子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中SIAH2、CARM1 的表達(dá)與意義

陳湧彧

（福建省漳浦縣醫(yī)院病理科 漳浦 363200）

子宮頸癌是原發(fā)于宮頸部位的惡性腫瘤，也是女性生殖道最為常見的婦科惡性腫瘤。根據(jù)2018 年世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布，在全球范圍內(nèi)宮頸癌的發(fā)病率在10 萬人中約有13 人，死亡率為每10 萬中約有7 人[1]。近年來，隨著我國健康教育、人乳頭狀瘤病毒（HPV）疫苗接種及宮頸癌篩查的加強(qiáng)，宮頸癌的發(fā)病率與死亡率已有明顯下降趨勢，但呈年輕化趨勢發(fā)展。宮頸癌大多數(shù)為鱗癌，約占總發(fā)病率的90%[2]。目前，臨床認(rèn)為HPV 病毒持續(xù)感染是引起子宮頸癌的主要原因，且?guī)缀跛械膶m頸癌都與HPV感染有關(guān)，但單純病毒感染無法促進(jìn)腫瘤的全部進(jìn)展[3]。因此，對子宮頸癌患者進(jìn)行早期篩查并分析可能產(chǎn)生影響的因素對制定診療方案、改善患者預(yù)后具有重要意義。近年來，已有眾多學(xué)者從基因、分子等方面研究子宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，并分析子宮頸癌病變潛在的細(xì)胞與分子機(jī)制，這在后期治療中具有重要指導(dǎo)作用[4]。SIAH2 屬于E3 泛素連接酶，是臨床應(yīng)用較為廣泛的腫瘤因子，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。CARM1 屬于蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員，在乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等多種癌癥中均可發(fā)揮促進(jìn)作用，在DNA修復(fù)、mRNA 剪接、轉(zhuǎn)錄調(diào)控中具有重要價值[5]。鑒于此，本研究將探討子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中SIAH2、CARM1 的表達(dá)及與臨床特征間的關(guān)系。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2020 年5 月至2022年5 月漳浦縣醫(yī)院收治的120 例子宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者為研究對象，年齡28～70 歲，平均年齡（46.78±4.31）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）22.8～30.4 kg/m2，平均BMI（24.58±2.64）kg/m2；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期 35 例，Ⅱ期 50 例，Ⅲ期 20 例，Ⅳ期 15例；病理分級：低分化71 例，中高分化49 例。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號：福建省漳浦縣醫(yī)院倫理字2019000034 號）。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：子宮頸癌符合《中國子宮頸癌篩查及異常管理相關(guān)問題專家共識（二）》[6]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)臨床確診為鱗狀細(xì)胞癌；均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；嚴(yán)重心、肝、腎等臟器功能不全者；合并嚴(yán)重自身免疫系統(tǒng)功能障礙者；合并凝血功能障礙者；認(rèn)知功能及精神功能障礙依從性差者；入組前接受過相關(guān)放化療及其他治療者。

1.3 研究方法

1.3.1 SIAH2、CARM1 檢測方法 取所有子宮頸鱗狀細(xì)胞癌及癌旁子宮組織進(jìn)行檢查，癌旁組織需經(jīng)臨床形態(tài)學(xué)證實(shí)為正常子宮頸組織且無病變殘留，具體方法如下：將子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織及癌旁組織樣本離體后取少量放入液氮后置入-80℃的環(huán)境中保存；采用免疫組化SP 法染色，所有組織需經(jīng)10%的中性福爾馬林固定并采用石蠟包埋，行4 μm厚度的連續(xù)切片；使用二甲苯脫蠟處理，梯度乙醇脫苯、水化，并采用高溫高壓下抗原修復(fù)，根據(jù)SP 試劑盒說明書進(jìn)行對應(yīng)染色處理。SIAH2、CARM1 采用磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline,PBS）進(jìn)行3 次洗滌后使用封閉液封閉，分別購自上海西格生物科技有限公司、上海谷研實(shí)業(yè)有限公司。染色結(jié)果由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進(jìn)行閱片審核，每張切片隨機(jī)選擇5 個高倍視野進(jìn)行觀察，每個視野計數(shù)200 個腫瘤細(xì)胞。（1）按照陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行計分：無陽性細(xì)胞記0 分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%則記1分，11%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤50%則記2 分，51%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤80%則記3 分，陽性細(xì)胞數(shù)＞80%則記4分。（2）根據(jù)著色強(qiáng)度進(jìn)行計分：若細(xì)胞未著色則計0 分，淺黃色計1 分，棕黃色計2 分，黃褐色記3 分。將兩項得分相乘作為最終結(jié)果，若結(jié)果＜3 分則為陰性，若≥3 分則為陽性。

1.3.2 臨床病理特征 統(tǒng)計所有患者的年齡（＜50歲，≥50 歲）、腫瘤直徑（≤4 cm，＞4 cm）、分化程度（低分化，中高分化）、FIGO 分期（Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期）、肌層浸潤深度（＜1/2，≥1/2）及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有，無）等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0 軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗；多因素采用Logistic 回歸分析；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SIAH2、CARM1 表達(dá)情況 子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中SIAH2、CARM1 的陽性表達(dá)率明顯較子宮頸鱗狀細(xì)胞癌旁組織高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 1。

表1 子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中SIAH2、CARM1 表達(dá)情況對比[例（%）]

2.2 SIAH2、CARM1 表達(dá)與臨床病理特征SIAH2、CARM1 通路相關(guān)蛋白陽性表達(dá)與年齡、腫瘤直徑無關(guān)（P＞0.05），但可能與分化程度、肌層浸潤深度、FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 SIAH2、CARM1 表達(dá)與臨床病理特征的單因素分析

2.3 多因素分析 由Logistic 回歸分析結(jié)果得出，子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織SIAH2、CARM1 陽性表達(dá)率在低分化、肌層浸潤深≥1/2、FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（OR＞1，P＜0.05）。分別見表 3、表 4、表 5。

表4 SIAH2 表達(dá)與臨床病理特征的多因素分析

表5 CARM1 表達(dá)與臨床病理特征的多因素分析

3 討論

子宮頸癌是女性生殖道最為常見的惡性腫瘤，由于該病早期多無明顯癥狀表現(xiàn)，被確診時多已至病情中晚期。因此尋找子宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中相關(guān)基因改變不僅可為疾病早期的診斷提供意見，還可為后續(xù)的治療方案制定提供參考。臨床研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中相關(guān)細(xì)胞分子水平檢測是目前診斷疾病的有效方式，臨床部分癌組織細(xì)胞的增殖及侵襲均與相關(guān)因子的表達(dá)密切相關(guān)[7]。其中SIAH2、CARM1在臨床多種惡性腫瘤中均有異常表達(dá)，但與子宮頸癌的關(guān)系報道鮮有。

SIAH2 為果蠅基因產(chǎn)物的類似物，其定位于3Q25 號染色體，編碼蛋白SIAH2 擁有E3 泛素連接酶的活性，可參與底物蛋白泛素化與水解的作用對部分細(xì)胞功能造成影響，如細(xì)胞增殖、低氧化、信號通路的傳導(dǎo)、神經(jīng)中樞的調(diào)節(jié)等[8]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，SIAH2 可扮演癌基因參與如肺癌、喉鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌等癌癥組織中均有過高表達(dá)，且隨著病情惡性程度及病理分期的不斷增高，SIAH2的陽性表達(dá)率也隨之增加[9～10]。此外，SIAH2 在腫瘤的發(fā)展過程中具有明顯促進(jìn)作用，其N 端包含環(huán)域結(jié)構(gòu)的催化區(qū)域，C 端則為高度保守的底物結(jié)合，環(huán)指區(qū)域與N 末端結(jié)合介導(dǎo)可引起側(cè)支發(fā)芽因子同源物2（SPRY2）蛋白酶的講解，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK） 的磷酸化，促進(jìn)血管的再生[11]。CARM1 屬于蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（Protein arginine Methyltransferase,PRMT）家族成員，其抑制劑不僅具有抗腫瘤活性的效果，還可提高T 細(xì)胞的抗腫瘤能力，對改善免疫微環(huán)境及提高機(jī)體抗腫瘤活性具有重要意義[12]。

本研究結(jié)果顯示，SIAH2、CARM1 通路相關(guān)蛋白陽性表達(dá)與年齡、腫瘤直徑無關(guān)，但可能與分化程度、肌層浸潤深度、FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。進(jìn)一步經(jīng)Logistic 回歸分析結(jié)果得出，子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織SIAH2、CARM1 陽性表達(dá)率在低分化、肌層浸潤深≥1/2、FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中較高。結(jié)果提示SIAH2、CARM1 通路相關(guān)蛋白在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率較癌旁組織高，且與臨床病理特征有一定關(guān)系。分析原因可能是由于：SIAH2 在子宮頸細(xì)胞癌組織中呈彌漫陽性，而僅在正常子宮頸有增殖活性的細(xì)胞中表達(dá)，從正常子宮頸組織至子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中陽性率逐漸升高，且隨著疾病惡性程度及臨床分期的升高，其表達(dá)水平也逐漸升高[13]。瞿叢新等[14]以128 例乳腺腫瘤切除治療患者為研究對象，通過血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)SIAH2 在乳腺癌腫瘤的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移中關(guān)系密切，可作為判斷腫瘤惡性程度的有效指標(biāo)，均可說明SIAH2 在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。CARM1 與多種基因特異性轉(zhuǎn)錄因子關(guān)系密切，可作為調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子 -κB（NF-κB）、P53 基因、核轉(zhuǎn)錄因子E2Fs 等分子的開關(guān)，從而參與細(xì)胞基因表達(dá)、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)及組織發(fā)育等多進(jìn)程。Inoue F 等[15]通過對CARM1 在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，CARM1 消除了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的抗腫瘤機(jī)制，且與正常子宮內(nèi)膜組織相比在癌組織中呈顯著過表達(dá)，可作為子宮內(nèi)膜癌強(qiáng)有力的治療靶點(diǎn)。

綜上所述，SIAH2、CARM1 在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率較癌旁組織高，且與臨床病理特征（分化程度、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）有一定關(guān)系。