黃芪多糖對氣虛小鼠免疫功能的作用研究

黃志遠(yuǎn)+黃家濤

[摘要] 目的 探討黃芪多糖對氣虛小鼠免疫功能的作用。 方法 將42只雄性KM小鼠隨機分為3組：黃芪多糖高劑量組（高糖組）、低劑量組（低糖組）、空白對照組，每組14只。采用力竭游泳法和控制攝食法建立氣虛小鼠模型，造模過程中，高糖組、低糖組、空白對照組分別每天2次給予黃芪多糖0.4 mg/10 g、0.2 mg/10 g及蒸餾水0.5 ml/10 g灌胃。1周后測定小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)。 結(jié)果 高糖組的吞噬率為（96.00±0.19）%，胸腺指數(shù)為（1.89±0.16） mg/g，脾指數(shù)為（4.83±0.63） mg/g；低糖組的吞噬率為（91.00±0.30）%，胸腺指數(shù)為（1.64±0.37） mg/g，脾指數(shù)為（4.32±0.77） mg/g；對照組吞噬率為（45.00±0.26）%，胸腺指數(shù)為（1.57±0.34） mg/g，脾指數(shù)為（4.17±0.43） mg/g。與空白對照組比較，高糖組與低糖組的巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高（P<0.05）。 結(jié)論 黃芪多糖能增強氣虛小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)胸腺和脾臟的恢復(fù)，改善氣虛小鼠的非特異免疫功能。

[關(guān)鍵詞] 黃芪多糖；氣虛；免疫功能

[中圖分類號] R-05 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）07（b）-0014-04

黃芪別名綿芪、綿黃芪，為豆科黃芪屬植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus （Fisch.） Bunge 及蒙古黃芪Astragalus membranaceus var.mongholicus （Bunge） Hsiap [A. mongholicus Bunge] 膜莢的根，具有補氣升陽、利水消腫和托瘡生肌等功效。黃芪主要含有黃芪多糖、多種氨基酸、多種黃酮類和苷類、多種微量元素等生物活性物質(zhì)。其中多糖的免疫活性很突出[1]，為了進(jìn)一步研究黃芪多糖（Astragalus polysaccharide，APS）的免疫調(diào)節(jié)作用，本研究探討了APS對氣虛小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力及胸腺、脾的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品

黃芪藥材，購于廣州市藥材公司中藥飲片廠，批號：YIA1A0001，經(jīng)鑒定為黃芪。

1.2 主要儀器和試劑

TGL-16高速臺式冷凍離心機，廣州訊成科學(xué)儀器開發(fā)有限公司；LD5-2A低速離心機，北京醫(yī)用離心機廠；分析天平，廣州湘儀機電設(shè)備有限公司；JJ500型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠；WFJ720型可見光光度計，上海尤尼柯儀器有限公司；SMART生物顯微鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限公司。

X-5樹脂，安徽三星樹脂科技有限公司生產(chǎn)；95%乙醇，三氯乙酸，6%苯酚，硫酸（分析純），乙醚，丙酮；淀粉肉湯液：將肉湯培養(yǎng)基3 g加于100 ml蒸餾水煮沸溶解，再加入可溶性淀粉1 g，煮沸溶解，待冷卻后加入1滴臺盼藍(lán)，混勻后煮沸滅菌，置4℃保存，使用時溫浴溶解；2%雞紅細(xì)胞懸液：實驗前臨時取雞血用肝素鈉抗凝，離心棄去上清液，用生理鹽水洗滌3次后得雞血紅細(xì)胞，取1 ml加到50 ml生理鹽水即可。

1.3 實驗動物

健康KM成年小鼠，SPF級，體重20～50 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。實驗動物質(zhì)量合格證號：SCXK（粵）2008-0002，合格證號：0070152。實驗動物中心SPF實驗室條件嚴(yán)格控制，溫度20～25℃，日溫度差≤3℃。濕度為40%～50%，空氣清潔度10 000級，14 h黑暗，人工光照照明（上午8：00～下午6：00）。飼養(yǎng)期給予SPF鼠飼料，添加足量飼料，引用蒸餾水。

1.4 方法

1.4.1 多糖試劑的制備

1.4.1.1 APS分離純化 以黃芪質(zhì)量10倍水量煎煮，煎煮3次，合并煎煮液，上X-5樹脂柱，收集流出液并濃縮，加95%乙醇至使乙醇占總重量的70%，離心后棄去上清液，沉淀用蒸餾水溶解，加液體體積4%三氯乙酸，離心后取上清液，再次加95%乙醇至使乙醇占總重量的70%，離心后取沉淀，按照95%乙醇→丙酮→乙醚的順序洗滌得粗多糖。

1.4.1.2 多糖含量測定 采用苯酚-硫酸法。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密稱取充分干燥至恒重10 mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，加去離子水溶解，配制100 ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.1 g/L，分別吸取配制好的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 ml于10 ml容量瓶中，分別加去離子水至2 ml，加入5%苯酚溶液1 ml，搖勻后迅速加入5 ml濃硫酸顯色，振蕩5 min，在沸水浴上加熱15 min，取出后于冷水浴中冷卻30 min，以空白為參照，用紫外分光光度計在490 nm處測吸光度（A）（表1），標(biāo)準(zhǔn)曲線：A=21.371C+0.1366，R2=0.9943，表明葡萄糖濃度（C）在0.005～0.0225 mg/ml線性關(guān)系良好。

稱取粗多糖產(chǎn)品0.10 g，配制成濃度為1 mg/ml的樣品溶液，準(zhǔn)確移取5 ml樣品溶液稀釋到0.1 mg/ml，取2 ml稀釋后的樣品溶液加入5%苯酚溶液1 ml，搖勻后迅速加入5 ml濃硫酸顯色，振蕩5 min，在沸水浴上加熱15 min，取出后于冷水浴中冷卻30 min，按照苯酚-硫酸法于490 nm處測定其A值，代入線性回歸方程計算濃度，計算出粗多糖中的糖百分含量為41%，其中A=0.346。

1.4.1.3 APS試劑配制 將粗多糖溶解成0.8、0.4 mg/ml水溶液，作為高糖溶液和低糖溶液。

1.4.2 分組、造模與給藥

將小鼠完全隨機分為APS高劑量組（高糖組）、低劑量組（低糖組）、空白對照組，每組14只。參考文獻(xiàn)[2]的方法，采用力竭游泳和控制攝食法建立氣虛小鼠模型。小鼠置于水深50 cm的玻璃箱水池中，水溫（37±1）℃，要求小鼠沉入水底，經(jīng)10 s后仍不能返回水面為力竭標(biāo)準(zhǔn)。每天均游泳至力竭并隔日喂食。其中高糖組每天2次按0.4 mg/10 g劑量灌服高糖溶液；低糖組每天2次按0.2 mg/10 g劑量灌服低糖溶液；對照組每天2次灌服蒸餾水0.5 ml/10 g，持續(xù)1周。

1.4.3 指標(biāo)測定

1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實驗的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液，以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實驗小鼠，并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水，輕揉小鼠腹部，使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液，制臨時裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)，平均吞噬個數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)。

1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后，摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4]，以脾臟重量（mg）、胸腺重量（mg）分別與小鼠體重（g）的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

運用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個數(shù)顯著增高（P<0.05）。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對照組吞噬率，高糖組平均吞噬個數(shù)>低糖組平均吞噬個數(shù)>對照組平均吞噬個數(shù)，表明APS可增強小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力（表2、圖1）。

2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高（P<0.05）。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對照組胸腺指數(shù)，高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對照組脾指數(shù)（表3）。

3 討論

氣虛證是臨床上常見的證候，常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)?！疤撜哐a之”，氣虛則補氣。黃芪味甘性微溫，具有補氣升陽、固表、利水消腫等功效，臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用，有實驗發(fā)現(xiàn)，正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后，測其耗氧量比服藥前逐漸增加，能加強正常心臟收縮，對哀竭的心臟有強心作用，能使冠狀血管和腎臟血管擴張，并使全身末梢血管擴張，皮膚血液循環(huán)暢順，使高血壓患者血壓下降。利尿試驗證明黃芪有中等的利尿作用。實驗證明黃芪對防止和治療大鼠實驗性胃潰瘍有一定的作用[5]。

中藥多糖具有增強單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補體系統(tǒng)的作用，從而調(diào)節(jié)機體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分，有提高機體免疫力的作用；對垂體后葉素引起的心肌缺血有保護作用，并明顯對抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫；還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用，可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降；對60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

氣虛證動物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2]，目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強迫運動、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運動導(dǎo)致疲勞，屬中醫(yī)的“勞倦”范疇，所謂“勞者氣耗”（《素問·舉痛論》），“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機，而且這種造模方法比較簡單，具有可控性強和重復(fù)穩(wěn)定的特點。同樣，在運動醫(yī)學(xué)臨床實踐中，發(fā)現(xiàn)運動員的運動性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示，運動員在運動疲勞前后脈圖的變化情況，發(fā)現(xiàn)運動員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示，通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后，經(jīng)過一定時間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮，就本次實驗觀察的胸腺，脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕，而胸腺是機體的免疫中樞器官，擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用，與機體免疫功能密切相關(guān)。實驗發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降，表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對上述指標(biāo)有顯著改善作用，表明APS具有改善機體免疫功能的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳丹丹，宋亮，劉麗娟.黃芪多糖對肺氣虛小鼠免疫調(diào)節(jié)作用[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，30（3）：35.

[2] 陳學(xué)東，田道法.氣虛證動物模型研究進(jìn)展及氣虛型鼻病動物模型建立的探討[A]//全國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會論文匯編[C].2004.

[3] 余寅，顧軍.觀察小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活動[J].生物學(xué)教學(xué)，2001，26（1）：34.

[4] 劉繼平，許海，胡銳，等.梔子油對S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數(shù)的影響[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25（2）：112-114.

[5] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編（上冊）[J].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

[6] 劉杰磨，費櫻.戴氏蟲草和粉被蟲草多糖對巨噬細(xì)胞等活性的影響[J].免疫學(xué)雜志，2001，17（3）：189.

[7] 袁靜，王平全.香菇多糖抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J].中國藥房，1999，10（5）：233.

[8] 張哲文，魏虎來，蘇海翔.硒酸酯多糖的免疫調(diào)節(jié)與抗腫瘤作用[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，31（2）：89-91.

[9] 鄭堯，何景華，高建華，等.甘草多糖對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21（2）：254-255.

[10] 石磊，壬勇，石勇，等.虎眼萬年青多糖的原子力顯微鏡觀察[J].吉林大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2003，29（1）：32-35.

[11] 陳金煙，盧政輝.真菌多糖的免疫效應(yīng)抗腫瘤作用機理的探討[J].福建輕紡，2002，（4）：427.

[12] 任莉莉，魏影非，杜惠蘭，等.人參抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2005，27（8）：947.

[13] 周夢圣，李秋蓮.模擬中醫(yī)氣虛動物模型的研究[J].中醫(yī)雜志，1989，30（9）：41.

（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：林利利）

1.4.3 指標(biāo)測定

1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實驗的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液，以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實驗小鼠，并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水，輕揉小鼠腹部，使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液，制臨時裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)，平均吞噬個數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)。

1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后，摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4]，以脾臟重量（mg）、胸腺重量（mg）分別與小鼠體重（g）的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

運用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個數(shù)顯著增高（P<0.05）。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對照組吞噬率，高糖組平均吞噬個數(shù)>低糖組平均吞噬個數(shù)>對照組平均吞噬個數(shù)，表明APS可增強小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力（表2、圖1）。

2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高（P<0.05）。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對照組胸腺指數(shù)，高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對照組脾指數(shù)（表3）。

3 討論

氣虛證是臨床上常見的證候，常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)。“虛者補之”，氣虛則補氣。黃芪味甘性微溫，具有補氣升陽、固表、利水消腫等功效，臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用，有實驗發(fā)現(xiàn)，正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后，測其耗氧量比服藥前逐漸增加，能加強正常心臟收縮，對哀竭的心臟有強心作用，能使冠狀血管和腎臟血管擴張，并使全身末梢血管擴張，皮膚血液循環(huán)暢順，使高血壓患者血壓下降。利尿試驗證明黃芪有中等的利尿作用。實驗證明黃芪對防止和治療大鼠實驗性胃潰瘍有一定的作用[5]。

中藥多糖具有增強單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補體系統(tǒng)的作用，從而調(diào)節(jié)機體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分，有提高機體免疫力的作用；對垂體后葉素引起的心肌缺血有保護作用，并明顯對抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫；還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用，可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降；對60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

氣虛證動物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2]，目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強迫運動、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運動導(dǎo)致疲勞，屬中醫(yī)的“勞倦”范疇，所謂“勞者氣耗”（《素問·舉痛論》），“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機，而且這種造模方法比較簡單，具有可控性強和重復(fù)穩(wěn)定的特點。同樣，在運動醫(yī)學(xué)臨床實踐中，發(fā)現(xiàn)運動員的運動性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示，運動員在運動疲勞前后脈圖的變化情況，發(fā)現(xiàn)運動員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示，通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后，經(jīng)過一定時間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮，就本次實驗觀察的胸腺，脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕，而胸腺是機體的免疫中樞器官，擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用，與機體免疫功能密切相關(guān)。實驗發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降，表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對上述指標(biāo)有顯著改善作用，表明APS具有改善機體免疫功能的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳丹丹，宋亮，劉麗娟.黃芪多糖對肺氣虛小鼠免疫調(diào)節(jié)作用[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，30（3）：35.

[2] 陳學(xué)東，田道法.氣虛證動物模型研究進(jìn)展及氣虛型鼻病動物模型建立的探討[A]//全國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會論文匯編[C].2004.

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[8] 張哲文，魏虎來，蘇海翔.硒酸酯多糖的免疫調(diào)節(jié)與抗腫瘤作用[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，31（2）：89-91.

[9] 鄭堯，何景華，高建華，等.甘草多糖對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21（2）：254-255.

[10] 石磊，壬勇，石勇，等.虎眼萬年青多糖的原子力顯微鏡觀察[J].吉林大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2003，29（1）：32-35.

[11] 陳金煙，盧政輝.真菌多糖的免疫效應(yīng)抗腫瘤作用機理的探討[J].福建輕紡，2002，（4）：427.

[12] 任莉莉，魏影非，杜惠蘭，等.人參抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2005，27（8）：947.

[13] 周夢圣，李秋蓮.模擬中醫(yī)氣虛動物模型的研究[J].中醫(yī)雜志，1989，30（9）：41.

（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：林利利）

1.4.3 指標(biāo)測定

1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實驗的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液，以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實驗小鼠，并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水，輕揉小鼠腹部，使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液，制臨時裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)，平均吞噬個數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個數(shù)。

1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后，摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4]，以脾臟重量（mg）、胸腺重量（mg）分別與小鼠體重（g）的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

運用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個數(shù)顯著增高（P<0.05）。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對照組吞噬率，高糖組平均吞噬個數(shù)>低糖組平均吞噬個數(shù)>對照組平均吞噬個數(shù)，表明APS可增強小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力（表2、圖1）。

2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

與空白對照組比較，高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高（P<0.05）。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對照組胸腺指數(shù)，高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對照組脾指數(shù)（表3）。

3 討論

氣虛證是臨床上常見的證候，常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)?！疤撜哐a之”，氣虛則補氣。黃芪味甘性微溫，具有補氣升陽、固表、利水消腫等功效，臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用，有實驗發(fā)現(xiàn)，正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后，測其耗氧量比服藥前逐漸增加，能加強正常心臟收縮，對哀竭的心臟有強心作用，能使冠狀血管和腎臟血管擴張，并使全身末梢血管擴張，皮膚血液循環(huán)暢順，使高血壓患者血壓下降。利尿試驗證明黃芪有中等的利尿作用。實驗證明黃芪對防止和治療大鼠實驗性胃潰瘍有一定的作用[5]。

中藥多糖具有增強單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補體系統(tǒng)的作用，從而調(diào)節(jié)機體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分，有提高機體免疫力的作用；對垂體后葉素引起的心肌缺血有保護作用，并明顯對抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫；還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用，可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降；對60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

氣虛證動物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2]，目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強迫運動、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運動導(dǎo)致疲勞，屬中醫(yī)的“勞倦”范疇，所謂“勞者氣耗”（《素問·舉痛論》），“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機，而且這種造模方法比較簡單，具有可控性強和重復(fù)穩(wěn)定的特點。同樣，在運動醫(yī)學(xué)臨床實踐中，發(fā)現(xiàn)運動員的運動性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示，運動員在運動疲勞前后脈圖的變化情況，發(fā)現(xiàn)運動員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示，通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后，經(jīng)過一定時間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮，就本次實驗觀察的胸腺，脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕，而胸腺是機體的免疫中樞器官，擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用，與機體免疫功能密切相關(guān)。實驗發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降，表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對上述指標(biāo)有顯著改善作用，表明APS具有改善機體免疫功能的作用。

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（收稿日期：2014-05-12 本文編輯：林利利）