豬痢疾檢疫方法概述

蔣劉柱，張光華，黃 謙，王學(xué)魏

（1.四川省綿陽市畜牧站，四川 綿陽 625000；2.四川省中江縣畜牧局，四川 中江 622000）

1 產(chǎn)地檢疫

產(chǎn)地檢疫是防止病豬進(jìn)入流通環(huán)節(jié)的第一關(guān)，特別是種豬場，產(chǎn)地檢疫尤為重要。

2 檢疫方法

2.1 基本檢疫方法

2.1.1 問。著重詢問有無發(fā)病史、發(fā)病頭數(shù)、死亡頭數(shù)、臨床表現(xiàn)、病程長短、做過何種疫苗預(yù)防注射，最近有無疫病發(fā)生等等。通過問診，可以初步斷定是急性或是慢性。

2.1.2 視。觀察豬群的活動(dòng)狀態(tài)和精神狀態(tài)，采食量的變化，飲水的具體情況；看糞便的顏色形狀，腹部及背部的毛色，以及肛門周圍糞便污染的情況。

2.1.3 聞。主要是聞糞便的氣味，一般表現(xiàn)為惡臭。

2.1.4 摸。用手觸摸豬皮膚、肌肉、耳朵、淋巴結(jié)等部位的溫度、硬性、彈性、敏感性、疼痛性、病變部位的性狀以及反射情況等，主要判斷疼痛感和敏感性。

2.1.5 檢。用體溫計(jì)檢查豬體溫。重病例體溫稍高，維持?jǐn)?shù)天，以后下降至常溫，死前體溫降至常溫以下[1]。

2.2 看臨床癥狀 急性癥狀先有個(gè)別豬突然死亡，隨后其他豬出現(xiàn)食欲減退，精神不佳。腹瀉開始為黃色軟糞，后變?yōu)榧t黑色水樣便，有時(shí)帶有很多小氣泡，并混有黏液及纖維偽膜、氣味惡臭，肛門周圍及尾根被糞便污染。病豬體溫升高到39.8～40.6℃，厭食、喜飲水、拱背、脫水、腹部卷縮、行走搖擺、用后肢踢腹，被毛粗亂無光，迅速消瘦。嚴(yán)重者起立困難，極度衰弱，排糞失禁，肛門周圍及尾根被糞便污染，共濟(jì)失調(diào)，最后死亡[2-3]。

亞急性多見于流行的中后期，病程為14～21d。下痢時(shí)糞中有黑紅血液和黏液（如油脂狀），里急后重，反復(fù)發(fā)生，食欲減退或正常，消瘦，貧血，生長遲緩，呈惡病質(zhì)狀態(tài)。少數(shù)康復(fù)后過一段時(shí)間又復(fù)發(fā)，甚至多次復(fù)發(fā)，個(gè)別轉(zhuǎn)為慢性型，生長發(fā)育受阻，有的成為僵豬[4-5]。

慢性病例病情較輕。下痢，糞中含黏液及壞死組織碎片較多，血液較少，病程較長（28d以上）。進(jìn)行性消瘦，生長遲滯。不少病例可以自然恢復(fù)，但間隔一定時(shí)間后，部分病例可能復(fù)發(fā)甚至死亡。

2.3 解剖死豬看病理變化 腸壁變薄，大腸出現(xiàn)卡他性和出血性炎癥，腸系膜及其淋巴結(jié)充血、水腫，腸腔內(nèi)有黏液和黑色血液，腸黏膜上有彌漫性壞死，呈麩皮樣，黏膜易脫落，小腸及其他臟器無明顯病變[6]。大腸有病變而小腸沒有病變是該病典型的特征，常在回盲結(jié)合處有一條明顯的分界線。此特征性病變可用來與其他腹瀉病相區(qū)別。

2.4 細(xì)菌學(xué)檢查

2.4.1 直接鏡檢。取帶血絲的黏液糞便少許，直接抹片，干燥固定后，用草酸銨結(jié)晶紫液、姬姆薩染色液染色觀察，判斷是否為密螺旋體。本病的病原為豬痢疾短螺旋體，存在于豬病變腸段的黏膜、腸內(nèi)容物及糞便中。短螺旋體有4～6個(gè)彎曲，兩端尖銳，在暗視野顯微鏡下較活潑，以長軸為中心旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。在電子顯微鏡下可見細(xì)胞壁與外膜之間有7～9條軸絲。革蘭氏染色呈陰性[7]。

2.4.2 細(xì)菌培養(yǎng)。對(duì)病死豬的結(jié)腸黏膜刮取物進(jìn)行病原分離培養(yǎng)。將鏡檢疑似陽性病料以10倍稀釋后劃線接種于添加有400 μg/mL壯觀霉素和50%兔脫纖血的胰酪胨血瓊脂培養(yǎng)基上作厭氧培養(yǎng)（培養(yǎng)環(huán)境為80%氮?dú)猓?0%二氧化碳），40℃培養(yǎng)5～6d，得到針尖大、透明、部分呈云霧狀擴(kuò)散的微小菌落，培養(yǎng)基上的菌落周圍出現(xiàn)明顯的β溶血環(huán)[8]。涂片鏡檢還可見典型的豬痢疾密螺旋體，由此可確診[9]。

2.4.3 懸滴檢查。將病料用生理鹽水制成懸滴標(biāo)本，在400倍暗視野顯微鏡下檢查，可觀察到有蛇行樣運(yùn)動(dòng)活潑的菌體。每張標(biāo)本片至少觀察10個(gè)視野，在每個(gè)視野中均有多個(gè)緩慢旋轉(zhuǎn)呈蛇形運(yùn)動(dòng)且兩端尖銳的螺旋體，由此判斷為豬痢疾密螺旋體感染。

2.4.4 動(dòng)物接種?？山臃N健康仔豬、小白鼠或豚鼠，觀察其發(fā)病和病變情況，或用結(jié)腸病料剁碎液腹腔注射公兔，5～10d后作睪丸穿刺檢查，若出現(xiàn)豬痢疾短螺旋體，則可確診該疾病。

2.5 血清學(xué)檢驗(yàn)

2.5.1 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。自然分離株經(jīng)純化后作為診斷抗原，周圍孔分別滴入待檢血清、陽性和陰性對(duì)照血清，在保持一定濕度的狀態(tài)下，置于溫箱中，24h后觀察結(jié)果。出現(xiàn)特異性沉淀線者為陽性。該方法可以作為診斷和凈化豬場痢疾的簡易手段。

2.5.2 微量凝集試驗(yàn)。以1%的胎牛血清PBS 0.05mL分別滴入微量滴定板1～6孔中，將10倍稀釋過的被檢血清50μL加入第一孔，并倍比稀釋至第5孔，第6孔為抗原對(duì)照。每孔加入抗原50μL，經(jīng)振蕩后置38℃16～18h，再于室溫下靜置1～2h，觀測結(jié)果。當(dāng)幾何平均滴度為1∶40以上時(shí)可認(rèn)為該豬群感染了螺旋體。

2.5.3 熒光抗體試驗(yàn)。用兔的高免血清制備出熒光標(biāo)記抗體，比普通顯微鏡更靈敏。該方法能在短時(shí)間（1.5～2h）內(nèi)檢出和鑒定豬痢疾短螺旋體。

2.5.4 白細(xì)胞游走抑制瓊脂糖試驗(yàn)（LMAT）。試驗(yàn)原理：豬痢疾（SD）螺旋體的可溶性抗原能抑制SD患豬的白細(xì)胞游走，但不能抑制未感染豬的白細(xì)胞游走。

2.5.5 ELISA法。ELISA檢測的最適條件為：抗原10 μg/mL，血清稀釋100倍，酶標(biāo)結(jié)合物稀釋1000倍。該法比凝集試驗(yàn)更靈敏，是診斷豬痢疾的一種快速方法。

2.5.6 其他。還有被動(dòng)溶血試驗(yàn)和瓊擴(kuò)試驗(yàn)等檢測方法，但比較實(shí)用的是ELISA法和凝集試驗(yàn)，主要用于豬群檢疫和綜合診斷。

2.6 PCR檢測 該法的敏感性可以達(dá)到每0.1 g糞便中檢出1～10個(gè)密螺旋體，比選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)的敏感性高1000倍。

3 總結(jié)

各種檢疫方法各有特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況采用不同的檢測方法，力求準(zhǔn)確診斷出是否為豬痢疾，為下一步的治療與預(yù)防隔離打好基礎(chǔ)。

[1]閆華志，王金鐸，杜新華.淺述豬檢疫方法[J].畜牧獸醫(yī)雜志，1997，16（4）:40-41.

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[3]張成鑫，劉海東.豬痢疾的病癥及診治方法[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2009（3）:100.

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[6]何余湧.生長豬血痢病的臨床綜合診斷與治療[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2011（6）:23-25.

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