魚腥草注射液的質(zhì)量穩(wěn)定性研究

曾茂貴 李穎

魚腥草注射液是魚腥草經(jīng)水蒸氣蒸餾的揮發(fā)油飽和水溶液滅菌制成的注射液。主要有效成分包括:癸酰乙醛、甲基正壬酮、月桂烯、癸醛等［1-2］，具有抗病毒、抗菌［3］、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能［4-5］、抑制炎癥對(duì)毛細(xì)血管通透性的增加、鎮(zhèn)痛［6］、抗過敏、平喘、止咳祛痰［7-8］等作用。近年來，魚腥草注射液在臨床上的應(yīng)用日漸廣泛，其不良反應(yīng)也逐漸凸現(xiàn)。由魚腥草注射液靜脈滴注所引起的皮膚過敏、過敏性休克、呼吸困難、水腫、胃腸反應(yīng)、聽力、視力下降等不良反應(yīng)［9-13］時(shí)有發(fā)生。其中某些不良反應(yīng)較為嚴(yán)重［14］，甚至危及生命［15］。有研究表明［16］，魚腥草注射液有效成分之一癸酰乙醛(魚腥草素)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，極易發(fā)生聚合，這可能是魚腥草注射液發(fā)生過敏的原因之一，提示魚腥草注射液的不良反應(yīng)可能與成分有關(guān)。但是，魚腥草注射液中所含的揮發(fā)性成分復(fù)雜且微量，而目前的質(zhì)量控制方法僅限于某個(gè)成分的含量測(cè)定，在其質(zhì)量研究領(lǐng)域留下了空白。本研究采用頂空固相微萃取—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜聯(lián)用方法，由成分分析入手，全面、系統(tǒng)地考察魚腥草注射液中揮發(fā)性成分的種類和含量隨時(shí)間的變化情況，對(duì)魚腥草注射液中揮發(fā)性成分的質(zhì)量穩(wěn)定性達(dá)到比較全面的把握，也為中藥注射液穩(wěn)定性研究提供了思路。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

魚腥草注射液(福建三愛藥業(yè)有限公司，批號(hào):120604，120611，120502)

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Thermo Polaris Q氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Thermo-Finnegan公司)SPME萃取手柄、聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μm)萃取頭、聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB，60μm)萃取頭、15 ml帶聚四氟乙烯瓶塞的頂空取樣瓶(美國(guó)Supelco公司)色譜柱HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)(日本島津公司)ODS(C18)固相萃取頭100 mg/1 ml(大連依利特分析儀器有限公司)601數(shù)顯超級(jí)恒溫水浴(江蘇金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠)CP225D型、BS423S型分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)SHH-250SD型藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱(重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

2 實(shí)驗(yàn)條件與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);載氣為氦氣;進(jìn)樣口溫度 250℃;升溫程序:初始溫度 60℃，保持5分鐘，以6℃/min升溫至240℃;恒流模式，流速 0.8 ml/min，不分流。

2.1.2 質(zhì)譜條件 電子轟擊(EI)離子源;電子能量70 ev;離子阱溫度230℃;質(zhì)量掃描范圍m/z:30～500 amu。質(zhì)譜數(shù)據(jù)運(yùn)用NIST98標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行檢索。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn) 將規(guī)定批號(hào)的魚腥草注射液在溫度25℃ ±2℃、相對(duì)濕度(60±10)%的條件下放置，分別于0個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月取樣一次。

2.2.2 加速穩(wěn)定性試驗(yàn) 將規(guī)定批號(hào)的魚腥草注射液在溫度40℃ ±2℃、相對(duì)濕度(75±5)%的條件下放置，分別于0個(gè)月、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月取樣一次。

2.2.3 頂空固相微萃取—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜法(HS-SPMEGC-MS)分析穩(wěn)定性研究期間樣品所含的揮發(fā)性成分 分別以兩個(gè)不同批號(hào)魚腥草注射液為研究對(duì)象(批號(hào):120611，120502)，精密吸取供試品5 ml，置15 ml帶聚四氟乙烯瓶塞的頂空取樣瓶中，經(jīng)超級(jí)恒溫水浴加熱至55℃，預(yù)平衡40分鐘，使用聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μm)固相微萃取頭頂空萃取40分鐘(55℃)，取樣完畢，于250℃氣相色譜進(jìn)樣口解吸附30秒，按2.1項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行GC-MS成分分析，經(jīng)NIST98標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索結(jié)合人工譜圖解析，確定魚腥草注射液的揮發(fā)性成分。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

魚腥草注射液揮發(fā)性成分HS-SPME-GC-MS總離子流圖見圖1;其中5種含量較高揮發(fā)性成分在加速、長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察過程中變化情況見圖2～4;兩魚腥草注射液五種含量較高揮發(fā)性成分質(zhì)量穩(wěn)定性數(shù)據(jù)見表1、2。

表1 HS-SPME-GC-MS對(duì)魚腥草注射液(批號(hào):120502)揮發(fā)性成分穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表2 HS-SPME-GC-MS對(duì)魚腥草注射液(批號(hào):120611)揮發(fā)性成分穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

圖1 魚腥草注射液揮發(fā)性成分HS-SPME-GC-MS總離子流圖

圖2 魚腥草注射液(120502)5種含量較高揮發(fā)性成分在長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察過程中變化情況

圖3 魚腥草注射液(120611)5種含量較高揮發(fā)性成分在加速穩(wěn)定性考察過程中變化情況

圖4 魚腥草注射液(120611)5種含量較高揮發(fā)性成分在長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察過程中變化情況

4 小結(jié)與討論

通過HS-SPME-GC-MS技術(shù)對(duì)兩個(gè)不同批號(hào)魚腥草注射液中所含的揮發(fā)性成分進(jìn)行加速、長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究，穩(wěn)定性試驗(yàn)0個(gè)月時(shí)，兩批號(hào)魚腥草注射液揮發(fā)性成分種類基本一致，同種成分相對(duì)含量亦相近;從穩(wěn)定性試驗(yàn)過程的各個(gè)階段GC-MS鑒定的揮發(fā)性成分組成情況來看，共有組分有49種，共有化合物峰面積占檢出揮發(fā)性成分總峰面積的百分比均大于95%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:魚腥草注射液中主要揮發(fā)性成分的種類沒有顯著變化，即隨著貯存時(shí)間的推移，未發(fā)現(xiàn)新成分產(chǎn)生，而原有主要揮發(fā)性成分的相對(duì)含量也未發(fā)生大的波動(dòng)。本研究涉及的兩個(gè)批號(hào)魚腥草注射液中5種含量較高揮發(fā)性成分在加速、長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察過程中的變化情況圖證實(shí)了以上結(jié)論。

魚腥草注射液中最主要的兩種藥效成分——魚腥草素和甲基正壬酮含量波動(dòng)甚微，是相當(dāng)穩(wěn)定的。就魚腥草素而言，先前有些文獻(xiàn)報(bào)道［16］其質(zhì)量很不穩(wěn)定，易發(fā)生分解或聚合反應(yīng)，是導(dǎo)致魚腥草注射液不良反應(yīng)的原因之一。但經(jīng)穩(wěn)定性研究，在魚腥草注射液貯存過程中，魚腥草素相對(duì)含量變化極小，性質(zhì)穩(wěn)定。另有文獻(xiàn)報(bào)道［17］魚腥草注射液的不良反應(yīng)與甲基正壬酮的含量有相關(guān)，本研究結(jié)果認(rèn)為甲基正壬酮在考察期內(nèi)含量基本穩(wěn)定，未對(duì)制劑質(zhì)量產(chǎn)生影響。

［3.3.1］-2-壬烯-9-醇、α-杜松醇、異欖香素等揮發(fā)性成分有時(shí)會(huì)檢測(cè)不到，但鑒于這些成分在制劑中的相對(duì)含量很低(都低于0.3%)，從整體上看，可認(rèn)為這樣的成分變化對(duì)魚腥草注射液的質(zhì)量、安全性和療效不會(huì)產(chǎn)生影響。

但是針對(duì)魚腥草注射液穩(wěn)定性的研究，由于時(shí)間和其它客觀因素所限，本研究?jī)H選擇同一廠家的兩個(gè)批號(hào)制劑進(jìn)行研究，樣品量較小，所得結(jié)論的確證仍需要后續(xù)研究更長(zhǎng)時(shí)間的考察和不同廠家提供的更大樣本量的支持。

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