細(xì)胞免疫在三陰性乳腺癌治療中的臨床研究

王 征，翟曉建，葉新平，李 琰，郭 滿，李偉漢，張 浩

（1.河南省南陽市中心醫(yī)院乳腺外科 473000；2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，南寧 530000；3.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校普外科，河南南陽 473061）

三陰性乳腺癌（triple－negative breast cancer，TNBC）發(fā)病較低，占乳腺癌患者總數(shù)的12%～17%［1］。但其有惡性程度高、預(yù)后差等特點(diǎn)［2－4］，治療以細(xì)胞毒性藥物化療為輔助治療，但效果不佳。由于受體缺乏，內(nèi)分泌治療及針對人類表皮生長因子受體2（HER－2）過表達(dá)的靶向治療也無效［5］。所以大家都在嘗試新的治療方法。細(xì)胞因子激活殺菌細(xì)胞（CIK）細(xì)胞療法成為抗腫瘤過繼性細(xì)胞免疫治療的首選方案。本研究嘗試應(yīng)用CIK聯(lián)合化療治療TNBC，評估以CIK為基礎(chǔ)免疫治療TNBC的有效性和安全性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2007年1月至2013年1月就診于南陽市中心醫(yī)院乳腺外科、廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科、南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校普外科住院的TNBC患者420例，分成兩組，分別為CIK免疫細(xì)胞治療加TA方案化療的CIK聯(lián)合化療組和單純TA方案化療的對照組，詳細(xì)了解入組患者病史，進(jìn)行全面的體格檢查并行卡氏功能狀態(tài)評分（KPs），KPs評分標(biāo)準(zhǔn)：KPs≥60分；預(yù)計(jì)生存期大于6個(gè)月。排除心、肝、腎功能不全；并發(fā)其他惡性腫瘤；有精神或心理疾病不能配合治療及療效評估者。入組患者治療前簽署知情同意書。兩組患者年齡、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況之間無明顯差異。

1.2 方法 CIK細(xì)胞制備及回輸，先用Ficoll－泛影酸鈉（Ficoll－Hypaque）密度梯離心將患者外周血的單核細(xì)胞分離，重懸于10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養(yǎng)液中，以2×106mL－1鋪滿培養(yǎng)瓶后，按1000U／mL濃度加入γ－干擾素，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育；第2天加CD3單抗和IL－2繼續(xù)培養(yǎng)；培養(yǎng)10～14d后收集CIK細(xì)胞。經(jīng)檢驗(yàn)合格后，制成100 mL CIK細(xì)胞懸液，靜脈回輸患者。CIK細(xì)胞回輸前2d進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測，回輸前1h進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測；對輸入的CIK細(xì)胞用流式細(xì)胞儀（美國BD公司的FACS CaIiur）對CD3、CD4、CD8、NKT等標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行測定和分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，生存時(shí)間比較應(yīng)用Log－rank檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 安全性評價(jià)結(jié)果 按照WHO標(biāo)準(zhǔn)評估每次治療周期中對兩組患者化療的不良反應(yīng)強(qiáng)度，回輸后臨床觀測到無明顯的不良反應(yīng)。兩組均有白細(xì)胞、血小板減少，肝功能損害，胃腸道反應(yīng)、發(fā)熱等常見不良反應(yīng)，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應(yīng)退出4例，但均無死亡事件發(fā)生，在輸注CIK細(xì)胞過程中有2例出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)，但未超過38.5℃，觀察后退熱。兩組的不良反應(yīng)接近，見表1。

2.2 細(xì)胞免疫功能 分析兩組治療前后T細(xì)胞免疫功能檢測結(jié)果，CIK治療后CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞比例升高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 化療聯(lián)合CIK組和單純化療組患者外周血T細(xì)胞亞群的變化（）

表2 化療聯(lián)合CIK組和單純化療組患者外周血T細(xì)胞亞群的變化（）

＊：P＜0.05，與同組治療前比較；Δ：P＜0.05，與對照組治療后比較。

NKT CIK組別 CD3＋ CD4＋ CD8＋聯(lián)合治療組治療前 62.25±12.28 35.38±9.13 28.21±7.45 5.51±4.18治療后 81.14±13.38＊ 34.21±10.18 36.44±12.53Δ＊ 17.14±3.44Δ＊對照組治療前 71.43±13.42 35.71±11.62 30.82±6.51 4.63±5.27治療后 68.19±11.17 31.81±10.25 28.13±10.63 2.17±3.23

2.3 生存質(zhì)量評價(jià) 兩組患者應(yīng)用歐洲癌癥研究與治療組織生存質(zhì)量核心量表（TORTC）評估治療后的生存質(zhì)量。兩組患者軀體功能、角色功能、認(rèn)知功能、情緒功能、社會(huì)功能、整體生活質(zhì)量比較，研究組比對照組評分高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分比較（）

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分比較（）

項(xiàng)目 研究組 對照組P軀體功能 80.0±6.7 65.0±7.2 ＜0.05角色功能 67.0±8.2 50.6±7.0 ＜0.05認(rèn)知功能 81.5±4.5 67.1±10.1 ＜0.01情緒功能 63.4±8.7 54.1±6.2 ＜0.05社會(huì)功能 65.4±9.4 50.3±8.7 ＜0.05整體生活質(zhì)量 60.2±8.1 46.7±7.2 ＜0.01

圖1 兩組間生存曲線的比較

2.4 化療加CIK組與單純化療組患者治療后的生存時(shí)間評價(jià) 通過電話隨訪、門診復(fù)診及書信隨訪等形式，隨訪6～48個(gè)月，其中，失訪13例，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應(yīng)退出4例。應(yīng)用Log－rank檢驗(yàn)比較兩組生存時(shí)間，得出χ2＝5.982，P＝0.021，提示化療聯(lián)合CIK治療提高患者的生存時(shí)間，見圖1。

3 討 論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中存在免疫逃避、免疫抑制的機(jī)制。CIK是過繼性免疫治療中的一種常見的、有效的手段。安全性高，在心包內(nèi)灌注也有較高的安全性［6］。在本研究中發(fā)現(xiàn)CIK聯(lián)合化療與單純化療的不良反應(yīng)相近，僅在單純輸注CIK免疫細(xì)胞過程中出現(xiàn)中度發(fā)熱，但無惡性不良反應(yīng)發(fā)生。CIK細(xì)胞在外周血中的含量極少（約為1%～5%），只有擴(kuò)增后才能應(yīng)用于臨床腫瘤的治療。臨床中使用的CIK細(xì)胞是通過將采集的患者外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外與抗CD3微粒體抗體（McAb）、IL－2及干擾素－γ（IFN－γ）等細(xì)胞因子共同培養(yǎng)，然后獲得一種異質(zhì)細(xì)胞群。該細(xì)胞群兼具T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性及NK細(xì)胞的非主要組織相容性復(fù)合體限制性殺傷腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)［7］。CIK細(xì)胞對不同腫瘤細(xì)胞株有很強(qiáng)的殺傷作用［8］。CIK細(xì)胞與淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（lymphokine activated killer cells，LAK）［9］、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（tumor infiltration lymphocyte，TIL）和 CD3單抗激活的殺傷細(xì)胞（anti－CD3 antibody induced activated killer，CD3AK）等過繼性免疫治療手段相比，具有細(xì)胞擴(kuò)增快、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣泛、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞療效佳、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢，已成為過繼性細(xì)胞免疫抗腫瘤治療的首選方案。CIK細(xì)胞治療能夠降低腫瘤患者外周血TRAG比例，提高CD3＋、CD4＋細(xì)胞比例及CD4＋／CD8＋細(xì)胞比值，從而減輕或消除腫瘤患者的免疫抑制狀態(tài)［10］。本研究中檢測T治療后細(xì)胞亞群相對計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，CIK聯(lián)合化療治療后患者CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞百分比較治療前明顯提高，與單純化療組相比，CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞百分比也升高，單純化療組患者T細(xì)胞亞群比例降低，說明患者接受CIK治療后免疫細(xì)胞增加，免疫功能增強(qiáng)，減輕了化療引起的免疫抑制作用，說明CIK治療有助患者T細(xì)胞功能的恢復(fù)，達(dá)到抗腫瘤目的。在生存質(zhì)量評價(jià)中，EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分均有提高，提示腫瘤患者整體生活質(zhì)量改善。生存時(shí)間上，本研究中患者的生存時(shí)間與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，生存時(shí)間高于對照組，說明在預(yù)后方面有較好的效果。總之，CIK細(xì)胞免疫治療作為輔助治療有較好的有效性及安全性，為TNBC的治療提供了一種新的選擇。

［1］Foulkes WD，Smith IE，Reis－Filho JS.Triple－negative breast cancer［J］.N Engl J Med，2010，363（20）：1938－1948.

［2］Solin LJ，Hwang WT，Vapiwala N.Outcome after breast conservation treatment with radiation for women with triple－negative early－stage invasive breast carcinoma［J］.Clin Breast Cancer，2009，9（2）：96－100.

［3］Lund MJ，Trivers KF，Porter PL，et al.Race and triple negative threats to breast cancer survival：apopulationbased study in Atlanta，GA［J］.Breast Cancer Res Treat，2009，113（2）：357－370.

［4］Chu QD，Henderson AE，Ampil F，et al.Outcome for patients with triple－negative breast cancer is not dependent on race／ethnicity［J］.Int J Breast Cancer，2012，27（6）：764－770.

［5］Liedtke C，Mazouni C，Hess KR，et al.Response to neoadjuvant therapy and long－term survival in patients with tri－ple－negative breast cancer［J］.J Clin Oncol，2007，26（8）：1275－1281.

［6］熊銳華，田秀榮，姚紅兵，等.CIK細(xì)胞的心包腔內(nèi)灌注在惡性心包積液治療中的臨床研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42（2）：151－153.

［7］Verneris MR，Karami M，Baker J，et al.Role of NKG2D signaling in the cytotoxicity of activated and expanded CD8＋T cells［J］.Blood，2004，103（8）：3065－3072.

［8］李新靈，王志爽，邵曉楓，等.CIK細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)及對不同腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用［J］.天津醫(yī)藥，2013，25（8）：759－762.

［9］Yashin DV，Sashchenko LP，Kabanova OD，et al.The CD8＋population of LAK cells can lyse both HLA－positive and HLA－negative cancer cell lines［J］.Dokl Biol Sci，2009，426：296－297.

［10］羅光華，馬鳴，郭莉莉，等.CIK細(xì)胞治療對腫瘤患者外周血免疫細(xì)胞亞型的影響［J］.中國腫瘤生物治療雜志，2013，36（4）：475－477.