依達拉奉對犬自體腎移植外周血中炎性因子的影響

喬振奎,張卓然,田立志,王科亮,張 銳

(哈爾濱醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院,1.泌尿外科; 2.藥劑科,黑龍江 哈爾濱,150001;3.大慶市紅崗區(qū)人民醫(yī)院,黑龍江 大慶,163000; 4.黑龍江省醫(yī)院 泌尿外科,黑龍江 哈爾濱,150001)

腎移植對于終末期腎病是一個有效的治療方法。腎移植術(shù)過程中不可避免地會引起缺血再灌注損傷，由于免疫抑制劑的應用，腎移植缺血再灌注損傷成為導致移植后腎衰竭的主要原因。因此，如何減輕腎臟缺血再灌注損傷是腎移植領(lǐng)域研究熱點之一。依達拉奉是一種氧自由基清除劑和新型神經(jīng)保護藥物，其在腦血栓的形成和短暫腦缺血時具有保護效應[2]。許多研究[3-4]顯示，依達拉奉對器官缺血再灌注損傷具有保護效應，包括對非移植情況下腎缺血再灌注損傷的保護。作者前期的實驗證明，依達拉奉對犬自體腎移植具有保護作用，其能夠減輕腎脂質(zhì)過氧化反應，保護腎功能。本研究探討依達拉奉對腎移植過程中炎性因子的影響，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

雄性健康成年雜種犬12只(哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物中心提供)，體質(zhì)量15～20 kg,隨機分為依達拉奉組(ED組)和生理鹽水組(PS組)，每組6只。Bear1000型呼吸機、灌注裝置(用三升靜脈營養(yǎng)袋加壓力表自制)、自動生化儀、i-Star血氣分析儀、PM2000監(jiān)護儀、壓力換能器、Swan-ganz導管(ARROW)、電子輸液泵、離心機等儀器。TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10 (美國ADL生物公司)。

1.2 模型的建立

手術(shù)方法：犬禁食水一夜，麻醉前皮下注射丁丙諾啡0.02 mg/kg,上腔靜脈置入深靜脈導管，預防性使用抗生素頭孢唑林(22 mg/kg靜脈注射)。麻醉誘導使用氯胺酮(2 mg/kg靜脈注射)和地西泮(2 mg/kg靜脈注射)，麻醉維持使用異氟醚，吸入100%氧。硬膜外注射嗎啡(0.1 mg/kg靜脈注射)用于延長術(shù)后止痛。腹部清潔消毒，正中切口，切開腎周組織暴露左腎，肝素化。用無損傷血管鉗阻斷腎動靜脈并分別切斷；游離輸尿管并在膀胱水平切斷，腎移植入同側(cè)的髂窩。ED組在術(shù)中靜脈內(nèi)給予依達拉奉10 mg/kg,術(shù)后第1、2、3天各予依達拉奉10 mg/kg; PS組同法使用相同體積的生理鹽水。

1.3 檢測方法

分別在麻醉前(T0)、術(shù)中(T1)、術(shù)后1 d(T2)與術(shù)后3 d(T3)經(jīng)靜脈采血2 mL檢測TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的水平。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的含量。將血清在室溫下解凍,50 ℃溫育。洗滌，加底物，離心，取上清液，上酶標儀測定。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPPS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料組間比較采用t檢驗，組內(nèi)比較采用重復測量方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2組血漿TNF-α、IL-6、IL-8含量從T1期開始上升，在T1期達到峰值,T2期回落，至T3期仍高于T0期(P<0.05)。ED組上述指標升高的幅度明顯低于PS組(P<0.05)。見表1、2、3。2組血漿IL-10含量從T1期開始上升，在T1期達到峰值,T2期回落，至T3期仍高于T0期(P<0.05)。2組各時點IL-10濃度比較無顯著差異(P>0.05)。見表4。

表1 2組TFN-α含量檢測結(jié)果比較

表2 2組IL-6含量檢測結(jié)果比較

表3 2組IL-8含量檢測結(jié)果比較

表4 2組IL-10含量檢測結(jié)果比較

3 討 論

移植后腎衰竭是腎移植術(shù)后的主要并發(fā)癥之一，缺血再灌注損傷是導致其產(chǎn)生的主要原因。缺血再灌注損傷(IRI)是指組織缺血后一旦恢復灌注，原來缺血的組織細胞不但不能迅速恢復正常的代謝機能，反而加重其損傷，表現(xiàn)為充血、水腫等[5-8]。IRI的存在增加了急性排斥反應和移植后慢性腎功能不全的風險，并可能導致遠期移植物的功能異常[9-12]。參與腎缺血再灌注損傷的介質(zhì)包括細胞因子、氧自由基、蛋白水解酶、磷脂酶、花生四烯酸代謝產(chǎn)物、血小板活化因子、補體、金屬蛋白酶和內(nèi)皮素等。再灌注損傷炎性因子的產(chǎn)生與急劇“堆積”，通過攻擊奪獲生物膜脂質(zhì)多聚不飽和脂肪酸側(cè)鏈上的氫原子等過程，造成膜流動與鈣離子通透性增加，破壞膜結(jié)構(gòu)完整性，鈣跨膜內(nèi)流與超負荷，最終導致細胞損傷或死亡。因此，抑制炎性因子是預防腎移植再灌注損傷的重要措施。

依達拉奉(3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one)是一種氧自由基清除劑和新型神經(jīng)保護藥物，常用于腦血栓的急性治療[13-15]。其在腦血栓的形成和短暫腦缺血時具有保護效應。許多研究顯示，依達拉奉對器官缺血再灌注損傷具有保護效應，包括對非移植情況下腎缺血再灌注損傷的保護。研究發(fā)現(xiàn)，依達拉奉可與-OH或過氧基反應，抑制脂質(zhì)過氧化和細胞損傷依達拉奉可以抑制由H2O2和Fe3+反應產(chǎn)生的細胞損傷因子-OH,對水楊酸和-OH的反應產(chǎn)物對輕基苯甲酸二聚體的生成具有抑制作用，對-OH所致的亞油酸的過氧化有抑制作用。Matsuyama等[16]通過鼠在體缺血再灌注模型證實，依達拉奉可通過清除氧自由基預防中性粒細胞激活，保護腎缺血再灌注損傷。崔華慶等[17]對依達拉奉在活體腎移植缺血再灌注損傷中的保護作用進行研究，顯示依達拉奉可以提高SOD活性，減少MDA的產(chǎn)生，減輕腎臟缺血再灌注損傷，有效地保護了腎臟功能。作者前期的實驗證明，依達拉奉對犬自體腎移植具有保護作用，其能夠減輕腎脂質(zhì)過氧化反應，保護腎功能。本研究結(jié)果顯示,2組外周血T0期比較各因子濃度無顯著差別; T1、T2、T3各期TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10濃度較T0期明顯升高(P<0.05),T1期劇升,T2期達到高峰,T3期略回落但仍高于T0期; ED組TNF-α、IL-6、IL-8升高的幅度在T1、T2、T3期小于PS組(P<0.05); 2組IL-10比較無顯著差異(P>0.05)。結(jié)果顯示腎移植炎性因子顯著升高，可能與腎移植缺血再灌注損傷有關(guān)；依達拉奉能減少炎性因子的釋放，亦是其腎保護作用的機制。

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