、D分別為0、30、60、120min血糖值)。

2.2 對(duì)高脂血癥小鼠血脂水平的影響 取小鼠60只，隨機(jī)分成5組：正常對(duì)照組、高脂血癥模型組、血脂康膠囊陽(yáng)性對(duì)照組(0.4g/kg)、番石榴葉高劑量組(10g/kg)、番石榴葉低劑量組(5g/kg)。除正常對(duì)照組外，其余各組每天上午用脂肪乳劑灌胃(20ml/kg)，下午再分別以不同藥物灌胃，連續(xù)進(jìn)行14d。末次灌胃后，禁食12h后眼底靜脈叢取血，離心分離血清，采用試劑盒分別檢測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。解剖取肝臟稱重，計(jì)算小鼠肝臟指數(shù)(肝臟指數(shù)=肝重量/體重×100)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)糖尿病小鼠血糖和糖耐量的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。模型組小鼠的空腹血糖與正常組比較顯著升高(P<0.01)，灌胃葡萄糖后，小鼠血糖先升高后逐步下降，但各時(shí)間點(diǎn)血糖值與正常組比較差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示糖尿病模型造模成功。格列齊特組、番石榴葉高劑量組與模型組相比空腹血糖顯著降低(P<0.01)，番石榴葉低劑量組也明顯降低(P<0.05)。給糖負(fù)荷后30min、60min、90min，番石榴葉高劑量組與模型組比較，均可顯著降低小鼠血糖(P<0.01或P<0.05)；番石榴葉低劑量組只在30min時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)計(jì)算各組AUC發(fā)現(xiàn)，格列齊特組、番石榴葉高劑量、低劑量組的AUC均明顯低于模型組(P<0.01)。

表1 番石榴葉對(duì)糖尿病小鼠空腹血糖和糖耐量的影響±s，n=12)

與正常組比較，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

表 2 番石榴葉對(duì)高脂血癥小鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的影響

與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<.05，△△P<0.01

3.2 對(duì)高脂血癥小鼠血脂水平和肝臟指數(shù)的影響 從表2看出，模型組與正常對(duì)照組比較，TC 、TG與LDL-C明顯升高 (P<0.05或P<0.01)，HDL-C明顯降低(P<0.01)，提示通過(guò)灌胃脂肪乳劑高血脂小鼠模型造模成功。與模型對(duì)照組相比，番石榴葉高劑量組和血脂康組TG、TC和LDC-C水平明顯下降,HDL-C水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)。番石榴葉低劑量組TG和TC水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)。臨床上高血脂是導(dǎo)致脂肪肝的重要原因，表3結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組的肝指數(shù)明顯增高(P<0.05)，提示該模型可導(dǎo)致肝臟重量增加，而番石榴葉高劑量組、血脂康組與模型組比較，肝指數(shù)明顯下降(P<0.05)，提示它們可能具有通過(guò)降低血脂而發(fā)揮防治脂肪肝的作用。

表3 番石榴葉對(duì)高脂血癥小鼠肝指數(shù)-的影響±s，n=12)

與正常組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01與模型組比較，△P﹤0.05，△△P﹤0.01

4 討論

隨著人們生活水平提高，飲食熱量攝入過(guò)多、體力勞動(dòng)減輕及心理應(yīng)激增加，代謝綜合癥(MS)的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。MS是以中心性肥胖、高血脂、高血糖和高血壓為特征的一組綜合癥。其中，高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病和心肌梗死、心臟猝死等心腦血管疾病及脂肪肝的物質(zhì)基礎(chǔ)和主要危險(xiǎn)因素。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)測(cè)目前全世界患MS約有2億人，在一些老年群體中甚至高達(dá)50%[7]。我國(guó)18歲以上人群MS的患病率高達(dá)6.6%[8]。因此，MS已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題，對(duì)MS的防治研究成為我國(guó)疾病控制的重要內(nèi)容之一。目前，市售西藥雖見(jiàn)效快，但對(duì)肝、腎等臟器損害較大，而純天然植物提取類藥物作用溫和、毒副作用較輕，開(kāi)發(fā)利用潛力大。

以往對(duì)番石榴葉的研究主要集中在降血糖作用上，研究表明番石榴葉通過(guò)降低血糖[9]、改善胰島功能[10]來(lái)改善糖代謝紊亂。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)番石榴葉流浸膏能顯著降低小鼠空腹血糖，改善糖耐量，且有一定的劑量依賴性，提示民間將該藥及果實(shí)用于防治糖尿病有一定的依據(jù)。關(guān)于番石榴葉對(duì)血脂的調(diào)節(jié)作用國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道，僅有個(gè)別研究者在糖尿病模型上做了觀察，如王婧茹等[3]研究發(fā)現(xiàn)番石榴葉總?cè)瓶娠@著降低糖尿病大鼠TC、TG及FFA水平。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制小鼠高脂血癥模型，觀察番石榴葉對(duì)血脂的影響，結(jié)果顯示番石榴葉流浸膏高劑量能顯著降低高血脂小鼠TC、TG及LDL-C水平，升高HDL-C，并且降低肝指數(shù)；低劑量組也能降低TC和TG。

綜上所述，番石榴葉有明顯的降血糖和調(diào)血脂的作用，這些作用可能與其所含的黃酮類成分等有關(guān)。番石榴葉資源較為豐富，進(jìn)一步深入研究其藥理作用和物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)于番石榴葉的有效開(kāi)發(fā)利用以及中藥防治代謝綜合癥研究具有深遠(yuǎn)的意義。

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StudyoneffectsofPsidiumguajavaleavesonbloodsugarandbloodlipidinmice

ZHANG Yu-ying1,CHEN Yan-fen2*,YANG Chao-yan2,LI Shu-yuan2,TANG Chun-ping2,JIANG Tao2,TAO Shu-hong2,ZENG zhao-zhi3

1. School of basic,Guangdong Pharmaceutical University,2.School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University,3.Animal experiment center,Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006,China

objective: t to study the effects of Psidium guajava leaves on blood sugar and blood lipid in mice.methodsThe diabetes mice model induced by intraperitoneal injection of streptozocin was used to observed the effects of Psidium guajava leaves on fasting blood glucose, sugar tolerance and AUC; The hyperlipidemic mice model by gavage with fat emulsion was used to observed the effects of Psidium guajava leaves on blood lipid and liver index.ResultsBoth high dose group(10g/kg )and low dose group(5g/kg)of gavage can regulate the fasting blood glucose, sugar tolerance of diabetes mice and blood lipid of hyperlipidemic mice; high dose group can reduce liver index of hyperlipidemic mice.ConclusionsPsidium guajava leaves have the effects to regulate blood sugar and blood lipid of mice

Psidium guajava leaves, blood glucose, blood lipid,mice

廣東省中醫(yī)藥局課題(20132195)。

陳艷芬，E-mail:xwnai@163.com

R285.5

A

1007-8517(2014)01-0014-03

2013.10.28)