血清DKK1水平對肝細胞癌（HCC）患者預(yù)后判斷的臨床價值

馬曉路 談綺文 彭穎斐 張春燕 吳 炯 郭 瑋 潘柏申（復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科 上海 200032）

血清DKK1水平對肝細胞癌（HCC）患者預(yù)后判斷的臨床價值

馬曉路 談綺文 彭穎斐 張春燕 吳 炯 郭 瑋 潘柏申△
（復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗科 上海 200032）

目的評估血清Dickkopf-1（DKK1）水平與肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性。方法收集2011至2012年間72例在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院進行HCC根治切除患者的術(shù)前血清以及其中43例術(shù)后1個月的血清，隨訪至2013年10月。采用ELISA方法定量檢測HCC患者術(shù)前以及術(shù)后血清DKK1水平，分析DKK1高、低組患者主要臨床相關(guān)資料差異，并評價其與患者復(fù)發(fā)、預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果1年內(nèi)共有21人發(fā)生復(fù)發(fā)，1年復(fù)發(fā)率為26.92％。高DKK1組1年無瘤生存率顯著低于低DKK1組（50.0％vs.77.8％，P=0.011）。復(fù)發(fā)低危亞組中高DKK1組復(fù)發(fā)率高于低DKK1組患者，包括單個腫瘤（73.3％vs.14.0％，P=0.037）、無衛(wèi)星灶（56.3％vs.14.3％，P=0.034）、無血管侵犯（37.5％vs.12.5％，P=0.002）、BCLC 0+A（53.3％vs.15.2％，P=0.010）。兩組患者的臨床病理特征的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。多因素結(jié)果提示高DKK1為術(shù)后無瘤生存的獨立預(yù)后因素（HR為3.753，95％CI為1.495～9.424，P=0.005）。受試者工作特征曲線分析顯示術(shù)前血清DKK1水平對預(yù)測HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有較好的特異性（82.35％）。術(shù)后DKK1持續(xù)維持在高水平的患者具有更高的復(fù)發(fā)率（50.00％）。結(jié)論術(shù)前血清高水平DKK1預(yù)示HCC患者早期復(fù)發(fā)率高。血清DKK1水平可有效預(yù)測HCC切除術(shù)后患者的預(yù)后，監(jiān)測DKK1可以幫助臨床制定最有效的HCC治療方案。

肝細胞癌（HCC）；DKK1；預(yù)后；血清標志物

*This work was supported by the Projects of the National Science＆Technology Pillar Program under the Twelfth-Five-Year Plan（2012BAI37B01）and State Key Laboratory of Clinical College Construction Project.

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率在惡性腫瘤中位居世界第5位，死亡率居第2位。我國占全球肝癌發(fā)病率及死亡率的一半，且發(fā)病率正在逐年升高。手術(shù)切除是目前HCC根治性治療的主要手段，但是HCC根治性切除術(shù)后5年內(nèi)仍有60％～70％的患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是HCC患者術(shù)后的主要死亡原因，它已成為進一步提高肝癌治療效果的最主要障礙［1-2］。根據(jù)回顧性臨床研究顯示，肝內(nèi)復(fù)發(fā)呈現(xiàn)雙時相性，大部分復(fù)發(fā)時間發(fā)生于接受手術(shù)后2年內(nèi)，之后復(fù)發(fā)率趨于平緩，故將術(shù)后2年內(nèi)的復(fù)發(fā)定義為早期復(fù)發(fā)［3］。在臨床工作中通過分子標志物預(yù)測個體復(fù)發(fā)和預(yù)后危險度，進而指導(dǎo)臨床監(jiān)測與治療，顯示出其至關(guān)重要的作用。傳統(tǒng)的臨床病理評價如腫瘤形態(tài)、組織病理學(xué)特征和腫瘤分期包含信息量有限，并不能非常有效地預(yù)測HCC切除術(shù)后患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險［4］。因此，臨床迫切需要一些新的生物學(xué)標志來判斷HCC患者術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的危險度，進而指導(dǎo)臨床個體化治療。

近期研究顯示Dickkopf-1（DKKl）是Wnt信號途徑中重要的分泌型抑制因子，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。成年人體內(nèi)幾乎不表達DKK1，僅在胎盤和胚胎組織中可檢測到［5-6］。Sato等［7］研究顯示HCC患者中DKK1水平高于健康對照。Tung等［8］對DKK1診斷HCC進行性能評價，顯示其敏感性為34％、特異性高達100％。Shen等［9］組織的大規(guī)模多中心DKK1研究發(fā)現(xiàn)，DKK1聯(lián)合甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）診斷HCC的敏感性為73.3％、特異性為93.4％、受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic，ROC）下面積為0.889。Yu等［10］通過微列陣分析發(fā)現(xiàn)DKK1在HCC組織中表達量明顯高于癌旁組織，在HCC患者血清中也檢測到高濃度DKK1，同時HCC組織中DKK1上調(diào)水平與患者預(yù)后具有相關(guān)性，在早期和AFP陰性患者中具有極高的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)示價值。因此，DKK1可能是一個潛在的HCC腫瘤診斷和預(yù)后評估的標志物。血清標志物具有易檢測、可重復(fù)、侵入少的特點［9］，在臨床診斷以及預(yù)后評估中占有重要的地位。然而，血清DKK1水平對于HCC切除術(shù)后患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險尤其是早期肝內(nèi)復(fù)發(fā)風(fēng)險的預(yù)測價值尚未見報道。

本研究旨在定量檢測HCC患者血清DKK1水平，評估DKK1對肝癌患者術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后的相關(guān)性，為HCC患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)測評估提供新的血清學(xué)參考指標。

資料和方法

研究對象本研究前瞻性入組2011至2012年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院進行HCC根治切除患者72例，其中男56例，女16例，年齡為37～87歲。依據(jù)2011年版《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》標準病理組織學(xué)診斷為HCC，術(shù)前均未接受過放療、化療等相關(guān)治療，采集HCC患者術(shù)前血清標本。所有患者術(shù)后每3～6個月隨訪腫瘤標志物、超聲、CT等檢測腫瘤有無轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。采集患者資料，包括年齡、性別、肝炎背景、肝功能狀態(tài)、是否肝硬化、甲胎蛋白（AFP）、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級和BCLC分期。終點事件定義為術(shù)后一年發(fā)生肝內(nèi)復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)時間（time to recurrence，TTR）定義為手術(shù)當日到最初發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)時之間的時間間隔［11-12］。在此72名入組患者中，43名同意接受術(shù)后1個月隨訪再次抽血檢測。本研究得到復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院倫理委員會批準，并獲得患者知情同意。

入組標準 符合HCC診斷，年齡≥18周歲，接受根治性切除術(shù)，術(shù)后病理證實為HCC。

排除標準 （1）既往有其他惡性腫瘤史；（2）合并有其他惡性腫瘤；（3）術(shù)前無影像學(xué)資料；（4）術(shù)后病理證實非干細胞肝癌診斷；（5）無隨訪資料或失訪。

標本采集術(shù)前一天抽取待檢者靜脈血4mL置于未加抗凝劑含分離膠試管（BD，USA）中，待凝血后1 200×g離心10min，分離血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于檢測DKK1蛋白、腫瘤標志物和肝功能實驗室檢測指標。術(shù)后1個月門診隨訪時同樣方法采集外周血，并分離血清，凍存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

血清DKK1檢測按照DKK1定量檢測ELISA試劑盒（R＆D Systems，Minneapolis，MN，USA）說明書操作，雙抗夾心測定DKK1蛋白濃度。在預(yù)包被DKK1單克隆抗體的ELISA板上加入100μL樣本稀釋液，隨后加入標準品或1∶200稀釋的血清樣本100μL，標準曲線采用復(fù)孔加樣，并留取一孔只加稀釋液作為空白對照。經(jīng)室溫孵育2h，洗板4次后加入200μL辣根過氧化物酶標記的兔抗DKK1多克隆抗體。室溫孵育2h，洗板4次后加入200μL含過氧化氫和聯(lián)苯胺的底物溶液，避光室溫孵育30min，顯色。加入50μL終止液后，450nm、630nm雙波長檢測各孔吸光度（D）值，標準品為人重組DKK1蛋白，標準曲線濃度依次為2 000pg/mL、1 000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL和31.2pg/mL，采用4參數(shù)Logistic擬合曲線對DKK1蛋白濃度進行定量。

血清肝炎和腫瘤標志物檢測使用Roche Modular E170全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀（Roche，Germany）進行乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBs Ag）、AFP檢測，檢測試劑采用Roche原廠配套試劑（Roche，Germany）。

血清肝功能生化檢測使用HITACHI 7600自動化生化儀（Hitachi，Japan）和SYSMEX XE-5000（Sysmex，Japan）進行肝功能Child-Pugh分級相關(guān)檢測項目，包含總膽紅素（total bilirubin，TB），白蛋白（albumin，ALB），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamicpyruvic transaminase，ALT），凝血酶原時間（prothrombin，PT）。其中TB、ALB與ALT采用Roche檢測試劑盒（Roche，Germany）；PT采用Sysmex原廠檢測試劑盒（Sysmex，Japan）。

統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 20.0（IBM，USA）軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。研究定量資料若符合正態(tài)分布，用±s描述；若不符合，則采用中位數(shù)（四分位間距）描述。連續(xù)變量兩組間比較采用t檢驗，等級變量比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法分析；采用多因素COX回歸模型分析影響長期預(yù)后的獨立危險因素，HR值和95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）關(guān)聯(lián)強度；生存分析采用Kaplan-Meier法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

HCC患者中血清DKK1表達水平72例HCC患者血清中均可測得DKK1表達。血清DKK1中位水平為1 152pg/mL（四分位間距：855～1 769pg/mL）。

患者臨床基本資料比較患者的臨床特征信息如表1所示。平均年齡54.4歲（37～87歲），其中男性56人（77.78％），女性16人（22.22％）。巴塞羅那分期（Barcelona clinic liver cancer，BCLC）0+A期即早期HCC患者61名（84.72％），B+C期即中晚期HCC患者11名（15.28％）。術(shù)后1年隨訪時間內(nèi)有21人發(fā)生復(fù)發(fā)，術(shù)后1年復(fù)發(fā)率為29.17％（21/72）。由于血清DKK1水平呈偏態(tài)分布，因此采用75百分位數(shù)1 769pg/mL作為高DKK1水平的cut-off值（決定值），將72例患者根據(jù)血清DKK1水平分為兩組：DKK1水平＞1 769pg/mL為高DKK1組，≤1 769pg/mL為低DKK1組。對比發(fā)現(xiàn)兩組患者在年齡、性別、HBs Ag、Child-Pugh分級、是否肝硬化、AFP水平、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級和BCLC分期等方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

表1 臨床特征與術(shù)前血清DKK1關(guān)系Tab 1 Correlation between clinicopathological characteristics and preoperative serum DKK1

術(shù)前血清DKK1水平高低和無瘤生存的相關(guān)性在12個月的隨訪中，高DKK1組50例患者無瘤生存時間顯著低于低DKK1組。兩組的無瘤生存時間分別為214天和300天，1年累積無瘤生存率分別為50.0％和77.8％（P=0.011，圖1）。

圖1 術(shù)前DKK1水平與無瘤生存率的相關(guān)性Fig 1 Correlation between preoperative serum DKK1 and tumor-free survival

血清DKK1水平在低復(fù)發(fā)風(fēng)險亞組中的預(yù)測價值在復(fù)發(fā)低危亞組中，高DKK1組復(fù)發(fā)率高于低DKK1組患者，包括單個腫瘤（73.3％vs.14.0％，P=0.037）、無衛(wèi)星灶（56.3％vs.14.3％，P=0.034）、無血管侵犯（37.5％vs.12.5％，P=0.002）、BCLC 0+A期（53.3％vs.15.2％，P=0.010，圖2）。

影響術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)因素的Cox回歸分析采用COX比例風(fēng)險模型對各種風(fēng)險預(yù)測因素，包括年齡、性別、HBs Ag、Child-Pugh分級、是否肝硬化、AFP水平、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級、BCLC分期和術(shù)前血清DKK1水平與轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的關(guān)系。單因素分析顯示衛(wèi)星灶（HR為3.583，95％CI為1.203～10.676，P=0.022）、血管侵犯（HR為2.930，95％CI為1.181～7.267，P=0.020）、BCLC分期（HR為3.112，95％CI為1.203～8.051，P=0.019）和術(shù)前血清DKK1水平（HR為2.913，95％CI為1.225～6.929，P=0.016）是影響HCC早期復(fù)發(fā)的危險因素。多因素分析發(fā)現(xiàn)僅衛(wèi)星灶（HR為7.178，95％CI為2.131～24.182，P=0.001）、BCLC分期（HR為4.071，95％CI為1.496～11.078，P=0.006）和術(shù)前血清DKK1水平（HR為3.753，95％CI為1.495～9.424，P=0.005）可作為影響HCC早期復(fù)發(fā)的獨立危險因素（表2）。

圖2 低危組術(shù)前DKK1水平與無復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系Fig 2 Correlation between preoperative DKK1 and relapse-free survival in low-recurrence-risk subgroups

表2 影響術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)因素的Cox回歸分析Tab 2 Univariate and multivariate Cox regression analyses of clinicopathlogical characteristics

DKK1預(yù)測早期復(fù)發(fā)的ROC曲線分析使用ROC曲線對術(shù)前血清DKK1預(yù)測早期復(fù)發(fā)的效能進行評估，結(jié)果顯示DKK1預(yù)測早期復(fù)發(fā)的ROC曲線下面積為0.626，靈敏性為42.86％，特異性為82.35％。結(jié)果顯示血清DKK1水平對于評估早期復(fù)發(fā)具有較好的特異性（圖3A）。

術(shù)前術(shù)后血清DKK1變化預(yù)測早期復(fù)發(fā)的價值72例入組患者中43名患者術(shù)后1個月隨訪時采集外圍血并進行了血清DKK1的檢測。結(jié)果顯示，相較于術(shù)前，術(shù)后外周血DKK1水平顯著下降（中位濃度：1 097.28pg/mL vs.824.32pg/mL，P=0.01，圖3B）。根據(jù)DKK1檢測結(jié)果，可將配對的43例患者分成3組：（Ⅰ）術(shù)前低、術(shù)后也是低DKK1水平（n=31）；（Ⅱ）術(shù)前高、術(shù)后低DKK1水平（n=6）；（Ⅲ）術(shù)前高、術(shù)后也是高DKK1水平（n=6）。3組人群的復(fù)發(fā)率分別是16.13％、33.33％、50.00％（Ⅰvs.Ⅱ：P=0.25；Ⅰvs.Ⅲ：P=0.03；Ⅱvs.Ⅲ：P=0.50，圖3C）。

圖3 術(shù)前DKK1水平評估早期復(fù)發(fā)的ROC曲線分析及術(shù)前、術(shù)后DKK1水平動態(tài)變化對復(fù)發(fā)的影響Fig 3 ROC analysis of the early-recurrence prediction efficiency of preoperative DKK1 and prognostic significance of dynamic changes of DKK1 before and after resection in HCC

討論

伴隨HCC防治的不斷深入，很多HCC患者尚在早期即被發(fā)現(xiàn)和治療。但現(xiàn)有標準多是基于影像學(xué)檢查和病理形態(tài)學(xué)分級，不能完全反映腫瘤的生物學(xué)特性，判斷預(yù)后的靈敏性和特異性還有待提高，難以適應(yīng)目前分子診斷和分型的需要。因此，尋找新的能夠充分反映HCC生物學(xué)特性的預(yù)后判斷與治療分子標志物，并在此基礎(chǔ)上對HCC進行分子分型研究成為HCC患者進行個體化防治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過大量HCC預(yù)后分子標志物的研究，眾多新型HCC預(yù)后標志物被發(fā)現(xiàn)。血清標志物具有易檢測、可重復(fù)、非侵入性、標本用量以及人為干擾少等優(yōu)點，且無需復(fù)雜的標本前處理，故其在HCC的診斷和預(yù)后預(yù)測中均占有重要的地位［9］。盡管目前已有多種HCC預(yù)后潛在分子標志物被報道，主要包括血清標志物AFP、DCP和組織標志物p53、細胞角蛋白10、細胞角蛋白19、p28GANK、骨橋蛋白，分子標志物microRNA［13-18］。但是目前對于這些標志物的使用仍缺乏臨床共識。因此，挖掘新的HCC血清預(yù)后標志物勢在必行。

DKK1作為Wnt信號通路抑制劑受到廣泛研究。DKK1是一種分泌性糖蛋白，相對分子質(zhì)量（Mr）約為35 000。DKK1通過Wnt受體Lrp6結(jié)合從而阻斷Lrp6介導(dǎo)的Wnt/β-catenin信號傳遞，是Wnt信號通路的重要抑制因子［19-20］。大量研究顯示DKKl表達異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。Glass等［21］報道骨髓瘤細胞分泌RANKL升高伴破骨細胞活性增強，因此血清RANKL可作為多發(fā)性骨髓瘤復(fù)發(fā)預(yù)測指標。多發(fā)性骨髓瘤患者可引起血清DKK1和RANKL水平升高，導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤患者發(fā)生彌漫性骨質(zhì)疏松和高鈣血癥等全身反應(yīng)。Qian等［22］發(fā)現(xiàn)在HLA-A*0201的伴隨下細胞毒性T細胞可以直接識別骨髓瘤細胞表面的DKK1肽段并發(fā)起攻擊，因此DKK1可能是一個潛在的多發(fā)性骨髓瘤抗原，并可用于免疫靶向治療。Hirata等［23］在DKK1的表觀遺傳學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)腎癌患者DKK1表達沉默，DKK1再表達可在腎癌中導(dǎo)誘細胞凋亡和細胞周期阻滯。Yu等［10］報道HCC組織DKK1高表達患者遠期預(yù)后較差，DKK1單獨或聯(lián)合β-catenin可作為HCC預(yù)后預(yù)測標志物。

本研究對72例HCC患者進行了術(shù)前血清DKK1水平檢測，研究術(shù)前血清DKK1與HCC患者接受根治性切除術(shù)后腫瘤早期肝內(nèi)復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。相關(guān)回顧性研究顯示，HCC術(shù)后復(fù)發(fā)被定義成兩類：術(shù)后2年內(nèi)發(fā)生的早期復(fù)發(fā)以及術(shù)后2年后發(fā)生的晚期復(fù)發(fā)［3］。由于本研究的隨訪時間相對較短，所以將重點事件定義為術(shù)后1年內(nèi)發(fā)生的早期復(fù)發(fā)。我們首先發(fā)現(xiàn)血清高水平DKK1與HCC術(shù)后患者早期復(fù)發(fā)率顯著高于低DKK1患者。由于目前對于早期HCC患者的預(yù)后判斷仍是困擾臨床醫(yī)師的一個難題，因此我們進一步探究DKK1在預(yù)測早期肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)中的價值，結(jié)果顯示在BCLC 0+A的早期肝癌患者中，DKK1高水平患者早期復(fù)發(fā)率顯著高于低水平患者，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。除此以外在多個HCC低危復(fù)發(fā)組包括單個腫瘤、無衛(wèi)星灶、以及無血管侵犯HCC患者亞組中，術(shù)前高DKK1也預(yù)示著術(shù)后高腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險。通過多因素Cox模型以及ROC分析證實術(shù)前血清DKK1水平是預(yù)示HCC早期復(fù)發(fā)的獨立風(fēng)險因素（HR為2.913，95％CI為1.225～6.929，P=0.016），并且具有較高的預(yù)測特異性（82.35％）。這些結(jié)果提示了DKK1是一個理想的HCC尤其是早期HCC根治性術(shù)后預(yù)測復(fù)發(fā)風(fēng)險預(yù)測血清學(xué)標志物。

我們還收集了43例配對術(shù)前術(shù)后血清，發(fā)現(xiàn)術(shù)后DKK1水平較術(shù)前有顯著下降。提示DKK1可以做為一個理想的監(jiān)測手術(shù)治療療效的血清學(xué)標志物。根據(jù)DKK1動態(tài)變化與患者預(yù)后之間的分析，我們發(fā)現(xiàn)術(shù)后維持高血清DKK1水平的患者早期復(fù)發(fā)率顯著高。提示了對HCC患者進行DKK1術(shù)前術(shù)后動態(tài)檢測可以篩選出高?；颊撸瑥亩梢愿嗅槍π缘貙@些患者制定術(shù)后輔助治療方案，降低復(fù)發(fā)率，提高預(yù)后。

本研究中血清DKK1預(yù)后判斷點定為75百分位數(shù)1 769pg/mL，低于Shen等［9］研究報道的DKK1診斷HCC的cut-off值為2 153pg/mL，造成預(yù)后判斷值遠低于診斷值的原因可能由于文獻中DKK1檢測采用的手工包被ELISA檢測系統(tǒng)，而本研究采用的則是DKK1 ELISA預(yù)包被檢測系統(tǒng)，ELISA檢測體系的差異可能導(dǎo)致了本研究DKK1預(yù)后判斷值較低。

本研究為首次通過術(shù)前血清DKK1水平預(yù)測HCC根治切除術(shù)后患者短期無瘤生存以及早期復(fù)發(fā)風(fēng)險，術(shù)前血清高水平DKK1預(yù)示HCC患者預(yù)后不良。盡管存在單中心、樣本量小以及隨訪時間較短等不足之處，但是本研究仍為進一步探究血清DKK1水平與HCC患者預(yù)后相關(guān)性奠定了基礎(chǔ)，為臨床提供了HCC輔助預(yù)后預(yù)測的血清標志物新線索和依據(jù)。綜上所述，我們相信檢測血清DKK1可以有效地篩選出具有高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險的患者，協(xié)助臨床針對這些高?；颊咧贫ǜ佑行У膫€體化腫瘤監(jiān)測和治療方案，從而提高肝癌綜合治療的療效。

［1］Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics，2012［J］.CA Cancer J Cltn，2012，62（1）：10-29.

［2］Forner A，Llovet，JM，Bruix J.Hepatocellular carcinoma［J］.Lancet，2012，379（9822）：1245-1255.

［3］Portolani N，Conigilo A，Ghidoni S，et al.Early and late recurrence after liver resection for hepatocellular carcinoma：prognostic and therapeutic implications［J］.Ann Surg，2006，243（2）：229-235.

［4］Pantel K，Brakenhoff RH，Brandt B.Detection，clinical relevance and specific biological properties of disseminating tumour cells［J］.Nat Rev Cancer，2008，8（5）：329-340.

［5］Cadigan KM，Nusse R.Wnt signaling：A common theme in animal development［J］.Genes Dev，1997，11（24）：3286-3305.

［6］Giles RH，van ES JH，Clevers H.Caught up in a wnt storm：Wnt signaling in cancer［J］.Btochtm Btophys Acta，2003，1653（1）：1-24.

［7］Sato N，Yamabuki T，Takano A，et al.Wnt inhibitor Dickkopf-1 as a target for passive cancer immunotherapy［J］.Cancer Res，2010，70（13）：5326-5336.

［8］Tung EK，Ng IO.Significance of serum DKK1 as a diagnostic biomarker in hepatocellular carcinoma［J］.Future Oncol，2012，8（12）：1525-1528.

［9］Shen Q，F(xiàn)an J，Yang XR，et al.Serum DKK1 as a protein biomarker for the diagnosis of hepatocellular carcinoma：a large-scale，multicentre study［J］.Lancet Oncol，2012，13（8）：817-826.

［10］Yu B，Yang X，Xu Y，et al.Elevated expression of DKK1 is associated with cytoplasmic/nuclear beta-catenin accumulation and poor prognosis in hepatocellular carcinomas［J］.J Hepatol，2009，50（5）：948-957.

［11］Yang XR，Xu Y，Yu B，et al.CD24 is a novel predictor for poor prognosis of hepatocellular carcinoma after surgery［J］.Cltn Cancer Res，2009，15（17）：5518-5527.

［12］中華人民共和國衛(wèi)生部.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16（10）：929-946.

［13］Fu J，Chen Y，Cao J，et al.p28GANK overexpression accelerates hepatocellular carcinoma invasiveness and metastasis via phosphoinositol 3-kinase/AKT/hypoxiainducible factor-1ápathways［J］.Hepatology，2011，53（1）：181-192.

［14］Ding SJ，Li Y，Tan YX，et al.From proteomic analysis to clinical significance：overexpression of cytokeratin 19 correlates with hepatocellular carcinoma metastasis［J］.Mol Cell Proteomtcs，2004，3（1）：73-81.

［15］Yang XR，Xu Y，Shi GM，et al.Cytokeratin 10 and cytokeratin 19：predictive markers for poor prognosis in hepatocellular carcinoma patients after curative resection［J］.Cltn Cancer Res，2008，14（12）：3850-3859.

［16］Ding J，Huang S，Wu S，et al.Gain of miR-151 on chromosome 8q24.3 facilitates tumour cell migration and spreading through downregulating RhoGDIA［J］.Nat Cell Btol，2010，12（4）：390-399.

［17］Ji J，ShiJ，Budhu A，et al.MicroRNA expression，survival，and response to interferon in liver cancer［J］.N Engl JMed，2009，361（15）：1437-1447.

［18］Budhu A，Jia HL，F(xiàn)orgues M，et al.Identification of metastasis-related microRNAs in hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，2008，47（3）：897-907.

［19］Licchesi JD，van Neste L，Tiwari VK，et al.Transcriptional regulation of Wnt inhibitory factor-1 by Miz-1/c-Myc［J］.Oncogene，2010，29（44）：5923-5934.

［20］von Marschall Z，F(xiàn)isher LW.Secreted frizzled-related protein-2（sFRP2）augments canonical Wnt3a-induced signaling［J］.Btochem Btophys Res Commun，2010，400（3）：299-304.

［21］Glass DA 2nd，Patel MS，Karsenty G.A new insight into the formation of osteolytic lesions in multiple myeloma［J］.N Eng J Med，2003，349（26）：2479-2480.

［22］Qian J，Xie J，Hong S，et al.Dickkopf-1（DKK1）is a widely expressed and potent tumor-associated antigen in multiple myeloma［J］.Blood，2007，110（5）：1587-1594.

［23］Hirata H，Hinoda Y，Nakajima K，et al.Wnt antagonist DKK1 acts as a tumor suppressor gene that induces apoptosis and inhibits proliferation in human renal cell carcinoma［J］.Int J Cancer，2011，128（8）：1793-1803.

Prognostic significance of serum DKK1 in hepatocellular carcinoma（HCC）patients

MA Xiao-lu，TAN Qi-wen，PENG Ying-fei，ZHANG Chun-yan，WU Jiong，GUO Wei，PAN Bai-shen△
（Department of Cltntcal Laboratory Medtctne，Zhongshan Hospttal，F(xiàn)udan Untverstty，Shanghat200032，Chtna）

ObjectiveTo invesigate the prognostic values of serum Dickkopf-1（DKK1）in hepatocellular carcinoma（HCC）patients after curative resection.MethodsPreoperative sera samples were collected from 72 selective HCC patients undergoing curative resection during 2011 and 2012 in Zhongshan hospital.Moreover，postoperative sera of 43 patients who enrolled in present study were collected one month after resection.Follow-up was ended on Oct.，2013.ELISA was used to detect the concentrations of preoperative and postoperative DKK1 in serum from the patients.Clinical-pathological features were compared between high and low DKK1 level patients to evaluate the correlation between DKK1 and recurrence of HCC.ResultsDuring the follow-up，21 of 78 enrolled patients suffered recurrence and the 1-year recurrence rates was 26.92％.High DKK1 expression group had lower 1-year time to progress（TTP）rates compared with low DKK1 expression group（50.0％vs.77.8％，P=0.011）.Patients with preoperative high DKK1expression showed a relatively higher risk of developing postoperative recurrence than those with low DKK1 expression in low recurrence risk subgroups，including single tumor（73.3％vs.14.0％，P=0.037），absence of satellite lesions（56.3％vs.14.3％，P=0.034），absence of vascular invasion（37.5％vs.12.5％，P=0.002）and BCLC stage 0+A（53.3％vs.15.2％，P=0.010）.No significant clinicopathlolgical characteristics was found between the two groups.Multivariate analysis revealed that DKK1 was an independent prognostic factor for TTP（HR：3.753，95％CI：1.495-9.424，P=0.005）.Receiver operating characteristics curve analysis showed that preoperative DKK1 had high specificity（82.35％）in predicting recurrence after resection.Patients who remained high DKK1 levels after resection had highest recurrence probabilities（50.00％）.ConclusionsHigh level of preoperative serum DKK1 was associated with early recurrence of HCC after curative resection.DKK1 is a novel prognostic predictor for HCC patients and monitoring DKK1 could help tailing the most effective antitumor strategies.

hepatocellular carcinoma；DKK1；prognosis；serum marker

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.05.004

“十二五”國家科技支撐計劃（2012BAI37B01）；國家臨床重點檢驗專科建設(shè)項目

△Corresponding author E-mail：pan.baishen@zs-hospital.sh.cn

2014-02-20；編輯：張秀峰）