改良嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液及應(yīng)用

李 云 郭書(shū)俠 董 蕤 路廣平 薛占輝

(河北省遷安市人民醫(yī)院，①遷安市中醫(yī)院 河北遷安 064400;②灤縣人民醫(yī)院;③廊坊市廣陽(yáng)區(qū)婦幼保健醫(yī)院;④遷西縣中醫(yī)院)

嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)臨床常見(jiàn)的是直接計(jì)數(shù)、涂片白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和血球計(jì)數(shù)儀分類(lèi)計(jì)數(shù)3種方法。但是臨床上為了解疾病進(jìn)展過(guò)程，需要?jiǎng)討B(tài)觀察嗜酸性粒細(xì)胞的變化，往往采用嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)。文獻(xiàn)報(bào)道［1，2］，嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的稀釋液較多，用等滲的生理鹽水配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液，與《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液相比，各有優(yōu)缺點(diǎn)。我院探討使用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來(lái)配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液，在臨床實(shí)踐了3年，計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑 《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液配制詳見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［3］。嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。稱(chēng)取草酸銨1.0g，EDTA.2Na 0.012g，伊紅0.2g，溶于50mL蒸餾水中，再加入0.6mL TritonX-100，加蒸餾水至100mL。

1.2 方法 于試管中加入稀釋液0.38mL，取患者末梢血(或EDTA.2K抗凝全血)0.02 mL，混勻，5min后沖入計(jì)數(shù)板的兩計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置3～5min。用低倍鏡計(jì)數(shù)，鏡下嗜酸性粒細(xì)胞被染成桔紅色，其它未被破壞的細(xì)胞幾乎不著色。計(jì)數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室10個(gè)大方格(中央和四角大方格)內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞/L=10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)×20×106/L。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比試驗(yàn) 取住院121例患者的EDTA.2K抗凝全血，分別用《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液(Y)與本法稀釋液(X)進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果本法稀釋液(163.4±34.7)×106/L，推薦稀釋液(165.0±35.1)×106/L，2種稀釋液計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，其相關(guān)系數(shù)r=0.991，相關(guān)方程Y=1.0216X+3.1247。

2.2 著色時(shí)間比較 將稀釋液與抗凝全血混合后，分別在120、180、240、270、300s進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的稀釋液在300s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色，本法稀釋液在180s后嗜酸性粒細(xì)胞被染成紅色。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 用本法稀釋液進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)25次重復(fù)試驗(yàn)

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道，嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液有很多種，主要是圍繞破壞紅細(xì)胞和部分白細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞不被破壞且著色進(jìn)行改進(jìn)的。根據(jù)草酸銨有破壞紅細(xì)胞的作用，巧妙地運(yùn)用血小板計(jì)數(shù)稀釋液來(lái)配制嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。我們?cè)谂渲蒲“逵?jì)數(shù)稀釋液的同時(shí)，在每100 mL血小板計(jì)數(shù)稀釋液中加入伊紅0.2g、0.6mL TritonX-100即可成為嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液，這樣就可以簡(jiǎn)化嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液配制過(guò)程。EDTA.2Na有抗凝和防止草酸鈣沉淀作用。表面活性劑TritonX-100能加速染料溶解，增強(qiáng)染料對(duì)細(xì)胞的滲透作用，從而使嗜酸性粒細(xì)胞著色加快。TritonX-100的濃度為0.6%［4］時(shí)，只破壞除嗜酸性粒細(xì)胞以外的細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞幾乎不受影響。本稀釋液沒(méi)使用揮發(fā)性試劑，這樣稀釋液保質(zhì)期就相對(duì)較長(zhǎng)，使用一年之久，仍效果很好。本法具有試劑配制簡(jiǎn)單，著色時(shí)間短，試劑保質(zhì)期長(zhǎng)，一種試劑2種用途等優(yōu)點(diǎn)。

［1］李 云，郭書(shū)俠，陳夢(mèng)芝.一種嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液的應(yīng)用［J］.河北醫(yī)學(xué)，1999，5(6):59

［2］李 云，郭書(shū)俠.溴酚藍(lán)在嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)中的應(yīng)用［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22(1):34

［3］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006.136

［4］幸建英，尹 玲，王學(xué)風(fēng).TritonX-100在嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)中的應(yīng)用［J］.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，1996，11(3):50