HPLC法測定黃柏青葉口服液中鹽酸小檗堿的含量

許月芳，劉皈陽，馬建麗，李 翔

0 引言

黃柏青葉口服液是由黃柏、大青葉、紫蘇葉、白鮮皮、胖大海、甘草等6味藥材組成的中藥制劑，具有清熱解毒、利咽消腫的作用，主要用于急性咽炎、肺胃實熱證所致的咽痛、咽干、咽部灼熱等癥。黃柏為方中君藥，是該中藥制劑的主要藥材之一，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的作用[1]。黃柏的主要化學成分之一是鹽酸小檗堿，研究證明其具有抗菌、抗病毒等多種作用，是口服液發(fā)揮藥理作用的主要有效成分之一[2]。為了更有效地評價和全面控制該制劑的質(zhì)量，本試驗采用高效液相色譜法測定黃柏青葉口服液中鹽酸小檗堿的含量。該方法簡便快速，結(jié)果準確可靠，可以為評價黃柏青葉口服液的質(zhì)量提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(包括四元泵、VWD檢測器、自動進樣器、ChemStation化學工作站)；Mettler AE240電子天平(梅特勒公司)。

鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200609)；十二烷基硫酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20090326)；藥材由北京市鶴延齡中藥飲片有限公司提供；黃柏青葉口服液(自制，批號：120922、121012、121025)；甲醇和乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(55:45，每100 mL加十二烷基硫酸鈉0.2 g)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：345 nm；進樣量：10 μL；柱溫：室溫。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定13.56 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成271.2 μg/mL的鹽酸小檗堿對照品儲備溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取本品1.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.22μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺黃柏的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 分別取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果顯示，陰性對照在與對照品相同的保留時間位置，無相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，表明除黃柏外的其他藥材對鹽酸小檗堿的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品儲備溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得系列對照品溶液。將系列對照品溶液依次進樣，以濃度(X)對峰面積(Y)進行回歸，得鹽酸小檗堿的回歸方程為Y=36.55 X+2.652(r=0.999 9，n=6)，結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在2.712～135.6 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.98%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液(批號：12092221)，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣10 μL，測定峰面積。結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的RSD為2.17%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復性試驗 取同一樣品(批號：12092221)，按“2.2.2”項下方法分別制備供試品溶液6份，各取10 μL進樣測定。結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為431.3 μg/mL，RSD為2.06%，表明方法的重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取鹽酸小檗堿含量為431.3 μg/mL的樣品(批號：12092221)6份，精密加入271.2 μg/mL小檗堿對照品溶液0.8 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，10 μL進樣，測定鹽酸小檗堿的含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.9 樣品測定 分別取3個批號的黃柏青葉口服液樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，測定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果批號為120922、121012、121025的樣品中，鹽酸小檗堿的含量分別為431.3、422.6、442.6 μg/mL。

3 討論

本試驗嘗試考察在不添加離子對試劑的流動相體系中鹽酸小檗堿的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，盡管可以通過添加磷酸鹽和改變pH值的辦法對鹽酸小檗堿進行有效分離，但其系統(tǒng)適應(yīng)性考察結(jié)果較差[3-6]。通過在流動相體系中添加表面活性劑，采用反相離子對色譜法可以明顯改善系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)，有利于鹽酸小檗堿的含量測定。另外，采用對照品比對的方法，可以確認在鹽酸小檗堿色譜峰前約0.5 min處的色譜峰為鹽酸巴馬汀，但因峰面積較低，無法進行含量測定。

通過比較水和甲醇對樣品溶液制備的影響，發(fā)現(xiàn)不同稀釋溶劑對含量測定的結(jié)果無影響，但在甲醇溶液中稀釋后的樣品會出現(xiàn)少量絮狀沉淀，且更易于濾膜過濾，故選擇甲醇作為樣品溶液的稀釋溶劑。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:286-287.

[2] 李波,朱維良,陳凱先.小檗堿及其衍生物的研究進展[J].藥學學報,2008,43(8):773-787.

[3] 李翔,劉皈陽,馬建麗,等.HPLC法測定扁咽口服液中鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥事,2012,26(11):1235-1237.

[4] 孟艷,倪健,姜林.RP-HPLC測定土茯苓膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(12):59-61.

[5] 葉秀金,宋粉云.HPLC測定清肺抑火丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(3):90-92.

[6] 王西彬,陳暢,何希榮,等.RP-HPLC測定三黃片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(13):128-130.