肺炎患兒外周血T淋巴細(xì)胞表型分析

張文杰 馮巖 王智華 張哲 馮志山

·論著·

肺炎患兒外周血T淋巴細(xì)胞表型分析

張文杰 馮巖 王智華 張哲 馮志山

目的探討肺炎患兒外周血淋巴細(xì)胞膜上CD+3, CD+3CD+4,CD+3CD+8及CD+4CD+25(調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,regulatory T,Treg)的分布情況，了解患兒的機(jī)體免疫功能與肺炎的關(guān)系及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肺炎患兒中的表達(dá)情況。方法采用流式細(xì)胞術(shù)分析75例肺炎患兒(試驗(yàn)組)外周血淋巴細(xì)胞中CD+3, CD+3CD+4，CD+3CD+8及CD+4CD+25表達(dá)情況并與30例健康對照進(jìn)行比較。結(jié)果試驗(yàn)組CD+3，CD+3CD+8細(xì)胞均低于健康對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；試驗(yàn)組CD+3CD+4, CD4/CD8均低于對照組，試驗(yàn)組與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；試驗(yàn)組CD+4CD+25表達(dá)大于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論肺炎患兒CD+3,CD+3CD+4,CD+3CD+8細(xì)胞表達(dá)均低于對照組，CD4/CD8比值降低，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肺炎患者外周血細(xì)胞中的表達(dá)均高于正常對照，肺炎患兒存在免疫功能異常。

肺炎；CD3+；CD3+CD4+；CD3+CD8+； CD4+CD25+；流式細(xì)胞術(shù)

肺炎是小兒所患疾病中的常見病、多發(fā)病，由于兒童期機(jī)體各項(xiàng)機(jī)制發(fā)育還不完善，尤其是在冬春季節(jié)，由于空氣氣溫、濕度變化較大，空氣污染等原因，兒童非常容易發(fā)生肺炎，嚴(yán)重影響兒童的身體健康，它是一類感染性疾病，主要病因是由病毒或細(xì)菌及支原體感染[1]，若治療不及時(shí)可能會(huì)給患兒帶來終生傷害，而現(xiàn)階段治療小兒肺炎的主要方法為經(jīng)靜脈滴注治療藥物，本文利用流式細(xì)胞術(shù)分析了肺炎患者及健康人外周血T淋巴細(xì)胞的表型分類，以探討各型T淋巴細(xì)胞在炎癥發(fā)生時(shí)機(jī)體內(nèi)的變化及可能發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年6月至2013年12月我院收治的肺炎患者75例，均為初診患者，其中男40例，女35例；年齡1～7歲，平均年齡(4.6±3.1)歲；設(shè)為試驗(yàn)組；健康對照(均為兒保體檢者)30例，男17例，女13例；年齡1～6.5歲，平均年齡(3.9±2.2)歲；設(shè)為對照組。2組性別比及年齡均匹配，2組資料中的個(gè)體均無免疫功能缺陷及過敏性疾病史，近期未使用影響免疫功能的藥物或制劑。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器設(shè)備： 流式細(xì)胞儀為美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的Epics XL型；移液器為DRAGEN，刻度分別為5～20 μl和21～100 μl,101～1 000 μl三種可調(diào)式加樣器；離心機(jī)為白洋離心機(jī)廠生產(chǎn)的醫(yī)用低速離心機(jī)；混旋器為XK 96-A快速混勻器，由姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)；冰箱為日本東芝公司生產(chǎn)。用于分析T淋巴細(xì)胞表型的試劑分別為CD45FITC-CD4PE-CD8ECD-CD3PC5、CD4 FITC、CD25 PE標(biāo)記，這些均為鼠抗人抗體，溶血素為OPTILYSE-C，它們均為美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)。

1.2.2 試驗(yàn)方法：均空腹采集健康體檢者與肺炎患者外周血液2ml，EDTA-K2抗凝，首先對每例外周血標(biāo)本白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，確保符合要求[白細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍(4.0～10)×109個(gè)/L]，對于不能滿足此條件的標(biāo)本用0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行稀釋或加大標(biāo)本與抗體用量，取4支試管分別加入CD45FITC-CD4PE-CD8ECD-CD3PC5四色抗體及同型對照20 μl及CD25PE 20 μl-CD4FITC 20 μl，IGG1FITC-IGG2PE 20 μl(所有試劑均應(yīng)在4℃冰箱保存，使用前取出，放至室溫后再進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記)，每管加入抗凝全血100 μl，渦旋震蕩器充分混勻，室溫(20～25℃)避光孵育15～20 min，然后每管加入500 μl OPTILYSE-C溶血素，震蕩混勻，室溫避光孵育10 min，每管加入0.9%氯化鈉溶液500 μl，混勻，室溫避光放置10 min，以1 500 r/min離心5 min，吸棄上清液，加入1 ml緩沖液重懸細(xì)胞，用于流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)分析，所有樣本均在采集后2 h內(nèi)標(biāo)記完畢，24 h內(nèi)上機(jī)獲取分析，以同型對照設(shè)定獲取條件，所有實(shí)驗(yàn)均在相同條件下進(jìn)行，至少獲取10 000個(gè)細(xì)胞。

2 結(jié)果

表1 2組，數(shù)據(jù)變化比較

3 討論

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.19.037

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