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    中藥冬瓜皮的質量控制研究

    2014-08-28 09:29:08王一涵侯曉琳董雪蓮
    江西中醫(yī)藥 2014年4期
    關鍵詞:冬瓜皮薄層試管

    ★ 王一涵 侯曉琳 董雪蓮

    (長春中醫(yī)藥大學 吉林 長春 130117)

    冬瓜皮為葫蘆科植物冬瓜Benincasehispida(Thumb.)Cogn.的干燥外層果皮,削取外層果皮,曬干得。冬瓜皮含有多糖類、蠟類、樹脂類、揮發(fā)性物質(如E-2-己烯醛、正己醛、甲酸正己醇酯等)、三萜類化合物(如乙酸異多花獨尾草烯醇酯、粘霉烯醇等)、膽甾醇衍生物、有機酸、煙酸、胡蘿卜素等成分[1]。其味甘、性寒,歸脾、小腸經,具有利尿消腫的功效,用于水腫脹滿,小便不利,暑熱口渴,小便短赤[2]。盡管冬瓜皮藥用歷史悠久,但有關于冬瓜皮的文獻報道較少,關于其科學嚴謹的質量控制方法很少,在《中國藥典》2010版也僅僅收錄了其性狀、顯微鑒別等內容,所以有必要對其質量控制方法進行進一步研究,以控制其質量。本文主要建立了冬瓜皮薄層色譜鑒別法及多糖含量測定方法,以控制冬瓜皮質量。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器與試劑

    紫外分光光度計(型號:TU-1810PC),葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定研究院,批號:110833-200904,供含量測定)。所用試劑均為分析純。

    1.2 藥材與提取物

    1.2.1 藥材 冬瓜皮飲片經長春中醫(yī)藥大學藥學院翁麗麗教授鑒定,符合《中國藥典》2010年版一部106頁冬瓜皮項下的標準。

    1.2.2 提取物 取冬瓜皮藥材600g,分別加入16,13,13倍量水(第一次先浸泡1h),煎煮3次,每次1 h,濾過,合并濾液,干燥,粉成細粉,備用。

    2 鑒別

    取冬瓜皮水煎提取物2g,加甲醇30mL,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為供試品溶液。取冬瓜皮藥材2g,加甲醇30mL,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述兩種溶液各5~10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇試液,待揮干后,在105°C下加熱顯色。供試品色譜中,在與藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,如圖1。

    圖1 冬瓜皮薄層色譜圖

    3 多糖含量測定方法[3,4]

    3.1 對照品溶液的制備 精密稱定葡萄糖對照品5mg,置50mL量瓶中,加水溶解,定容至50mL,搖勻,即得對照品濃溶液(每1mL含葡萄糖0.1mg)。

    3.2 供試品溶液的制備 取水煎提取物0.5g,精密稱定,置于50mL錐形瓶中,加入水40mL,密塞,超聲處理30min,取出放冷,定容至50mL,濾過,取濾液1mL,置于50mL容量瓶中,用水定容,得供試品溶液。

    3.3 測定波長的選擇 (1) 葡萄糖標準品的波長掃描 精密量取上述葡萄糖對照品溶液0.5mL,再精密加入0.5mL的水置于具塞試管中,加入1mL 5%苯酚,搖勻后迅速加入5mL濃硫酸,混勻,于沸水浴加熱20min后取出,放入冷水浴中,冷卻15min。然后于400~600nm進行掃描,測定最大吸收波長。

    (2)冬瓜皮樣品波長掃描 取供試品溶液1mL,置于具塞試管中,同葡萄糖對照品方法顯色。然后于400~600nm進行掃描,測定最大吸收波長。

    結果葡萄糖標準品和冬瓜皮供試品均在490nm處有最大吸收,故選擇490為檢測波長。

    3.4 線性關系考察 精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1 ,0.2 ,0.4 ,0.6 ,0.8 ,1.0mL分別置于10mL容量瓶中,加水至2 mL,再取1mL置于具塞試管中,加入1mL 5%苯酚,搖勻后迅速加入5mL濃硫酸,混勻,于沸水浴加熱20min后,取出,放入冷水浴中,冷卻15min。在490nm處測量吸光度,并繪制標準曲線,計算回歸方程:Y=0.00898X-0.0233,r=0.9998,說明多糖在10.08~100.80μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

    3.5 精密度試驗 精密量取葡萄糖對照品溶液1mL,依 “3.4”項下方法顯色,連續(xù)測定6次,記錄吸光度A值,并計算RSD%。RSD值為0.268%,結果表明儀器、方法的精密度良好。

    3.6 穩(wěn)定性試驗 精密稱取冬瓜皮水煎提取物約0.5g,按照供試品溶液的方法制備;精密吸取1.5mL供試品溶液置于具塞試管中,依 “3.4”項下方法顯色。以相應試劑為空白,在490nm處測定吸光度,并分別記錄時間為0,5,10,15,20,25,30min的吸光度,并計算RSD%。同樣吸取對照品溶液1mL,依法測定,計算RSD%。結果:標準品的RSD值0.114%,供試品RSD值為0.106%,說明對照品溶液和樣品溶液在30min之內穩(wěn)定性良好。

    3.7 重現性試驗 精密稱取冬瓜皮水煎提取物約0.5g,稱取6份,按供試品溶液制備方法處理樣品;精密吸取供試品溶液1mL置具塞試管中,依 “3.4”項下方法顯色。在490nm處測量吸光度,并計算含量,考察重現性。結果,RSD值為0.93%,重現性良好。

    3.8 加樣回收率試驗 精密稱取冬瓜皮水煎提取物(總多糖含量為245.76mg/g)0.5g,平行稱定6份,照供試品方法制備。取0.4mL溶液置具塞試管中,再加入0.4mL濃度為0.100 8mg/mL的葡萄糖標準品置于具塞錐形瓶中,在加入0.2mL的水,依 “3.4”項下方法顯色。在490nm處測量吸光度值,并計算加樣回收率,結果見表1。結果表明:回收率良好,方法可行。

    表1 加樣回收率試驗

    4 討論

    4.1 冬瓜皮主要有效成分為冬瓜多糖,通過對多糖含量測定方法進行對比篩選,最終確定采用苯酚-硫酸法進行多糖的含量測定,該方法操作簡便,靈敏度高,科學穩(wěn)定,可作為冬瓜皮含量控制的有效方法。

    4.2 冬瓜皮用藥歷史悠久,但其薄層色譜鑒別方法文獻至今未有報道。本實驗通過大量條件摸索,首次確定了冬瓜皮薄層色譜鑒別條件,該方法穩(wěn)定可行,專屬性強,彌補了冬瓜皮在薄層色譜鑒別上的空白,在以后的應用中可作為制劑等的薄層鑒別方法。

    4.3 本文建立了冬瓜皮薄層色譜鑒別法及多糖含量測定方法,首次建立了科學嚴謹的冬瓜皮質量控制方法,彌補了冬瓜皮質量控制方面的空白,具有較高的學術價值,同時對于今后規(guī)范藥用冬瓜皮質量具有深遠意義。

    [1]車雙輝,杜琪林.冬瓜中活性成分的提取分離研究[J]. 食品研究與開發(fā),2004,25(1):104-105.

    [2]鄧居林.冬瓜飲加減治療糖尿病21例[J]. 中醫(yī)藥學刊,2003,21(6):898-899.

    [3]徐翠蓮,杜林洳,樊素芳,等.多糖的提取、分離純化及分析鑒定方法研究[J]. 河南科學,2009,27(12):1 524-1 529.

    [4]王新琪 ,蔡廣知 ,韓 梅 ,等.冬瓜皮多糖提取工藝研究[J]. 吉林農業(yè)大學學報,2010,32(1):54-57,61.

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