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    拮抗放線菌06—6的篩選鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化

    2014-08-12 13:47:01郝永麗宗兆鋒高博胡海波曲寶茹
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年6期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵條件篩選鑒定

    郝永麗 宗兆鋒 高博 胡海波 曲寶茹

    摘要:從采集的土樣中分離出拮抗放線菌,并篩選出對4種靶標(biāo)菌均具有明顯拮抗效果的菌株06-6,對該菌株進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化及生理生化鑒定,從而確定該菌株的最佳發(fā)酵技術(shù)參數(shù),通過鑒定初步將其歸類為灰紅紫類群(Griseorubroviolaceus)。

    關(guān)鍵詞:拮抗放線菌;篩選;鑒定;發(fā)酵條件;優(yōu)化

    中圖分類號: Q939.92文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號:1002-1302(2014)06-0107-03

    收稿日期:2013-09-25

    基金項(xiàng)目:教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(編號:200558);國家高等學(xué)校學(xué)科創(chuàng)新引智計(jì)劃(編號:B07049)。

    作者簡介:郝永麗(1981—),女,內(nèi)蒙古赤峰人,碩士,助理研究員,從事園藝植物病蟲害防治研究。E-mail:yonglihao1981@163.com。拮抗菌作為一種具有豐富資源的微生物類群,其產(chǎn)生的抗生素及其他次生代謝物質(zhì)在農(nóng)作物病蟲害生物防治方面具有重要作用,是具有使用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一類微生物,在植物病蟲害生物防治中應(yīng)用前景廣[1-4]。利用拮抗放線菌產(chǎn)生的活性物質(zhì)進(jìn)行真菌病害防治,具有周期短、易于研究、便于生產(chǎn)、無毒害等優(yōu)點(diǎn)。本研究旨在從采集的土樣中分離篩選殺菌力強(qiáng)、抗菌譜廣的拮抗放線菌;并對其發(fā)酵條件和分類進(jìn)行研究,為優(yōu)勢拮抗放線菌在生物防治中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1材料與方法

    1.1材料

    1.1.1土樣來源試驗(yàn)用土壤標(biāo)本分別采集于陜西商洛、周至、乾縣、戶縣及山東諸城。

    1.1.2供試病原菌供試靶標(biāo)菌由西北農(nóng)林科技大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室提供,包括番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、蘋果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、西瓜枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp. niveum)和粉紅聚端孢(Trichothecium roseum)。

    1.2篩選方法

    1.2.1菌株的分離與純化采集的土壤過篩,研磨后稱取 0.1 g 樣品,制備成不同濃度的稀釋液[5]。用移液器吸取特定稀釋濃度的液體20 μL,滴在高氏培養(yǎng)基表面,涂勻。將皿倒置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),幾天后從皿內(nèi)分離出單菌落,用顯微鏡檢純化,保存于G氏斜面中。

    1.2.2拮抗放線菌的篩選用打孔器將培養(yǎng)好的放線菌菌苔打成直徑5 mm的菌餅置于PDA平板中間,3 d后將同樣大小的4種供試病原真菌菌餅對峙接于兩側(cè),21 ℃下培養(yǎng),觀察并測量抑菌圈的大小。將初篩得到的菌株于SNB培養(yǎng)液中振動(dòng)培養(yǎng),發(fā)酵液離心后取上清液,采用微孔擴(kuò)散法測定發(fā)酵液及發(fā)酵濾液的抑菌活性,供試靶標(biāo)菌為西瓜枯萎菌。

    1.3拮抗菌的形態(tài)和生理生化鑒定

    將待鑒定的菌株作插片培養(yǎng),觀察記載其生長情況、基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲的顏色、形態(tài)及是否產(chǎn)生可溶性色素[6]。菌株生理生化鑒定參照文獻(xiàn)[7],包括淀粉水解、H2S產(chǎn)生、黑色素產(chǎn)生、碳源利用、纖維素水解、牛奶凝固和液化等[8]。

    1.4拮抗菌株發(fā)酵條件優(yōu)化

    1.4.1培養(yǎng)基的篩選將菌株06-6分別接種于13種液體發(fā)酵培養(yǎng)基(具體成分見表1)中,28 ℃下?lián)u床培養(yǎng)6 d,將發(fā)酵液離心,取其上清液備用。選擇西瓜枯萎菌為靶標(biāo)菌,在準(zhǔn)備好的PDA平板上均勻涂好靶標(biāo)菌。將3張9 mm2大小的濾紙片均勻鋪于PDA平板上,每張小紙片滴入10 μL的發(fā)酵上清液。3 d后測量數(shù)據(jù),用抑菌圈直徑表示不同培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下的菌株06-6對病原菌拮抗作用的強(qiáng)弱。1.4.2最適裝液量pH值自然,分別在250 mL三角瓶中加入DBY液體培養(yǎng)基25、50、75、100、125、150 mL。滅菌后接種菌株06-6,置搖床發(fā)酵培養(yǎng)6 d后,將各發(fā)酵上清液分別加入到準(zhǔn)備好的PDA平板中央[9]。5 d后測量抑菌作用。

    1.4.3最佳發(fā)酵時(shí)間pH值自然,250 mL三角瓶中接種 06-6 菌懸液,置搖床培養(yǎng),分別于4、5、6、7、8、9 d時(shí)測量抑菌作用,確定最宜發(fā)酵時(shí)間。

    1.4.4發(fā)酵初始pH值利用選擇好的瓶裝量和培養(yǎng)時(shí)間,將初始pH值分別調(diào)至6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。測量抑菌作用。

    2結(jié)果與分析

    2.1拮抗菌株的分離和篩選

    利用稀釋分離法,從采集的土樣中分離放線菌。結(jié)果表明,在分離出的放線菌中對4種病原真菌有很強(qiáng)抑制作用的菌株有4株,其中菌株06-6無論在皿內(nèi)拮抗試驗(yàn)還是在發(fā)酵液抑菌作用測定方面都表現(xiàn)出極強(qiáng)的抑菌效果。

    2.2拮抗菌06-6的形態(tài)和生理生化特征

    2.2.1形態(tài)特征菌株06-6在高氏一號培養(yǎng)基中,氣生菌絲直,呈灰色;基內(nèi)菌絲培養(yǎng)初期為白色,到孢子成熟以后轉(zhuǎn)

    表2菌株06-6的代謝產(chǎn)物對病原菌的抑制作用

    處理抑菌圈直徑(cm)灰葡萄孢西瓜枯萎菌粉紅聚端孢蘋果炭疽菌菌餅29.510.0 29.5 27.0 發(fā)酵液22.3 21.7 24.5 19.8

    為橙黃色;孢子橢圓形,表面光滑,串生;孢子絲不結(jié)球。

    2.2.2菌株06-6的生理生化特性菌株06-6可使牛奶鈍化,明膠不液化,淀粉水解;纖維素中能生長,但是不利用;不產(chǎn)生硫化氫。該菌可利用蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖、肌糖、山梨糖、半乳糖、阿拉伯糖;不能利用木糖。

    2.3拮抗菌發(fā)酵條件優(yōu)化

    2.3.1不同培養(yǎng)基對菌株抑菌活性的影響從圖1可以看出,菌株06-6在DBY、SNB、aSNB培養(yǎng)基中的發(fā)酵液抑菌率較高,其中對西瓜枯萎菌抑制效果最好是在DBY中培養(yǎng)的菌株發(fā)酵液,抑菌圈直徑達(dá) 23 mm。確定DBY為最佳培養(yǎng)基,配方為葡萄糖4.0 g、大豆粉0.5 g、酵母粉0.5 g、硫酸銨 0.5 g、NaCl 0.1 g、K2HPO4 0005 g。

    2.3.2幾個(gè)發(fā)酵參數(shù)對發(fā)酵液抑菌作用的影響本試驗(yàn)在

    以DBY為基礎(chǔ)培養(yǎng)基條件下,確定了菌株06-6的最適宜發(fā)酵參數(shù),即發(fā)酵初始pH值7.5、瓶裝量50 mL、培養(yǎng)時(shí)間 6 d、搖床轉(zhuǎn)速150 r/min

    3結(jié)論與討論

    3.1拮抗菌株的分離篩選

    圍繞如何改進(jìn)和提高植物病害生物防治的效果,找出具有高效生防作用的拮抗菌株,本試驗(yàn)從采集的土樣中,通過皿內(nèi)拮抗試驗(yàn)篩選出4株代表菌株,進(jìn)一步篩選后得到優(yōu)秀菌株06-6。皿內(nèi)檢測作為篩選有效生防菌的重要指標(biāo),具有簡便快捷的特點(diǎn),可以在短時(shí)間內(nèi)對多數(shù)菌株進(jìn)行篩選。試驗(yàn)所采用的供試靶標(biāo)菌有限,可能會(huì)漏選一些對供試靶標(biāo)菌之外的其他菌株有拮抗作用的菌株。

    3.2菌株06-6發(fā)酵參數(shù)研究

    放線菌的發(fā)酵是一個(gè)復(fù)雜過程,受諸多條件的影響。除受培養(yǎng)基成分影響外,還受培養(yǎng)時(shí)間、初始pH值、溫度、通氣量等因素的影響[10]。因此,必須研究生產(chǎn)菌種的最佳發(fā)酵技術(shù)參數(shù),設(shè)計(jì)合理的發(fā)酵工藝,使生產(chǎn)菌種處于最佳發(fā)酵條件下,為其進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)和生物農(nóng)藥的開發(fā)提供理論依據(jù)。

    2.3菌株06-6的形態(tài)觀察和生理生化鑒定

    本試驗(yàn)通過對菌株06-6的形態(tài)觀察和生理生化鑒定,將菌株初步歸類為灰紅紫類群(Griseorubroviolaceus)。近年來,放線菌的分類一般是化學(xué)分類和分子分類等幾種分類依據(jù)的結(jié)合,而不再是單純地形態(tài)分類和化學(xué)分類。對新分離的菌株,單靠一種分類方法是不可靠的,需要傳統(tǒng)的經(jīng)典分類、數(shù)值分類、化學(xué)分類、分子分類等幾種信息的綜合[11]。因此,該菌株的分類還有待于用分子鑒定等其他方法進(jìn)行驗(yàn)證。

    參考文獻(xiàn):

    [1]徐劍宏,王建偉,胡曉丹,等. 小麥赤霉病菌拮抗菌AF0907的分離鑒定及其拮抗特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(3):517-522.

    [2]劉永鋒,陸凡,陳志誼,等. 拮抗細(xì)菌T429和T392的生物活性及其對水稻白葉枯病的防治效果[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(4):733-737.

    [3]周德慶. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1986.

    [4]郭風(fēng)柳,張海穎,李勇,等. 馬鈴薯瘡痂病拮抗菌株B1的鑒定及防效測定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(5):90-93.

    [5]安德榮,慕小倩,劉翠娟,等. 土壤拮抗放線菌的分離和篩選[J]. 微生物學(xué)雜志,2002,22(5):1-3.

    [6]尹莘耘. 農(nóng)用抗生素和抗生菌的篩選[J]. 抗生素,1983,8(1):64-65.

    [7]中國科學(xué)院微生物研究所放線菌分類組.鏈霉菌鑒定手冊[M]. 北京:科學(xué)出版社,1975:11-12.

    [8]徐長倫,董平,吾提庫爾·馬合木提,等. 防治哈密瓜疫霉病抗生素產(chǎn)生菌的鑒定[J]. 微生物學(xué)通報(bào),1994,21(6):350-352.

    [9]莊敬華,高增貴,劉限,等. 不同發(fā)酵條件對木霉產(chǎn)孢類型的影響[J]. 中國生物防治,2005(1):37-40.

    [10]劉翠娟,段琦梅,安德榮. 抗真菌拮抗放線菌的篩選及搖床發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 微生物學(xué)雜志,2004,24(4):12-14.

    [11]Mehling A,Wehmeier U F,Piepersberg W. Nucleotide sequences of streptomycete 16S ribosomal DNA:towards a specific identification system for streptomycetes using PCR[J]. Microbiology,1995,141:2139-2147.

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