血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)在新生兒缺氧缺血性腦病中的臨床意義

徐 明，洪 菲

(江蘇省南通市第一人民醫(yī)院，江蘇 南通 226000)

血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)在新生兒缺氧缺血性腦病中的臨床意義

徐 明，洪 菲

(江蘇省南通市第一人民醫(yī)院，江蘇 南通 226000)

目的 研究血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA聯(lián)合檢測(cè)在新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)中的臨床意義。方法 選擇32例新生兒HIE(HIE組)，30例非HIE的窒息新生兒(非HIE組)和12例健康新生兒(正常組)，檢測(cè)3組出生后24 h血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量，并比較3組實(shí)驗(yàn)指標(biāo)陽(yáng)性者與陰性者生后28 d新生兒神經(jīng)行為測(cè)定(NBNA)變化。結(jié)果 出生24 h HIE組S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性率顯著高于其他2組(P均<0.05)，HIE組中兩者同時(shí)陽(yáng)性對(duì)HIE診斷特異性最高(P<0.05)，且28 d NBNA評(píng)分低于單項(xiàng)陽(yáng)性的2組(P均<0.05)。結(jié)論 出生24 h血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量與HIE患兒的腦部損傷程度相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)特異性更高。

缺氧缺血性腦病；S-100B蛋白；Par-4 mRNA；新生兒

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是由于各種圍生期因素引起的腦缺氧和血流減少或暫停而致胎兒和新生兒腦損傷，是兒童神經(jīng)系統(tǒng)傷殘的主要原因之一。早期診斷及正確評(píng)估其腦細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度對(duì)降低新生兒死亡和減輕神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥有十分重要意義，目前HIE早期診斷的指標(biāo)較多，包括腦電圖、腦CT、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等，但大多數(shù)文獻(xiàn)對(duì)其單獨(dú)檢測(cè)在HIE中的臨床意義有報(bào)道。本文旨在探討聯(lián)合檢測(cè)血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA在診斷和判斷HIE預(yù)后方面的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取本院新生兒科2011年1—12月62例生后24 h內(nèi)以窒息住院新生兒，HIE診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床分度依據(jù)《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)》[1]。根據(jù)有無(wú)HIE分組，其中HIE組32例，男18例，女14例；胎齡36.5～39.5(38.5±2.1)周；出生體質(zhì)量2.56～4.01(3.36±0.23)kg。 非HIE組30例，男16例，女14例；胎齡36.2～40.1(38.6±2.4)周；出生體質(zhì)量2.67～3.97(3.39±0.19)kg。并選擇同期本院產(chǎn)科出生24 h內(nèi)的健康新生兒12例為正常組，男7例，女5例；胎齡36.6～40.3(39±2.5)周；出生體質(zhì)量2.61～4.03(3.41±0.27)kg，并排除顱內(nèi)出血、各種先天畸形、遺傳代謝病及失訪等。3組胎齡、體質(zhì)量、男女構(gòu)成均無(wú)顯著性差異(P均>0.05)。

1.2 方法 對(duì)HIE組、非HIE組及正常組的新生兒均在出生24 h抽取靜脈血3 mL，其中2 mL用低溫離心后于-70 ℃儲(chǔ)存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，檢測(cè)S-100B蛋白；其中1 mL分離外周血中淋巴細(xì)胞，用Trizol抽提總RNA，用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物為正義：5’-ATCCCCGAACAGATAGAAGT-3’,反義：5’-AAAAGCAGGTTTCCCACAC-3’，PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，UVP凝膠掃描系統(tǒng)進(jìn)行掃描，以目的條帶Par-4的A值占內(nèi)參照GAPDH的A值百分比(%)表示Par-4 mRNA表達(dá)水平，分別統(tǒng)計(jì)S-100B蛋白陽(yáng)性、Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性及兩者同時(shí)陽(yáng)性的例數(shù)，并計(jì)算各自敏感性，特異性。在室溫(22～27 ℃)、半暗的安靜環(huán)境中，由經(jīng)過(guò)訓(xùn)練不知道分組的主治醫(yī)師對(duì)HIE組患兒進(jìn)行新生兒神經(jīng)行為測(cè)定(NBNA)，判斷其神經(jīng)系統(tǒng)功能及估計(jì)預(yù)后情況。NBNA是由鮑秀蘭等[2]制定的20項(xiàng)新生兒神經(jīng)測(cè)查法，內(nèi)容包括行為能力6項(xiàng)、被動(dòng)肌張力4項(xiàng)、主動(dòng)肌張力4項(xiàng)、原始反射3項(xiàng)和一般評(píng)價(jià)3項(xiàng)，每項(xiàng)評(píng)分有3個(gè)度(0，1，2分)，滿分40分，≥35分為正常，<35分為異常。

2 結(jié) 果

2.1 3組S-100B蛋白及Par-4 mRNA陽(yáng)性表達(dá)情況比較3組間S-100B蛋白陽(yáng)性率、Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性率、兩者同時(shí)陽(yáng)性的陽(yáng)性率比較均有顯著性差異(P均<0.05)。HIE組與非HIE組內(nèi)S-100B蛋白陽(yáng)性率與Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性率比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，兩者同時(shí)陽(yáng)性率均顯著低于兩者單獨(dú)陽(yáng)性的陽(yáng)性率，均有顯著性差異(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組血清S-100B、Par-4 mRNA陽(yáng)性率比較 %

注:①與HIE組比較，P<0.05；②與S-100B蛋白陽(yáng)性比較，P<0.05；③與S-100B蛋白陽(yáng)性比較，P>0.05。

2.2 HIE組S-100B蛋白陽(yáng)性、Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性、兩者同時(shí)陽(yáng)性的敏感性、特異性的比較 HIE組S-100B蛋白敏感性最高，兩者同時(shí)陽(yáng)性的特異性最高(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 HIE組S-100B蛋白陽(yáng)性、Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性、兩者同時(shí)陽(yáng)性的敏感性及特異性比較 %

注：①與S-100B蛋白比較，P<0.05；②與Par-4mRNA比較，P<0.05。

2.3 HIE組中S-100B陽(yáng)性、Par-4 mRNA陽(yáng)性及兩者同陽(yáng)性的患兒生后28 d NBNA評(píng)分比較 兩種實(shí)驗(yàn)指標(biāo)中陽(yáng)性和陰性患兒生后28 d NBNA評(píng)分比較有顯著性差異(P<0.05)，S-100B蛋白陽(yáng)性患兒與Par-4 mRNA陽(yáng)性患兒比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但分別與兩者均陽(yáng)性的患兒比較有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 HIE組中S-100B陽(yáng)性或Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性、兩者同時(shí)陽(yáng)性患兒生后28 dNBNA評(píng)分比較，分)

注：①表示S-100B與Par-4 mRNA表達(dá)量同時(shí)陰性和兩者之一陰性；②與陰性比較，P<0.05；③與S-100B比較，P>0.05；④與S-100B比較，P<0.05。

3 討 論

HIE是圍生期窒息缺氧導(dǎo)致的缺氧缺血性腦損傷，其發(fā)病率高，重癥患兒將會(huì)發(fā)生腦癱、癲癇等嚴(yán)重后遺癥，故早期診斷、早期干預(yù)、判斷預(yù)后對(duì)降低兒童致殘率有重要意義。S-100B蛋白和Par-4 mRNA對(duì)HIE的早期診斷、程度和預(yù)后的判斷均有較高的臨床價(jià)值[3-4]。

S-100B蛋白于1965年由Moore等[5]在牛腦組織中發(fā)現(xiàn)。S-100B蛋白主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中，當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，S-100B蛋白從胞液中滲出進(jìn)入腦脊液，再經(jīng)受損的血-腦脊液屏障進(jìn)入血液，S-100B蛋白增高是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷特異和靈敏的生化指標(biāo)[6]。S-100B蛋白可作為星形細(xì)胞的特異性蛋白，在缺氧缺血性腦損傷時(shí)有不同程度的升高，其升高程度與病情嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，足月新生兒在發(fā)生窒息后24 h內(nèi)血清S-100B蛋白水平升高，且達(dá)到高峰[7-8]。Par-4基因在缺血性腦損害的發(fā)病機(jī)制中占重要地位，缺氧缺血誘導(dǎo)了外周血淋巴細(xì)胞Par-4的基因轉(zhuǎn)錄，所以HIE患兒外周血淋巴細(xì)胞中Par-4 mRNA表達(dá)量顯著上調(diào)，且與HIE的嚴(yán)重程度一致[4]。既往臨床中單獨(dú)檢測(cè)上述指標(biāo)敏感性較高，但有一定的假陽(yáng)性率，對(duì)臨床分析病情帶來(lái)一定誤導(dǎo)。

在本研究中，生后24 h HIE組新生兒血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性率比非HIE組和正常組均升高，非HIE組與正常組比較無(wú)顯著性差異，說(shuō)明血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量能明顯預(yù)示腦組織損傷的發(fā)生。而對(duì)HIE診斷的敏感性和特異性評(píng)價(jià)，S-100B蛋白的敏感性最高，但其特異性最差，而兩者同時(shí)陽(yáng)性的特異性最高，故兩者同時(shí)陽(yáng)性對(duì)診斷HIE更有意義。新生兒神經(jīng)行為測(cè)定評(píng)分法是我國(guó)兒科早教專(zhuān)家鮑秀蘭教授修訂的篩查標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)篩查腦損傷高危兒及早期評(píng)估有較好的價(jià)值。NBNA評(píng)分可早期發(fā)現(xiàn)新生兒因腦損傷所致的神經(jīng)行為異常，為臨床醫(yī)生進(jìn)行早期診斷提供依據(jù)。且早期對(duì)HIE患兒進(jìn)行NBNA評(píng)分可以協(xié)助判斷HIE患兒顱腦損傷的程度。本研究中S-100B蛋白陽(yáng)性患兒與Par-4 mRNA表達(dá)量陽(yáng)性患兒生后28 d NBNA評(píng)分比較無(wú)顯著性差異，但分別與兩者同時(shí)陽(yáng)性的患兒比較有顯著性差異，提示血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表達(dá)量同時(shí)陽(yáng)性的患兒預(yù)后相對(duì)較差。所以?xún)烧咄瑫r(shí)陽(yáng)性能更好地反映HIE腦損傷的程度且對(duì)預(yù)后判斷有一定價(jià)值。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)HIE患兒血清S-100B蛋白及Par-4 mRNA水平對(duì)早期判斷新生兒缺血后腦損傷特異性更高，且對(duì)早期判斷預(yù)后有一定價(jià)值，據(jù)此可早期干預(yù)以期改善預(yù)后，減少后遺癥的發(fā)生。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2014.23.029

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1008-8849(2014)23-2578-02

2013-08-10