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    香樟精油的體外抑菌活性秦海燕

    2014-08-11 03:03:28劉如沁黃愛(ài)玲索志榮
    科技創(chuàng)新與應(yīng)用 2014年24期
    關(guān)鍵詞:香樟金黃色精油

    劉如沁 黃愛(ài)玲 索志榮

    摘 要:采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明:香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。

    關(guān)鍵詞:香樟;精油;抑菌香樟(Cinamomum Camphora (Linn.)Presl)系樟樹(shù)屬的常綠喬木植物,其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油,它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料,還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn),精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2,3]。當(dāng)今在動(dòng)植物病原菌對(duì)化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢(shì)下,精油因具有自然揮發(fā)的特性,可作為一種有待開(kāi)發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對(duì)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討,以便為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù),也為開(kāi)發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    供試菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC26112),購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

    香樟精油不溶于水,以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油,加入5ml丙酮,震蕩搖勻,配置成50%的溶液,裝入棕色瓶作為母液,二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

    1.2.2 菌懸液的制備

    將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后,用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán),收集到內(nèi)盛10mL無(wú)菌水的三角瓶中,配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液,備用。

    1.2.3 香樟油的抑菌活性測(cè)定

    待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后,在無(wú)菌條件下,取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無(wú)菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時(shí),瀝干,平鋪在培養(yǎng)皿上,每平板鋪2片。以丙酮作為空白對(duì)照,以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽(yáng)性對(duì)照,于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察,并測(cè)定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn):濾紙片直徑為6mm時(shí),抑菌圈直徑大于20mm,極敏;15~20mm,高敏;10~15mm,中敏;7~9mm,低敏;小于7mm,不敏感[5]。

    1.2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定[6]

    將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻,待培養(yǎng)基凝固后,即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫(huà)線接種菌液,37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長(zhǎng)情況,生長(zhǎng)菌體為陽(yáng)性(+),不生長(zhǎng)菌體為陰性(-),以不生長(zhǎng)菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度(MIC),以丙酮作為陰性對(duì)照。重復(fù)2次。

    2 結(jié)果與分析

    香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性測(cè)定結(jié)果

    表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

    表2 香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測(cè)定

    “+”表示培養(yǎng)基有菌落生長(zhǎng),“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

    從表1、2看出,不同濃度香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大,為13.1mm,在10~15mm之間,屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測(cè)定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時(shí)平板中沒(méi)有檢出菌落,6.25%時(shí)平板中檢出少量菌落,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng),故其對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

    3 結(jié)束語(yǔ)

    該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm,金黃色葡萄球菌對(duì)香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛(ài)民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇(24.09%)、桉油醇(15.72%)、α-松油醇(11.20%)、蛇床-6-烯-4-醇(5.724%)[9],其中,芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10],是樟樹(shù)葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國(guó)亞熱帶綠闊葉林的主要樹(shù)種之一,資源豐富,加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開(kāi)發(fā)香樟油的開(kāi)發(fā)和利用。

    參考文獻(xiàn)

    [1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011,28(2):16-19.

    [2]楊致年,曾超,朱宗良,等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技,2000,21(3):37-39.

    [3]孫偉,肖家祁.中草藥精油對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2005,39(10):54-55.

    [4]楊森艷,姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J],上海交通大學(xué)學(xué)報(bào),2005,23(4):375-382.

    [5]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程3版[M].南京:東南大學(xué)出版社,1997.

    [6]吳均,楊欽滟,趙曉娟,等.山蒼子油的抑菌活性及機(jī)理研究[J],食品工業(yè)科技,2013,34(17):119-125.

    [7]馬英姿,譚琴,李恒熠,等.樟樹(shù)葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(1):36-40.

    [8]李愛(ài)民,唐永勤,卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業(yè)科技,2006,33(4):121-123.

    [9]劉亞,李茂昌,張永聰,等.香樟樹(shù)葉揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].分析試驗(yàn)室,2008,27(1):88-92.

    [10]國(guó)家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986.

    作者簡(jiǎn)介:秦海燕(1975-),女,碩士,講師,主要從事藥用植物活性研究。endprint

    摘 要:采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明:香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。

    關(guān)鍵詞:香樟;精油;抑菌香樟(Cinamomum Camphora (Linn.)Presl)系樟樹(shù)屬的常綠喬木植物,其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油,它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料,還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn),精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2,3]。當(dāng)今在動(dòng)植物病原菌對(duì)化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢(shì)下,精油因具有自然揮發(fā)的特性,可作為一種有待開(kāi)發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對(duì)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討,以便為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù),也為開(kāi)發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    供試菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC26112),購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

    香樟精油不溶于水,以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油,加入5ml丙酮,震蕩搖勻,配置成50%的溶液,裝入棕色瓶作為母液,二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

    1.2.2 菌懸液的制備

    將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后,用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán),收集到內(nèi)盛10mL無(wú)菌水的三角瓶中,配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液,備用。

    1.2.3 香樟油的抑菌活性測(cè)定

    待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后,在無(wú)菌條件下,取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無(wú)菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時(shí),瀝干,平鋪在培養(yǎng)皿上,每平板鋪2片。以丙酮作為空白對(duì)照,以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽(yáng)性對(duì)照,于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察,并測(cè)定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn):濾紙片直徑為6mm時(shí),抑菌圈直徑大于20mm,極敏;15~20mm,高敏;10~15mm,中敏;7~9mm,低敏;小于7mm,不敏感[5]。

    1.2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定[6]

    將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻,待培養(yǎng)基凝固后,即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫(huà)線接種菌液,37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長(zhǎng)情況,生長(zhǎng)菌體為陽(yáng)性(+),不生長(zhǎng)菌體為陰性(-),以不生長(zhǎng)菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度(MIC),以丙酮作為陰性對(duì)照。重復(fù)2次。

    2 結(jié)果與分析

    香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性測(cè)定結(jié)果

    表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

    表2 香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測(cè)定

    “+”表示培養(yǎng)基有菌落生長(zhǎng),“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

    從表1、2看出,不同濃度香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大,為13.1mm,在10~15mm之間,屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測(cè)定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時(shí)平板中沒(méi)有檢出菌落,6.25%時(shí)平板中檢出少量菌落,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng),故其對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

    3 結(jié)束語(yǔ)

    該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm,金黃色葡萄球菌對(duì)香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛(ài)民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇(24.09%)、桉油醇(15.72%)、α-松油醇(11.20%)、蛇床-6-烯-4-醇(5.724%)[9],其中,芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10],是樟樹(shù)葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國(guó)亞熱帶綠闊葉林的主要樹(shù)種之一,資源豐富,加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開(kāi)發(fā)香樟油的開(kāi)發(fā)和利用。

    參考文獻(xiàn)

    [1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011,28(2):16-19.

    [2]楊致年,曾超,朱宗良,等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技,2000,21(3):37-39.

    [3]孫偉,肖家祁.中草藥精油對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2005,39(10):54-55.

    [4]楊森艷,姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J],上海交通大學(xué)學(xué)報(bào),2005,23(4):375-382.

    [5]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程3版[M].南京:東南大學(xué)出版社,1997.

    [6]吳均,楊欽滟,趙曉娟,等.山蒼子油的抑菌活性及機(jī)理研究[J],食品工業(yè)科技,2013,34(17):119-125.

    [7]馬英姿,譚琴,李恒熠,等.樟樹(shù)葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(1):36-40.

    [8]李愛(ài)民,唐永勤,卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業(yè)科技,2006,33(4):121-123.

    [9]劉亞,李茂昌,張永聰,等.香樟樹(shù)葉揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].分析試驗(yàn)室,2008,27(1):88-92.

    [10]國(guó)家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986.

    作者簡(jiǎn)介:秦海燕(1975-),女,碩士,講師,主要從事藥用植物活性研究。endprint

    摘 要:采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明:香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。

    關(guān)鍵詞:香樟;精油;抑菌香樟(Cinamomum Camphora (Linn.)Presl)系樟樹(shù)屬的常綠喬木植物,其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油,它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料,還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn),精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2,3]。當(dāng)今在動(dòng)植物病原菌對(duì)化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢(shì)下,精油因具有自然揮發(fā)的特性,可作為一種有待開(kāi)發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對(duì)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討,以便為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù),也為開(kāi)發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    供試菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC26112),購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

    香樟精油不溶于水,以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油,加入5ml丙酮,震蕩搖勻,配置成50%的溶液,裝入棕色瓶作為母液,二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

    1.2.2 菌懸液的制備

    將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后,用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán),收集到內(nèi)盛10mL無(wú)菌水的三角瓶中,配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液,備用。

    1.2.3 香樟油的抑菌活性測(cè)定

    待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后,在無(wú)菌條件下,取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無(wú)菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時(shí),瀝干,平鋪在培養(yǎng)皿上,每平板鋪2片。以丙酮作為空白對(duì)照,以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽(yáng)性對(duì)照,于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察,并測(cè)定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn):濾紙片直徑為6mm時(shí),抑菌圈直徑大于20mm,極敏;15~20mm,高敏;10~15mm,中敏;7~9mm,低敏;小于7mm,不敏感[5]。

    1.2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定[6]

    將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻,待培養(yǎng)基凝固后,即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫(huà)線接種菌液,37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長(zhǎng)情況,生長(zhǎng)菌體為陽(yáng)性(+),不生長(zhǎng)菌體為陰性(-),以不生長(zhǎng)菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度(MIC),以丙酮作為陰性對(duì)照。重復(fù)2次。

    2 結(jié)果與分析

    香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性測(cè)定結(jié)果

    表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

    表2 香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測(cè)定

    “+”表示培養(yǎng)基有菌落生長(zhǎng),“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

    從表1、2看出,不同濃度香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大,為13.1mm,在10~15mm之間,屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測(cè)定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時(shí)平板中沒(méi)有檢出菌落,6.25%時(shí)平板中檢出少量菌落,當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時(shí),可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng),故其對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

    3 結(jié)束語(yǔ)

    該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm,金黃色葡萄球菌對(duì)香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛(ài)民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇(24.09%)、桉油醇(15.72%)、α-松油醇(11.20%)、蛇床-6-烯-4-醇(5.724%)[9],其中,芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10],是樟樹(shù)葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國(guó)亞熱帶綠闊葉林的主要樹(shù)種之一,資源豐富,加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開(kāi)發(fā)香樟油的開(kāi)發(fā)和利用。

    參考文獻(xiàn)

    [1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011,28(2):16-19.

    [2]楊致年,曾超,朱宗良,等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技,2000,21(3):37-39.

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    作者簡(jiǎn)介:秦海燕(1975-),女,碩士,講師,主要從事藥用植物活性研究。endprint

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