阿米西達(dá)對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效試驗(yàn)

畢可可+馮毅敏+吳超+楊曉

摘 要：黃瓜霜霉病是一種世界性病害，每年對(duì)黃瓜生產(chǎn)造成極大損失。用阿米西達(dá)（25 %懸浮液）的稀釋液對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該藥劑可有效抑制黃瓜霜霉病菌游動(dòng)孢子的釋放，以及病菌的侵入和擴(kuò)展，600倍稀釋液的抑制效果達(dá)到85 %，可推廣用于防治黃瓜霜霉病。

關(guān)鍵詞：阿米西達(dá) 霜霉病 孢子囊 游動(dòng)孢子 葉盤

黃瓜霜霉病[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]是我國(guó)各黃瓜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種病害，最早發(fā)現(xiàn)于北美的古巴（1886年）。我國(guó)最早報(bào)道于1912年，在湖南省的南瓜上發(fā)現(xiàn) [1]。該病菌除了侵染黃瓜外，還侵染葫蘆科的大約20個(gè)屬40個(gè)種的作物，其中10個(gè)種在黃瓜屬 [2]。黃瓜霜霉病主要依靠孢子囊傳播，當(dāng)孢子囊被攜帶到葉片上后，在合適的條件下就可通過(guò)葉片的氣孔侵入植物。病菌可通過(guò)2種方式侵入：一種是孢子囊直接萌發(fā)產(chǎn)生芽管，通過(guò)氣孔侵入；另一種方式是產(chǎn)生游動(dòng)孢子，當(dāng)孢子囊在水中停留30～60 min后即破裂，可釋放游動(dòng)孢子，進(jìn)行侵染。適合條件下1個(gè)孢子囊即可產(chǎn)生15～25個(gè)游動(dòng)孢子，導(dǎo)致侵染的后果更為嚴(yán)重。同時(shí)，現(xiàn)有的防治黃瓜霜霉病的藥劑因長(zhǎng)期大量使用，使病菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，因此，尋找一種新的、高效低毒的藥劑用于黃瓜霜霉病的防治尤為重要。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

高溫滅菌鍋（HVE-50，日本）、超凈工作臺(tái)（SW-CJ-2FD，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）、人工氣候箱（寧波萊?？萍加邢薰荆⒐鈱W(xué)顯微鏡（OLYMPUS，BH-2，日本）、熒光顯微鏡（Nikon H550S）、微量移液器（Eppendorf）、滅菌培養(yǎng)皿、挑針、鑷子、打孔器、1.5 mL離心管、封口袋、載玻片、蓋玻片、吸水紙。

1.2 供試材料

供試藥劑：阿米西達(dá)25 %懸浮液，瑞士先正達(dá)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

黃瓜霜霉病菌的采集、孢子囊懸浮液的制備 采集黃瓜霜霉病病葉，用毛筆蘸滅菌水洗刷病斑背面的霉層，以洗去病斑上已有的孢子囊和孢囊梗。然后將病葉放于18 ℃ 中保濕培養(yǎng)24 h待長(zhǎng)出新鮮霉層備用。取出病葉，于超凈工作臺(tái)上用毛筆將病斑上的孢子囊洗刷入盛有4 ℃ 滅菌水的培養(yǎng)皿中，并用無(wú)菌水配成一定濃度的孢子囊懸浮液（50～60個(gè)孢子囊/20倍視野）。

供試藥劑的制備。將配好的母液按比例加入孢子囊懸浮液中，形成5個(gè)濃度梯度，即終濃度為原液稀釋200倍、400倍、600倍、800倍和1000倍，用無(wú)菌水作對(duì)照。用移液管吸取0.2 mL 于凹玻片的凹槽中，每處理4次重復(fù)，于人工氣候箱中22 ℃下保濕培養(yǎng)。

孢子囊釋放游動(dòng)孢子觀察。24 h后在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每個(gè)處理統(tǒng)計(jì)約300個(gè)孢子囊，按照以下公式計(jì)算游動(dòng)孢子釋放抑制率：

孢子囊釋放率（ %）=釋放游動(dòng)孢子的孢子囊數(shù)/總孢子囊數(shù)×100

抑制效果（ %）=（對(duì)照釋放率-處理釋放率）/對(duì)照釋放率×100

1.3.2 葉盤接種法毒力測(cè)定

取健康無(wú)病的第2～8片黃瓜葉片，打取直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤在不同濃度的系列藥液中浸泡1 h后晾干，放入培養(yǎng)皿內(nèi)背面朝上懸浮于無(wú)菌水上，每個(gè)平皿10片葉盤，重復(fù)4個(gè)。在每片葉盤上接種10 μL含有相應(yīng)藥劑梯度濃度的孢子囊懸浮液（50～100個(gè)孢子囊）。置于人工氣候箱（光照16 h、黑暗8 h，溫度18 ℃～22 ℃）中培養(yǎng)6～8 d。

病情調(diào)查。根據(jù)病斑面積占葉盤面積的百分率劃分病級(jí)：0級(jí)，無(wú)病；1級(jí)，1 %～20 %；2級(jí)，21 %～50 %；3級(jí)，> 50 %。并依此計(jì)算病情指數(shù)。

病情指數(shù)= [（病級(jí)數(shù)×該病級(jí)的調(diào)查數(shù)）/（調(diào)查總數(shù)×最高級(jí)數(shù)）]×100

防效（%）= [（對(duì)照區(qū)病情指數(shù)- 處理區(qū)病情數(shù)）/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 病葉的采集及病原菌特征

苗期、成株期均可發(fā)病。主要為害葉片。子葉被害初期呈褪綠色黃斑，擴(kuò)大后變黃褐色。真葉染病，葉緣或葉背面出現(xiàn)水浸狀病斑，早晨尤為明顯，病斑逐漸擴(kuò)大，受葉脈限制，呈多角形淡褐色或黃褐色斑塊，濕度大時(shí)葉背面或葉面長(zhǎng)出灰黑色霉層。后期病斑破裂或連片，葉片干枯。（圖1）

病原菌為古巴假霜霉[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]。孢囊梗自氣孔伸出，單生或2～4根束生，無(wú)色，主桿基部稍膨大，上部呈3～5次銳角分枝，分枝末端著生1個(gè)孢子囊，孢子囊卵形或橢圓形，頂端具乳突，淡褐色，單孢，大小18～41.6×14.5～27.2 um。孢子囊可直接萌發(fā)，長(zhǎng)出牙管，低溫時(shí)，孢子囊釋放出游動(dòng)孢子1～8個(gè)，在水中游動(dòng)片刻后形成休眠孢子，再產(chǎn)生出芽管，從寄主氣孔或細(xì)胞間隙侵入，在細(xì)胞間慢延，靠吸器深入細(xì)胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)。（圖2）

2.2 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

在無(wú)菌水處理中，幾乎所有孢子囊均破裂釋放游動(dòng)孢子（圖3f），而用藥劑處理24 h之后，游動(dòng)孢子的釋放受到抑制，很多孢子囊仍然保持完整狀態(tài)，其中，游動(dòng)孢子的釋放率隨著藥劑濃度的增加而減少，表明藥劑對(duì)孢子囊釋放游動(dòng)孢子起到了很好的抑制效果。

各處理抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子的結(jié)果見(jiàn)表1。

在5個(gè)濃度梯度的供試藥劑中，隨著藥劑濃度的提高，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率更為明顯。當(dāng)把藥劑稀釋到200倍、400倍和600倍時(shí)，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率接近85 %，說(shuō)明該藥劑對(duì)黃瓜霜霉病菌具有很好的抑制效果。從經(jīng)濟(jì)角度以及植株抗藥性角度考慮，建議大田使用時(shí)可選用600倍的稀釋倍數(shù)。

2.3 葉盤接種法毒力測(cè)定

用含有系列濃度藥劑的孢子囊懸浮液接種葉盤背面6 d后，葉盤的發(fā)病情況如圖4。統(tǒng)計(jì)接種的葉盤的發(fā)病情況，結(jié)果如表2所示，對(duì)照CK均發(fā)病，平均病情指數(shù)為21.33；用稀釋一定倍數(shù)藥劑的孢子囊懸浮液接種，發(fā)病情況有所減輕，并隨濃度的增加防治效果越顯著。接種情況與孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)結(jié)果稍有不同，但經(jīng)過(guò)方差分析，結(jié)果均表明，該藥劑稀釋200倍、400倍、600倍對(duì)黃瓜霜霉病的抑制效果均大于85 %，且差異不顯著；而藥劑稀釋800倍和1000倍的抑制效果與稀釋600倍之間差異顯著。葉盤接種法再次證明，該藥劑稀釋600倍是黃瓜霜霉病的最佳濃度。

3 結(jié)論與討論

用游動(dòng)孢子釋放抑制試驗(yàn)及葉盤接種法測(cè)定了供試藥劑對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效，結(jié)果均表明該藥劑可有效抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子，且對(duì)黃瓜霜霉病的發(fā)生具有很好的預(yù)防效果。不同稀釋倍數(shù)的藥劑處理，表明在稀釋600倍時(shí)，對(duì)黃瓜霜霉病病菌的抑制效果可達(dá)85 %，而800倍稀釋液的抑制效果偏低，因此，將稀釋600倍作為該藥劑大田使用的推薦濃度。

試驗(yàn)僅對(duì)該藥劑的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，關(guān)于其在大田的實(shí)際效果由于受外界各種自然條件的影響，田間試驗(yàn)尚需進(jìn)一步開(kāi)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 李明遠(yuǎn)，李興紅，嚴(yán)紅，等. 主要瓜類蔬菜霜霉病的發(fā)生與防治（一）[J].中國(guó)蔬菜，2008（4）：55-57.

[2] Palti J，Cohen Y. Downy mildew of cucurbits（Pseudoperonospora cubensis）. The fungus and its hosts，distribution，epidemio- logy，and control[J]. Phytoparasitica，1980（8）：109- 147.

摘 要：黃瓜霜霉病是一種世界性病害，每年對(duì)黃瓜生產(chǎn)造成極大損失。用阿米西達(dá)（25 %懸浮液）的稀釋液對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該藥劑可有效抑制黃瓜霜霉病菌游動(dòng)孢子的釋放，以及病菌的侵入和擴(kuò)展，600倍稀釋液的抑制效果達(dá)到85 %，可推廣用于防治黃瓜霜霉病。

關(guān)鍵詞：阿米西達(dá) 霜霉病 孢子囊 游動(dòng)孢子 葉盤

黃瓜霜霉病[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]是我國(guó)各黃瓜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種病害，最早發(fā)現(xiàn)于北美的古巴（1886年）。我國(guó)最早報(bào)道于1912年，在湖南省的南瓜上發(fā)現(xiàn) [1]。該病菌除了侵染黃瓜外，還侵染葫蘆科的大約20個(gè)屬40個(gè)種的作物，其中10個(gè)種在黃瓜屬 [2]。黃瓜霜霉病主要依靠孢子囊傳播，當(dāng)孢子囊被攜帶到葉片上后，在合適的條件下就可通過(guò)葉片的氣孔侵入植物。病菌可通過(guò)2種方式侵入：一種是孢子囊直接萌發(fā)產(chǎn)生芽管，通過(guò)氣孔侵入；另一種方式是產(chǎn)生游動(dòng)孢子，當(dāng)孢子囊在水中停留30～60 min后即破裂，可釋放游動(dòng)孢子，進(jìn)行侵染。適合條件下1個(gè)孢子囊即可產(chǎn)生15～25個(gè)游動(dòng)孢子，導(dǎo)致侵染的后果更為嚴(yán)重。同時(shí)，現(xiàn)有的防治黃瓜霜霉病的藥劑因長(zhǎng)期大量使用，使病菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，因此，尋找一種新的、高效低毒的藥劑用于黃瓜霜霉病的防治尤為重要。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

高溫滅菌鍋（HVE-50，日本）、超凈工作臺(tái)（SW-CJ-2FD，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）、人工氣候箱（寧波萊?？萍加邢薰荆⒐鈱W(xué)顯微鏡（OLYMPUS，BH-2，日本）、熒光顯微鏡（Nikon H550S）、微量移液器（Eppendorf）、滅菌培養(yǎng)皿、挑針、鑷子、打孔器、1.5 mL離心管、封口袋、載玻片、蓋玻片、吸水紙。

1.2 供試材料

供試藥劑：阿米西達(dá)25 %懸浮液，瑞士先正達(dá)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

黃瓜霜霉病菌的采集、孢子囊懸浮液的制備 采集黃瓜霜霉病病葉，用毛筆蘸滅菌水洗刷病斑背面的霉層，以洗去病斑上已有的孢子囊和孢囊梗。然后將病葉放于18 ℃ 中保濕培養(yǎng)24 h待長(zhǎng)出新鮮霉層備用。取出病葉，于超凈工作臺(tái)上用毛筆將病斑上的孢子囊洗刷入盛有4 ℃ 滅菌水的培養(yǎng)皿中，并用無(wú)菌水配成一定濃度的孢子囊懸浮液（50～60個(gè)孢子囊/20倍視野）。

供試藥劑的制備。將配好的母液按比例加入孢子囊懸浮液中，形成5個(gè)濃度梯度，即終濃度為原液稀釋200倍、400倍、600倍、800倍和1000倍，用無(wú)菌水作對(duì)照。用移液管吸取0.2 mL 于凹玻片的凹槽中，每處理4次重復(fù)，于人工氣候箱中22 ℃下保濕培養(yǎng)。

孢子囊釋放游動(dòng)孢子觀察。24 h后在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每個(gè)處理統(tǒng)計(jì)約300個(gè)孢子囊，按照以下公式計(jì)算游動(dòng)孢子釋放抑制率：

孢子囊釋放率（ %）=釋放游動(dòng)孢子的孢子囊數(shù)/總孢子囊數(shù)×100

抑制效果（ %）=（對(duì)照釋放率-處理釋放率）/對(duì)照釋放率×100

1.3.2 葉盤接種法毒力測(cè)定

取健康無(wú)病的第2～8片黃瓜葉片，打取直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤在不同濃度的系列藥液中浸泡1 h后晾干，放入培養(yǎng)皿內(nèi)背面朝上懸浮于無(wú)菌水上，每個(gè)平皿10片葉盤，重復(fù)4個(gè)。在每片葉盤上接種10 μL含有相應(yīng)藥劑梯度濃度的孢子囊懸浮液（50～100個(gè)孢子囊）。置于人工氣候箱（光照16 h、黑暗8 h，溫度18 ℃～22 ℃）中培養(yǎng)6～8 d。

病情調(diào)查。根據(jù)病斑面積占葉盤面積的百分率劃分病級(jí)：0級(jí)，無(wú)?。?級(jí)，1 %～20 %；2級(jí)，21 %～50 %；3級(jí)，> 50 %。并依此計(jì)算病情指數(shù)。

病情指數(shù)= [（病級(jí)數(shù)×該病級(jí)的調(diào)查數(shù)）/（調(diào)查總數(shù)×最高級(jí)數(shù)）]×100

防效（%）= [（對(duì)照區(qū)病情指數(shù)- 處理區(qū)病情數(shù)）/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 病葉的采集及病原菌特征

苗期、成株期均可發(fā)病。主要為害葉片。子葉被害初期呈褪綠色黃斑，擴(kuò)大后變黃褐色。真葉染病，葉緣或葉背面出現(xiàn)水浸狀病斑，早晨尤為明顯，病斑逐漸擴(kuò)大，受葉脈限制，呈多角形淡褐色或黃褐色斑塊，濕度大時(shí)葉背面或葉面長(zhǎng)出灰黑色霉層。后期病斑破裂或連片，葉片干枯。（圖1）

病原菌為古巴假霜霉[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]。孢囊梗自氣孔伸出，單生或2～4根束生，無(wú)色，主桿基部稍膨大，上部呈3～5次銳角分枝，分枝末端著生1個(gè)孢子囊，孢子囊卵形或橢圓形，頂端具乳突，淡褐色，單孢，大小18～41.6×14.5～27.2 um。孢子囊可直接萌發(fā)，長(zhǎng)出牙管，低溫時(shí)，孢子囊釋放出游動(dòng)孢子1～8個(gè)，在水中游動(dòng)片刻后形成休眠孢子，再產(chǎn)生出芽管，從寄主氣孔或細(xì)胞間隙侵入，在細(xì)胞間慢延，靠吸器深入細(xì)胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)。（圖2）

2.2 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

在無(wú)菌水處理中，幾乎所有孢子囊均破裂釋放游動(dòng)孢子（圖3f），而用藥劑處理24 h之后，游動(dòng)孢子的釋放受到抑制，很多孢子囊仍然保持完整狀態(tài)，其中，游動(dòng)孢子的釋放率隨著藥劑濃度的增加而減少，表明藥劑對(duì)孢子囊釋放游動(dòng)孢子起到了很好的抑制效果。

各處理抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子的結(jié)果見(jiàn)表1。

在5個(gè)濃度梯度的供試藥劑中，隨著藥劑濃度的提高，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率更為明顯。當(dāng)把藥劑稀釋到200倍、400倍和600倍時(shí)，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率接近85 %，說(shuō)明該藥劑對(duì)黃瓜霜霉病菌具有很好的抑制效果。從經(jīng)濟(jì)角度以及植株抗藥性角度考慮，建議大田使用時(shí)可選用600倍的稀釋倍數(shù)。

2.3 葉盤接種法毒力測(cè)定

用含有系列濃度藥劑的孢子囊懸浮液接種葉盤背面6 d后，葉盤的發(fā)病情況如圖4。統(tǒng)計(jì)接種的葉盤的發(fā)病情況，結(jié)果如表2所示，對(duì)照CK均發(fā)病，平均病情指數(shù)為21.33；用稀釋一定倍數(shù)藥劑的孢子囊懸浮液接種，發(fā)病情況有所減輕，并隨濃度的增加防治效果越顯著。接種情況與孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)結(jié)果稍有不同，但經(jīng)過(guò)方差分析，結(jié)果均表明，該藥劑稀釋200倍、400倍、600倍對(duì)黃瓜霜霉病的抑制效果均大于85 %，且差異不顯著；而藥劑稀釋800倍和1000倍的抑制效果與稀釋600倍之間差異顯著。葉盤接種法再次證明，該藥劑稀釋600倍是黃瓜霜霉病的最佳濃度。

3 結(jié)論與討論

用游動(dòng)孢子釋放抑制試驗(yàn)及葉盤接種法測(cè)定了供試藥劑對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效，結(jié)果均表明該藥劑可有效抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子，且對(duì)黃瓜霜霉病的發(fā)生具有很好的預(yù)防效果。不同稀釋倍數(shù)的藥劑處理，表明在稀釋600倍時(shí)，對(duì)黃瓜霜霉病病菌的抑制效果可達(dá)85 %，而800倍稀釋液的抑制效果偏低，因此，將稀釋600倍作為該藥劑大田使用的推薦濃度。

試驗(yàn)僅對(duì)該藥劑的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，關(guān)于其在大田的實(shí)際效果由于受外界各種自然條件的影響，田間試驗(yàn)尚需進(jìn)一步開(kāi)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 李明遠(yuǎn)，李興紅，嚴(yán)紅，等. 主要瓜類蔬菜霜霉病的發(fā)生與防治（一）[J].中國(guó)蔬菜，2008（4）：55-57.

[2] Palti J，Cohen Y. Downy mildew of cucurbits（Pseudoperonospora cubensis）. The fungus and its hosts，distribution，epidemio- logy，and control[J]. Phytoparasitica，1980（8）：109- 147.

摘 要：黃瓜霜霉病是一種世界性病害，每年對(duì)黃瓜生產(chǎn)造成極大損失。用阿米西達(dá)（25 %懸浮液）的稀釋液對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該藥劑可有效抑制黃瓜霜霉病菌游動(dòng)孢子的釋放，以及病菌的侵入和擴(kuò)展，600倍稀釋液的抑制效果達(dá)到85 %，可推廣用于防治黃瓜霜霉病。

關(guān)鍵詞：阿米西達(dá) 霜霉病 孢子囊 游動(dòng)孢子 葉盤

黃瓜霜霉病[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]是我國(guó)各黃瓜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種病害，最早發(fā)現(xiàn)于北美的古巴（1886年）。我國(guó)最早報(bào)道于1912年，在湖南省的南瓜上發(fā)現(xiàn) [1]。該病菌除了侵染黃瓜外，還侵染葫蘆科的大約20個(gè)屬40個(gè)種的作物，其中10個(gè)種在黃瓜屬 [2]。黃瓜霜霉病主要依靠孢子囊傳播，當(dāng)孢子囊被攜帶到葉片上后，在合適的條件下就可通過(guò)葉片的氣孔侵入植物。病菌可通過(guò)2種方式侵入：一種是孢子囊直接萌發(fā)產(chǎn)生芽管，通過(guò)氣孔侵入；另一種方式是產(chǎn)生游動(dòng)孢子，當(dāng)孢子囊在水中停留30～60 min后即破裂，可釋放游動(dòng)孢子，進(jìn)行侵染。適合條件下1個(gè)孢子囊即可產(chǎn)生15～25個(gè)游動(dòng)孢子，導(dǎo)致侵染的后果更為嚴(yán)重。同時(shí)，現(xiàn)有的防治黃瓜霜霉病的藥劑因長(zhǎng)期大量使用，使病菌產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性，因此，尋找一種新的、高效低毒的藥劑用于黃瓜霜霉病的防治尤為重要。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

高溫滅菌鍋（HVE-50，日本）、超凈工作臺(tái)（SW-CJ-2FD，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）、人工氣候箱（寧波萊福科技有限公司）、光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS，BH-2，日本）、熒光顯微鏡（Nikon H550S）、微量移液器（Eppendorf）、滅菌培養(yǎng)皿、挑針、鑷子、打孔器、1.5 mL離心管、封口袋、載玻片、蓋玻片、吸水紙。

1.2 供試材料

供試藥劑：阿米西達(dá)25 %懸浮液，瑞士先正達(dá)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

黃瓜霜霉病菌的采集、孢子囊懸浮液的制備 采集黃瓜霜霉病病葉，用毛筆蘸滅菌水洗刷病斑背面的霉層，以洗去病斑上已有的孢子囊和孢囊梗。然后將病葉放于18 ℃ 中保濕培養(yǎng)24 h待長(zhǎng)出新鮮霉層備用。取出病葉，于超凈工作臺(tái)上用毛筆將病斑上的孢子囊洗刷入盛有4 ℃ 滅菌水的培養(yǎng)皿中，并用無(wú)菌水配成一定濃度的孢子囊懸浮液（50～60個(gè)孢子囊/20倍視野）。

供試藥劑的制備。將配好的母液按比例加入孢子囊懸浮液中，形成5個(gè)濃度梯度，即終濃度為原液稀釋200倍、400倍、600倍、800倍和1000倍，用無(wú)菌水作對(duì)照。用移液管吸取0.2 mL 于凹玻片的凹槽中，每處理4次重復(fù)，于人工氣候箱中22 ℃下保濕培養(yǎng)。

孢子囊釋放游動(dòng)孢子觀察。24 h后在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每個(gè)處理統(tǒng)計(jì)約300個(gè)孢子囊，按照以下公式計(jì)算游動(dòng)孢子釋放抑制率：

孢子囊釋放率（ %）=釋放游動(dòng)孢子的孢子囊數(shù)/總孢子囊數(shù)×100

抑制效果（ %）=（對(duì)照釋放率-處理釋放率）/對(duì)照釋放率×100

1.3.2 葉盤接種法毒力測(cè)定

取健康無(wú)病的第2～8片黃瓜葉片，打取直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤在不同濃度的系列藥液中浸泡1 h后晾干，放入培養(yǎng)皿內(nèi)背面朝上懸浮于無(wú)菌水上，每個(gè)平皿10片葉盤，重復(fù)4個(gè)。在每片葉盤上接種10 μL含有相應(yīng)藥劑梯度濃度的孢子囊懸浮液（50～100個(gè)孢子囊）。置于人工氣候箱（光照16 h、黑暗8 h，溫度18 ℃～22 ℃）中培養(yǎng)6～8 d。

病情調(diào)查。根據(jù)病斑面積占葉盤面積的百分率劃分病級(jí)：0級(jí)，無(wú)?。?級(jí)，1 %～20 %；2級(jí)，21 %～50 %；3級(jí)，> 50 %。并依此計(jì)算病情指數(shù)。

病情指數(shù)= [（病級(jí)數(shù)×該病級(jí)的調(diào)查數(shù)）/（調(diào)查總數(shù)×最高級(jí)數(shù)）]×100

防效（%）= [（對(duì)照區(qū)病情指數(shù)- 處理區(qū)病情數(shù)）/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 病葉的采集及病原菌特征

苗期、成株期均可發(fā)病。主要為害葉片。子葉被害初期呈褪綠色黃斑，擴(kuò)大后變黃褐色。真葉染病，葉緣或葉背面出現(xiàn)水浸狀病斑，早晨尤為明顯，病斑逐漸擴(kuò)大，受葉脈限制，呈多角形淡褐色或黃褐色斑塊，濕度大時(shí)葉背面或葉面長(zhǎng)出灰黑色霉層。后期病斑破裂或連片，葉片干枯。（圖1）

病原菌為古巴假霜霉[Pseudoperonospora cubensis（Berk. et Curt.）Rostov]。孢囊梗自氣孔伸出，單生或2～4根束生，無(wú)色，主桿基部稍膨大，上部呈3～5次銳角分枝，分枝末端著生1個(gè)孢子囊，孢子囊卵形或橢圓形，頂端具乳突，淡褐色，單孢，大小18～41.6×14.5～27.2 um。孢子囊可直接萌發(fā)，長(zhǎng)出牙管，低溫時(shí)，孢子囊釋放出游動(dòng)孢子1～8個(gè)，在水中游動(dòng)片刻后形成休眠孢子，再產(chǎn)生出芽管，從寄主氣孔或細(xì)胞間隙侵入，在細(xì)胞間慢延，靠吸器深入細(xì)胞內(nèi)吸取營(yíng)養(yǎng)。（圖2）

2.2 孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)

在無(wú)菌水處理中，幾乎所有孢子囊均破裂釋放游動(dòng)孢子（圖3f），而用藥劑處理24 h之后，游動(dòng)孢子的釋放受到抑制，很多孢子囊仍然保持完整狀態(tài)，其中，游動(dòng)孢子的釋放率隨著藥劑濃度的增加而減少，表明藥劑對(duì)孢子囊釋放游動(dòng)孢子起到了很好的抑制效果。

各處理抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子的結(jié)果見(jiàn)表1。

在5個(gè)濃度梯度的供試藥劑中，隨著藥劑濃度的提高，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率更為明顯。當(dāng)把藥劑稀釋到200倍、400倍和600倍時(shí)，孢子囊釋放游動(dòng)孢子的抑制率接近85 %，說(shuō)明該藥劑對(duì)黃瓜霜霉病菌具有很好的抑制效果。從經(jīng)濟(jì)角度以及植株抗藥性角度考慮，建議大田使用時(shí)可選用600倍的稀釋倍數(shù)。

2.3 葉盤接種法毒力測(cè)定

用含有系列濃度藥劑的孢子囊懸浮液接種葉盤背面6 d后，葉盤的發(fā)病情況如圖4。統(tǒng)計(jì)接種的葉盤的發(fā)病情況，結(jié)果如表2所示，對(duì)照CK均發(fā)病，平均病情指數(shù)為21.33；用稀釋一定倍數(shù)藥劑的孢子囊懸浮液接種，發(fā)病情況有所減輕，并隨濃度的增加防治效果越顯著。接種情況與孢子囊釋放游動(dòng)孢子抑制試驗(yàn)結(jié)果稍有不同，但經(jīng)過(guò)方差分析，結(jié)果均表明，該藥劑稀釋200倍、400倍、600倍對(duì)黃瓜霜霉病的抑制效果均大于85 %，且差異不顯著；而藥劑稀釋800倍和1000倍的抑制效果與稀釋600倍之間差異顯著。葉盤接種法再次證明，該藥劑稀釋600倍是黃瓜霜霉病的最佳濃度。

3 結(jié)論與討論

用游動(dòng)孢子釋放抑制試驗(yàn)及葉盤接種法測(cè)定了供試藥劑對(duì)黃瓜霜霉病的室內(nèi)藥效，結(jié)果均表明該藥劑可有效抑制孢子囊釋放游動(dòng)孢子，且對(duì)黃瓜霜霉病的發(fā)生具有很好的預(yù)防效果。不同稀釋倍數(shù)的藥劑處理，表明在稀釋600倍時(shí)，對(duì)黃瓜霜霉病病菌的抑制效果可達(dá)85 %，而800倍稀釋液的抑制效果偏低，因此，將稀釋600倍作為該藥劑大田使用的推薦濃度。

試驗(yàn)僅對(duì)該藥劑的室內(nèi)藥效進(jìn)行測(cè)定，關(guān)于其在大田的實(shí)際效果由于受外界各種自然條件的影響，田間試驗(yàn)尚需進(jìn)一步開(kāi)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 李明遠(yuǎn)，李興紅，嚴(yán)紅，等. 主要瓜類蔬菜霜霉病的發(fā)生與防治（一）[J].中國(guó)蔬菜，2008（4）：55-57.

[2] Palti J，Cohen Y. Downy mildew of cucurbits（Pseudoperonospora cubensis）. The fungus and its hosts，distribution，epidemio- logy，and control[J]. Phytoparasitica，1980（8）：109- 147.