南天竹種子提取物對三氧化二砷腎毒性保護作用研究*

★ 彭財英 劉建群 舒積成 張銳

(江西中醫(yī)藥大學 江西 南昌 330004)

三氧化二砷(As2O3)是傳統(tǒng)中藥(毒藥)砒霜中的主要成分。現(xiàn)代藥理學和分子生物學證明了As2O3治療腫瘤的有效性并具有廣譜抗癌作用,尤其治療急性早幼粒細胞性白血病更是取得滿意的療效[1-4]。目前臨床上用于治療復發(fā)性和頑固性急性早幼粒細胞白血病(APL)的制劑已有亞砷酸氯化鈉注射液(伊泰達)及三氧化砷片(Trisenox)。三氧化二砷注射液為FDA第一個批準上市的中藥抗白血病藥物，也被血液腫瘤學界公認為20世紀最重要的里程碑式的藥物之一。然而As2O3屬劇毒藥,在臨床上治療安全窗口較小，在應用中會產生較多不良反應，主要有心功能紊亂，血糖血鉀過低，呼吸衰竭，腦梗塞，腦出血；此外還有白細胞增多，皮膚干癢著色，咽干，惡心，嘔吐，腹瀉，末梢神經(jīng)反應，骨關節(jié)疼痛，顏面水腫，肝功能損害，心、腎毒性等[5]毒副作用，大大限制了其臨床應用。據(jù)以上現(xiàn)狀，我們研究組通過查閱大量文獻，發(fā)現(xiàn)在清代趙學敏《本草綱目拾遺》中有記載：“解吡毒劉霞裳云：凡人食吡垂死者，用南天竹子四兩，擂水服之立活。此方劉在松江府署親試驗者。無鮮者，即用干子一二兩煎湯服，亦可?！盵6]由于三氧化二砷是中藥吡霜的主要成分，故我們推測南天竹子可能通過拮抗三氧化二砷毒性而發(fā)揮解毒作用。據(jù)此，本實驗開展了南天竹種子提取物對三氧化二砷的慢性腎毒性影響的研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與儀器

1.1 材料 南天竹種子于2010年9月采自江西省南昌市，原植物由江西中醫(yī)藥大學藥用植物研究室付小梅副教授鑒定為南天竹(NandinadomesticaThunb)種子，憑證標本(No.100905)保存于江西中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室；亞砷酸氯化鈉注射液(20090222，黑龍江哈爾濱醫(yī)大藥業(yè)有限公司)；雄性SD大鼠，體質量為180～220g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK(湘)2009-0004；福爾馬林溶液。

1.2 儀器 GTR10-1冷凍高速離心機(北京時代北利離心機有限公司)；SABA PM4000全自動生化分析儀(意大利AMS公司)；SYD-S3020石蠟切片機(沈陽譽德電子儀器有限公司)。

2 方法

2.1 南天竹種子水提物的制備 取南天竹種子藥材，粗粉，加8倍量的水煎煮3次，每次2小時，合并煎煮液，經(jīng)減壓濃縮得南天竹種子提取物。

2.2 分組與給藥 將48只SD大鼠隨機分為空白對照組、三氧化二砷模型組(10 mg/kg)、三氧化二砷與南天竹種子提取物聯(lián)合用藥組(南天竹種子20 g/kg+三氧化二砷10 mg/kg)、南天竹提取物組(南天竹種子20g/kg)，經(jīng)胃管灌胃，每天1次，實驗共2周。于第2周末采集血尿標本進行生化檢測。

2.3 體重變化與腎臟系數(shù)的測定 每天灌胃前測量大鼠體重，調整給藥劑量。計算三氧化二砷給藥前與實驗結束前大鼠體重的差值為體重的變化值。大鼠處死取腎臟后,立即新鮮稱重，計算腎臟系數(shù)。腎臟系數(shù)(%)=腎臟重量(g)/體重(g)×100%。

2.4 血肌酐、尿肌酐、尿素氮及內生肌酐清除率的測定 血及尿肌酐測定采用去蛋白苦味酸比色法。尿素氮采用PNP-NAG(尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶)兩點法。內生肌酐清除率(Ccr)=尿肌酐濃度×尿量/血肌酐濃度。

2.5 腎皮質勻漿的測定 采用羥胺法、可見分光光度法、TBA法，分別測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)。

2.6 腎組織形態(tài)學的檢測 腎組織標本用福爾馬林浸泡做成常規(guī)石蠟切片，染色，顯微觀察腎組織及細胞受損情況。

3 結果

3.1 聯(lián)合給藥組及三氧化二砷單獨給藥組對實驗動物體重及腎臟系數(shù)的影響 表1結果顯示，空白對照組及南天竹提取物給藥組重量有所增加，而三氧化二砷單獨給藥組體重降低最多，聯(lián)合給藥組重量降低不明顯，提示南天竹提取物可顯著改善三氧化二砷引起的體重減輕。聯(lián)合給藥組腎臟系數(shù)有所增加，但三氧化二砷單獨給藥組腎臟系數(shù)顯著增加，提示南天竹提取物可顯著地改善三氧化二砷引起的腎臟系數(shù)升高。

3.2 各組大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肌酐清除率(Ccr)變化 表2結果顯示，空白對照組與南天竹種子提取物給藥組大鼠血肌酐、尿素氮和肌肝清除率沒有明顯的變化，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。而三氧化二砷單獨給藥組與聯(lián)合給藥組相比，上述指標均有顯著升高，提示南天竹種子提取物可顯著改善三氧化二砷引起的血清BUN、Scr升高。

表1 大鼠體重及腎臟系數(shù)的影響

表2 大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肌酐清除率(Ccr)變化

表3 大鼠腎皮質勻漿中MDA、CAT、SOD水平變化

圖1 聯(lián)合用藥組(10×1) 圖2 聯(lián)合用藥組(10×2) 圖3 單獨三氧化二砷給藥組(10×1) 圖4 單獨三氧化二砷給藥組(10×2)

3.3 大鼠腎皮質勻漿中MDA、CAT、SOD水平變化 表3結果顯示，空白對照組及南天竹種子提取物給藥組MDA、CAT、SOD變化不顯著，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。三氧化二砷單獨給藥組與上兩組比較，MDA、CAT、SOD水平顯著升高；而三氧化二砷單獨給藥組與聯(lián)合給藥組相比，上述

指標均有顯著升高，提示南天竹種子提取物可顯著改善三氧化二砷引起的MDA、CAT、SOD水平升高。

3.4 腎組織結構變化 聯(lián)合用藥組與單獨三氧化二砷給藥組相比，聯(lián)合給藥組腎組織可見局灶區(qū)間質疏松、水腫，伴有纖維結締組織增生，單獨可見髓質疏松，病變輕微，總體影響較??；而單獨三氧化二砷組腎組織多處可見充血，腎小管擴張明顯，纖維結締組織增生，炎性細胞浸潤，見圖1～圖4。

4 討論

三氧化二砷(As2O3)是傳統(tǒng)中藥(毒藥)砒霜中的主要成分，是一種新型的抗腫瘤藥物，也是目前證據(jù)最為充分的能夠靶向誘導腫瘤干細胞凋亡的天然藥物，但其臨床毒副作用也屢見報道。三氧化二砷其毒副作用的機制尚不明確，其中一些研究報道其毒副作用可能是通過抑制GSH等抗氧化酶活性或選擇性增強細胞色素P450依賴的單加氧酶活性而產生氧化性損害，進而出現(xiàn)相應的代謝障礙，表現(xiàn)有心、肝及腎臟毒性[7,8]。

南天竹種子中含有豐富的酚酸類成分[9,10]，酚酸類化合物具有較強的抗氧化作用。本研究結果顯示，南天竹種子提取物和三氧化二砷聯(lián)合給藥與三氧化二砷單獨給藥相比較，大鼠血肌酐、尿素氮水平顯著下降，Ccr下降減輕，腎皮質勻漿MDA水平下降，SOD和CAT水平升高，并且組織形態(tài)及體重減輕得到顯著改善。表明南天竹種子提取物對三氧化二砷所致的腎毒性有較好的保護作用。

因此，三氧化二砷通過與南天竹種子配伍可降低其毒性,擴大在臨床上治療的安全窗口，提高其臨床應用的安全性。今后我們應進一步研究南天竹種子提取物預防三氧化二砷毒性的確切機制及其潛在作用。

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