益腎蠲痹丸對(duì)腎虛證與脾虛證膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的療效比較

肖 誠(chéng) ，趙宏艷 ，王 燕 ，劉梅潔 ，王少君 ，潘靜華 ，呂 誠(chéng) ，呂愛(ài)平 ，鞠大宏 ?

（1．中日友好醫(yī)院 臨床醫(yī)學(xué)研究所，北京 100029；2．中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700；3．民航總醫(yī)院 病理科，北京 100123；4．中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中醫(yī)臨床基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，北京 100700）

辨證論治是中醫(yī)藥治病的優(yōu)勢(shì)所在，建立切實(shí)符合疾病發(fā)病內(nèi)在本質(zhì)的動(dòng)物模型的制作方法，對(duì)中醫(yī)學(xué)的發(fā)展具有重要意義。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱(chēng)性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病，屬中醫(yī)學(xué)“痹證”范疇?，F(xiàn)代研究表明，腎虛和脾虛在RA的發(fā)展中有著重要的作用。因此我們課題組對(duì)腎虛證及脾虛證RA大鼠模型的造模方法進(jìn)行了大量研究[1～6]。

基于對(duì)腎虛證及脾虛證RA模型的研究基礎(chǔ)，結(jié)合中醫(yī)辨證論治的基本診療思路，本實(shí)驗(yàn)欲通過(guò)觀察益腎蠲痹丸對(duì)兩種證型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠膝關(guān)節(jié)骨破壞程度及對(duì)腎虛與脾虛狀態(tài)的影響，對(duì)前期制作的腎虛證及脾虛證CIA動(dòng)物模型進(jìn)行驗(yàn)證，并從基礎(chǔ)研究方面對(duì)辨證論治有進(jìn)一步的闡述。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

選用6周齡雌性SPF級(jí)SD大鼠114只，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2005-0004。在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所清潔級(jí)動(dòng)物室喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室許可證號(hào)：SYXK（京）2005-0024。

1.1.2 主要試劑與儀器

牛Ⅱ型膠原、不完全弗氏佐劑、大鼠抗牛Ⅱ型膠原試劑盒：美國(guó)Chondrex公司產(chǎn)品，批號(hào)：100028、100106和121109；羥基脲：齊魯制藥有限公司，批號(hào)：810025LC；益腎蠲痹丸：江蘇正大清江制藥有限公司；大鼠皮質(zhì)酮試劑盒：德國(guó)DRG公司產(chǎn)品，批號(hào)：61k059；細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒：美國(guó) BioVision公司產(chǎn)品，批號(hào)：40501；FITC anti-rat CD3、PE anti-rat CD4、PerCP anti-rat CD8a： 美國(guó)BioLegend 公司產(chǎn)品， 批號(hào)：B126921，B124011，B134493；Leica DM6000B生物顯微鏡：德國(guó)Leica公司產(chǎn)品；Multiskan Mk3酶標(biāo)儀、Wellwash 4 Mk2洗板機(jī)：美國(guó)Thermo公司；EPICS XL型流式細(xì)胞儀：美國(guó)Beckman Coulter公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及處理

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為以下10組：正常對(duì)照組10只、假手術(shù)組10只、CIA對(duì)照組12只、CIA治療組12只、腎虛證（去勢(shì)法）CIA組11只、腎虛證（去勢(shì)法）CIA組治療組11只、腎虛證（羥基脲法）CIA組12只、腎虛證（羥基脲法）CIA治療組12只、脾虛證 （利血平法）CIA組12只、脾虛證（利血平法）CIA治療組12只。

CIA組、CIA治療組：按前期方法[1]進(jìn)行造模，即取適量牛Ⅱ型膠原溶液（濃度為2mg/ml）逐滴加入至等容積的不完全弗氏佐劑中，冰浴中用勻漿器充分乳化，以滴入水中不擴(kuò)散為度，取乳化后的混合物按0.2ml/只，于尾根部皮下注射。7d后按0.1ml/只，于尾根部皮下加強(qiáng)免疫一次。去勢(shì)CIA組、去勢(shì)CIA組治療組：按常規(guī)方法[7]做去勢(shì)手術(shù)，即摘除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組大鼠只摘除雙側(cè)卵巢附近的脂肪組織；術(shù)后28d，去勢(shì)CIA組再按上述方法進(jìn)行CIA模型復(fù)制。羥基脲CIA組、羥基脲CIA治療組：大鼠給予羥基脲（375 mg/kg/d）灌胃[8，9]，灌胃 17d后，按上述方法進(jìn)行 CIA模型復(fù)制。利血平CIA組、利血平CIA治療組：大鼠給予利血平（0.5mg/kg/d）腹腔注射[10]，14d 后，按上述方法進(jìn)行CIA模型復(fù)制。

為了保證免疫條件的齊同性，各組均在同一時(shí)間免疫。即以免疫時(shí)間為基準(zhǔn)點(diǎn)，在免疫前28d行去勢(shì)手術(shù)、免疫前17d灌服羥基脲、免疫前14 d腹腔注射利血平。Ⅱ型膠原免疫18d后，從每組篩選出10只關(guān)節(jié)炎指數(shù)≥1分大鼠，開(kāi)始給藥。各治療組均灌胃給予益腎蠲痹丸（3.67g/kg/d）[6]，1次/d，連續(xù)4周，其余各組灌以等容積生理鹽水。

關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分：參照5級(jí)評(píng)分法評(píng)價(jià)[11]，將2只后踝關(guān)節(jié)的病變程度累計(jì)積分，計(jì)算出關(guān)節(jié)炎指數(shù)。0分：無(wú)關(guān)節(jié)炎；1分：小趾關(guān)節(jié)輕度腫脹；2分：小趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹；3分：踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹；4分：包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)全部關(guān)節(jié)腫脹。

1.2.2 取材

戊巴比妥鈉麻醉下，采用腹主動(dòng)脈取血，分別用于T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及血漿的制備，取血后立即取出腎上腺稱(chēng)重，制備的血漿及腎上腺于-80℃冰凍備用。取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)，置于福爾馬林中固定備用。

1.2.3 指標(biāo)的測(cè)定

（1）一般狀態(tài)觀察：觀測(cè)大鼠體重、被毛、活動(dòng)及排便狀況等。

（2）關(guān)節(jié)切片及光鏡下關(guān)節(jié)破壞半定量分析方法：關(guān)節(jié)于5%HNO3脫鈣1周后，常規(guī)石蠟切片及HE染色。光鏡下觀察滑膜、軟骨、骨的病理改變，并進(jìn)行關(guān)節(jié)病理?yè)p傷半定量分析[12]。0分：關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，關(guān)節(jié)間隙均勻，軟骨、骨無(wú)損傷，滑膜組織無(wú)炎癥、增生等；1分：關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)基本正常，有滑膜增生，血管數(shù)量增加，可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，軟骨表層輕度破壞；2分：關(guān)節(jié)軟骨有明顯的侵蝕破壞，血管翳形成，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，無(wú)骨破壞，關(guān)節(jié)間隙基本正常；3分：有大量的血管翳形成，可見(jiàn)廣泛的軟骨的侵蝕破壞，可見(jiàn)骨破壞，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)遭破壞。

（3）血漿抗Ⅱ型膠原抗體、血漿皮質(zhì)酮（corticosterone，CORT）含量測(cè)定：均采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，具體操作方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

（4）腎上腺環(huán)磷腺苷酸（cAMP）、環(huán)磷鳥(niǎo)苷酸（cGMP）含量測(cè)定： 取大鼠雙側(cè)腎上腺，稱(chēng)重后，按說(shuō)明書(shū)所示方法制備樣品，采用放射免疫法測(cè)定cAMP、cGMP含量。

（5）外周血T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)：分別用FITC、PE、PerCP 標(biāo)記的抗大鼠 CD3+、CD4+、CD8+單抗，對(duì)全血中淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，室溫下避光反應(yīng)40min，加入紅細(xì)胞裂解液2ml，5min后加入 5ml D-Hank’s，350g離心 5min洗 2遍，加入500μl D-Hank’s，混勻后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。收集4000個(gè)細(xì)胞用于數(shù)據(jù)分析。

（6）脾淋巴細(xì)胞增殖的檢測(cè)：無(wú)菌取脾制成淋巴細(xì)胞懸液，用1640培養(yǎng)液調(diào)整脾細(xì)胞濃度為2×106/ml，取 50μl加入 96 孔板，每只動(dòng)物脾細(xì)胞懸液平行設(shè)9個(gè)復(fù)孔，分為3組，即刀豆球蛋白A（ConA，10μg/ml）組、脂多糖（LPS，4μg/ml）組和正常對(duì)照組，每組3個(gè)復(fù)孔。然后分別加入ConA、LPS和 1640培養(yǎng)液各 50μl。于 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后，每孔加入10μl WST-1溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h，于酶標(biāo)儀中記錄吸光度（OD450nm/630nm）。細(xì)胞增殖反應(yīng)以 ConA或LPS刺激指數(shù)表示，即實(shí)驗(yàn)孔與對(duì)照孔吸光度的比值。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 益腎蠲痹丸對(duì)各組CIA大鼠行為學(xué)的影響

正常對(duì)照組與假手術(shù)組：大鼠精神狀態(tài)良好，被毛光澤，飲食正常，活動(dòng)自如。

CIA組：大鼠精神狀態(tài)良好，被毛光澤，飲食正常，體重略有下降，踝關(guān)節(jié)紅腫，活動(dòng)受限。

去勢(shì)CIA組：大鼠精神萎靡，弓背蜷縮，體毛枯疏，飲食正常，喜扎堆，踝關(guān)節(jié)紅腫，活動(dòng)減少。

去勢(shì)CIA治療組：大鼠精神狀態(tài)良好，弓背蜷縮，體毛枯疏，飲食正常，扎堆現(xiàn)象減少，踝關(guān)節(jié)紅腫程度減輕，活動(dòng)減少。

羥基脲CIA組：大鼠精神萎靡，弓背蜷縮，被毛無(wú)光澤，四肢發(fā)涼、發(fā)白，體溫下降，喜扎堆，飲食減少，肛周污穢，踝關(guān)節(jié)腫脹，懶動(dòng)。

羥基脲CIA治療組：大鼠精神萎靡，弓背蜷縮，被毛無(wú)光澤，飲食尚可，體溫較羥基脲CIA組有所上升，喜扎堆現(xiàn)象略有減少，踝關(guān)節(jié)紅腫程度減輕，懶動(dòng)。

利血平CIA組：大鼠精神萎靡，瞇眼，被毛枯疏無(wú)光澤，弓背蜷縮，踝關(guān)節(jié)紅腫，倦怠、懶動(dòng)，喜聚堆，飲食減少，體重下降，便溏。

利血平CIA治療組：大鼠精神萎靡，瞇眼癥狀減輕，被毛枯疏無(wú)光澤，弓背蜷縮，踝關(guān)節(jié)紅腫略有減輕，倦怠、懶動(dòng)，喜聚堆，體重下降，稀便。

2.2 益腎蠲痹丸對(duì)各組CIA大鼠膝關(guān)節(jié)病理?yè)p傷的影響

光鏡觀察結(jié)果顯示：正常對(duì)照組與假手術(shù)組：膝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，軟骨基質(zhì)及軟骨細(xì)胞無(wú)退行性變，滑膜組織無(wú)增生，關(guān)節(jié)軟骨下骨小梁大小、排列未見(jiàn)異常。CIA對(duì)照組、羥基脲CIA組、去勢(shì)CIA組及利血平CIA組：關(guān)節(jié)腔內(nèi)可見(jiàn)程度不同的滑膜組織增生，血管翳形成，其內(nèi)見(jiàn)有擴(kuò)張的血管、新生毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞，并伴有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨見(jiàn)不同程度的侵蝕破壞，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞。CIA治療組、羥基脲CIA治療組、去勢(shì)CIA治療組和利血平CIA治療組：分別與相應(yīng)模型組比較，滑膜細(xì)胞增生減輕，血管增生和浸潤(rùn)炎細(xì)胞數(shù)量減少，血管翳形成減少，骨質(zhì)破壞有所減輕。

膝關(guān)節(jié)病理?yè)p傷積分結(jié)果表明：各組CIA大鼠膝關(guān)節(jié)病理積分顯著升高（P＜0.05）。與羥基脲CIA組相比，益腎蠲痹丸治療后大鼠膝關(guān)節(jié)病理積分顯著下降（P＜0.05）；與去勢(shì)CIA組相比，益腎蠲痹丸治療后大鼠膝關(guān)節(jié)病理積分亦顯著下降（P＜0.01）；與利血平CIA大鼠相比，益腎蠲痹丸治療后大鼠膝關(guān)節(jié)病理積分雖降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)圖 1）。

2.3 益腎蠲痹丸對(duì)各組CIA大鼠血漿抗Ⅱ型膠原抗體的影響

與正常對(duì)照組相比，各CIA組及給藥組抗Ⅱ型膠原抗體含量顯著升高（P＜0.01）；與CIA對(duì)照組相比，去勢(shì)CIA組、羥基脲CIA組、利血平CIA組CⅡ含量顯著升高（P＜0.01）；益腎蠲痹丸能顯著下調(diào)各證型CIA大鼠抗Ⅱ型膠原抗體含量（P＜0.05，P＜0.01）（見(jiàn)表 1）。

2.4 益腎蠲痹丸對(duì)CIA大鼠腎虛指標(biāo)的影響

2.4.1 益腎蠲痹丸對(duì)CIA大鼠血漿CORT含量的影響

CIA對(duì)照組CORT含量與正常對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異。與CIA對(duì)照組相比，去勢(shì)CIA組及羥基脲CIA組大鼠CORT顯著下降 （P＜0.05）；與去勢(shì)CIA組相比，去勢(shì)CIA治療組CORT顯著升高（P＜0.05）；羥基脲CIA治療組與羥基脲CIA組比較，無(wú)顯著性差異（見(jiàn)表2）。

2.4.2 益腎蠲痹丸對(duì)腎上腺cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP的影響

圖1 各組大鼠膝關(guān)節(jié)病理?yè)p傷積分（x±s，n=10）

CIA對(duì)照組 cAMP、cGMP和 cAMP/cGMP與正常對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異。與CIA對(duì)照組相比，去勢(shì)CIA及羥基脲CIA組cAMP含量顯著下降（P＜0.01，P＜0.05），去勢(shì) CIA 組 cGMP 含量顯著升高（P＜0.05），羥基脲CIA組cGMP含量無(wú)顯著性改變，而去勢(shì)CIA組及羥基脲CIA組大鼠cAMP/cGMP均顯著下降（P＜0.01）。與羥基脲CIA組相比，治療后cAMP、cGMP及AMP/cGMP有升高趨勢(shì)，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與去勢(shì)CIA組相比，去勢(shì)CIA治療組cAMP/cGMP顯著升高（P＜0.01）（見(jiàn)表 2）。

2.5益腎蠲痹丸對(duì)CIA大鼠脾虛指標(biāo)的影響

2.5.1益腎蠲痹丸外周血T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定

CIA對(duì)照組大鼠外周血中CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞百分比與正常對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異，但 CD4/CD8顯著升高（P＜0.05）。 與 CIA對(duì)照組相比，利血平CIA組CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞百分比顯著下降 （P＜0.05），CD8+細(xì)胞百分比和CD4/CD8無(wú)顯著變化。益腎蠲痹丸治療前后，利血平CIA大鼠CD4/CD8亦無(wú)顯著性差異 （見(jiàn)表3）。

2.5.2 脾臟淋巴細(xì)胞增殖的檢測(cè)

表1 各組大鼠血漿抗Ⅱ型膠原抗體水平（n=10）

表2 各組大鼠血漿CORT、腎上腺cAMP、cGMP與cAMP/cGMP的變化（n=10）

表3 各組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化（n=10）

表4各組大鼠脾臟淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)的變化（n=10）

與正常對(duì)照組相比，CIA對(duì)照組ConA刺激后的T細(xì)胞增殖能力和LPS刺激后B細(xì)胞增殖能力顯著升高（P＜0.01，P＜0.05）。 與 CIA 對(duì)照組相比，利血平CIA組大鼠T細(xì)胞增殖能力顯著下降（P＜0.05），B細(xì)胞增殖能力亦顯著下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CIA治療組T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖能力，較 CIA 對(duì)照組顯著降低 （P＜0.01，P＜0.05）。與利血平CIA組相比，利血平CIA治療組T細(xì)胞增殖能力顯著降低 （P＜0.05），B細(xì)胞增殖能力無(wú)顯著性差異（見(jiàn)表4）。

3 討論

RA屬中醫(yī)學(xué)“痹病”的范疇，本病的病因病機(jī)是正氣虧虛，營(yíng)衛(wèi)不和，邪氣趁虛而入，流注筋骨，搏結(jié)關(guān)節(jié)，而發(fā)為痹痛。中醫(yī)專(zhuān)家朱良春根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為本病病變?cè)诠牵菫槟I所主，故應(yīng)益腎壯督治其本，蠲痹通絡(luò)治其標(biāo)，從而研制出益腎蠲痹丸。益腎蠲痹丸是具有蠲痹通絡(luò)，搜剔病邪的作用，諸藥相合，達(dá)到溫補(bǔ)腎陽(yáng)、益腎壯督、搜風(fēng)剔邪、蠲痹通絡(luò)之功效[12]。因此選用該藥作為本實(shí)驗(yàn)補(bǔ)腎除痹的代表藥物，從以方測(cè)證的角度觀察該藥對(duì)單純痹癥、腎虛痹癥及脾虛痹癥的療效，為RA病證結(jié)合動(dòng)物模型的制作提供進(jìn)一步的評(píng)判依據(jù)。

根據(jù)前期研究，制備了腎虛證與脾虛證CIA大鼠模型[3，4]。經(jīng)益腎蠲痹丸治療后，各組大鼠膝關(guān)節(jié)損傷均有不同程度的改善，但CIA對(duì)照組及脾虛證CIA大鼠關(guān)節(jié)改善程度差于腎虛證CIA大鼠；對(duì)2種腎虛證CIA關(guān)節(jié)損傷療效分析發(fā)現(xiàn)，益腎蠲痹丸對(duì)去勢(shì)法制作的腎虛CIA大鼠關(guān)節(jié)損傷優(yōu)于羥基脲法制作的腎虛CIA大鼠?？耿蛐湍z原自身抗體水平的高低，可反映機(jī)體炎癥的嚴(yán)重程度[13，14]。對(duì)抗Ⅱ型膠原抗體檢測(cè)顯示，去勢(shì)CIA組大鼠、羥基脲CIA組大鼠、利血平CIA組大鼠血漿抗Ⅱ型膠原抗體含量與CIA對(duì)照組大鼠相比顯著升高，說(shuō)明腎虛與脾虛證候可加重CIA的發(fā)病程度；經(jīng)益腎蠲痹丸治療后，CIA對(duì)照組大鼠及不同證型CIA組大鼠抗Ⅱ型膠原抗體水平均有不同程度的下降，其中腎虛CIA大鼠下降最明顯，脾虛CIA大鼠其次，CIA對(duì)照組再次。進(jìn)一步反映益腎蠲痹丸對(duì)腎虛證CIA大鼠療效最為明顯。

“下丘腦-垂體-靶腺”軸不同環(huán)節(jié)、不同程度的功能紊亂是腎虛證的主要病理基礎(chǔ)。糖皮質(zhì)激素（人類(lèi)主要為皮質(zhì)醇，大鼠主要為CORT）是下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA）軸終末激素。CORT是腎上腺在應(yīng)激反應(yīng)里產(chǎn)生的一種類(lèi)激素，腎虛證患者腎上腺皮質(zhì)功能低下，血漿CORT含量降低是診斷腎上腺皮質(zhì)功能減退的直接證據(jù)[15]；cAMP是核苷酸的衍生物，為蛋白激酶致活劑，是有機(jī)體中廣泛存在的一種具有生理活性的重要物質(zhì)，cGMP跟cAMP一樣，是一種具有細(xì)胞內(nèi)信息傳遞作用的第二信使，其生物效應(yīng)和 cAMP相反。cAMP和cGMP是一對(duì)相互拮抗又相互制約的物質(zhì)，對(duì)于細(xì)胞功能處于穩(wěn)定狀態(tài)具有雙向調(diào)節(jié)作用。目前已有研究通過(guò)檢測(cè)cAMP/cGMP來(lái)探討腎虛的本質(zhì)[16，17]。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)益腎蠲痹丸治療后，去勢(shì)CIA大鼠腎上腺CAMP/cGMP顯著升高，而羥基脲CIA大鼠腎上腺cAMP/cGMP雖升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)益腎蠲痹丸治療后，去勢(shì)CIA大鼠血漿CORT顯著升高，羥基脲CIA大鼠血漿CORT有升高的趨勢(shì)。說(shuō)明益腎蠲痹丸對(duì)去勢(shì)法制作的腎虛狀態(tài)具有更好的調(diào)節(jié)作用。

T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，也是機(jī)體免疫應(yīng)答的主要調(diào)節(jié)細(xì)胞。用單抗測(cè)定外周血白細(xì)胞中CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞百分比，或是兩種細(xì)胞的比值，來(lái)初步評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)。有研究表明[18～20]：脾虛證患者出現(xiàn) CD3+、CD4+T細(xì)胞數(shù)量及CD4/CD8比值的下降，T細(xì)胞亞群的平衡狀態(tài)失調(diào)，這與脾氣虛弱致抗御外邪的機(jī)能降低相一致。T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞表面具有絲裂原受體，受非特異性絲裂原（如ConA和LPS）刺激后能分裂增殖，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。根據(jù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率可判斷機(jī)體的細(xì)胞免疫水平和體液免疫水平。研究結(jié)果顯示，利血平制作的脾虛模型T、B淋巴細(xì)胞增殖能力降低。經(jīng)益腎蠲痹丸治療后，脾虛CIA大鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖能力下降，CD4/CD8亦下降，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明益腎蠲痹丸對(duì)利血平制作的CIA大鼠的脾虛功能調(diào)整作用有限。

益腎蠲痹丸對(duì)腎虛證CIA大鼠的療效要優(yōu)于脾虛證CIA大鼠及CIA對(duì)照組大鼠，而去勢(shì)所致腎虛CIA大鼠療效要略?xún)?yōu)于羥基脲所致腎虛CIA大鼠，表明去勢(shì)法制作的腎虛證CIA模型可能更符合中醫(yī)的腎虛證候動(dòng)物模型。同時(shí)益腎蠲痹丸對(duì)腎虛狀態(tài)有較好的調(diào)節(jié)作用，尤其是去勢(shì)法所致的腎虛CIA大鼠的調(diào)節(jié)作用更為顯著，對(duì)利血平所致的脾虛功能調(diào)整作用有限，以上結(jié)果亦為中醫(yī)辨證治療的合理性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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